本発明はヒトiPS細胞から骨芽細胞塊を製造する方法であって、(1)未分化ヒトiPS細胞を非接着培養して、胚様体の形成を誘導する工程、(2)上記工程(1)で得られたヒトiPS細胞の胚様体を非接着培養して、ヒトiPS細胞の中胚葉系細胞への分化を誘導する工程、及び(3)上記工程(2)で得られたヒトiPS細胞の中胚葉系細胞を非接着培養して、骨芽細胞への分化を誘導する工程を含む方法を提供する。【請求項1】ヒトiPS細胞から骨芽細胞塊を製造する方法であって、(1)未分化ヒトiPS細胞を非接着培養して、胚様体の形成を誘導する工程、(2)上記工程(1)で得られたヒトiPS細胞の胚様体を非接着培養して、ヒトiPS細胞の中胚葉系細胞への分化を誘導する工程、及び(3)上記工程(2)で得られたヒトiPS細胞の中胚葉系細胞を非接着培養して、骨芽細胞への分化を誘導する工程を含む方法。請求項1に記載の方法であって、前記工程(2)において中胚葉への分化を誘導するための成分としてレチノイン酸のみを配合した培地を用いる方法を除く、方法。前記工程(1)における培養時間が0.5〜3.5日間である、請求項1又は2に記載の方法。前記工程(2)における培養が、Wntシグナル活性化剤及びヘッジホッグシグナル阻害剤からなる群より選択される少なくとも一種の存在下で行われる、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。前記Wntシグナル活性化剤が、CHIR99021、6−ブロモインディルビン−3’−オキシム、ケンパウロン、SB−216763、SKL2001、デオキシコール酸、WAY−316606、NSC−693868、リシニン、7−oxo−β−シトステロール、IM−12及びHLY78からなる群より選択される少なくとも一種である、請求項4に記載の方法。前記ヘッジホッグシグナル阻害剤が、シクロパミン、AY9944、GANT58、GANT61、ジェルビン、SANT−1、SANT−2、U18666A、ベラトラミン、ビスモデギブ、Cur−61414、ロボトニキニン、JK184及びHPI−4からなる群より選択される少なくとも一種である、請求項4又は5に記載の方法。スタチン化合物からなる群より選択される少なくとも一種の存在下で行われる、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法により、ヒトiPS細胞から骨芽細胞塊を製造する工程、及び当該骨芽細胞塊を不活化処理する工程を含む、骨再生剤の製造方法。需要は非常に高まっている。して使用されている、ハイドロキシアパタイト等の非吸収性材料、及びβ−第3リン酸カルシウム等の吸収性材料は、自家骨と比較して骨誘導性に欠ける等の問題があり、外科的処置の予後が必ずしも良くなかった。Protein)等の成長因子タンパク質とを組み合わせたハイブリッド人工骨・骨補填材は、骨組織再生に重要な「細胞外基質」がないため、十分な骨再生効果を得ることができなかった。本発明は、ヒトiPS細胞を原料として、立体的かつ中実の骨芽細胞塊を得ることを課題とする。培養する方法により骨芽細胞塊を作製すると、マウスiPS細胞を用いた場合と異なり、細胞塊は得られるものの、当該細胞塊の形状は中空の袋状(嚢状)となってしまった。接着培養することにより、骨芽細胞塊を製造した旨の記載がされている。原料となる立体的な細胞塊として回収することができない。そのため、本発明者らは、非接着培養とする以外、非特許文献1に記載の方法に従い、培養を行ったところ、非接着培養だと、細胞死が引き起こされてしまい、必要となる細胞塊を得ることができなかった。これらの新たに見出された結果に基づき、本発明者らはさらに、鋭意研究した結果、胚様体の形成を誘導する工程、当該工程で得られた胚様体の中胚葉系細胞への分化を誘導する工程、及び当該工程で得られた中胚葉系細胞の骨芽細胞への分化を誘導する工程という3工程を経ることにより、非接着培養であっても、ヒトiPS細胞から袋状でない骨芽細胞塊を得ることができることを見出した。本発明者らは、当該新たな知見に基づき、培養条件等をさらに精査し、本発明を完成させた。従って、本発明は以下の項に示す方法を提供する:項1.ヒトiPS細胞から骨芽細胞塊を製造する方法であって、(1)未分化ヒトiPS細胞を非接着培養して、胚様体の形成を誘導する工程、(2)上記工程(1)で得られたヒトiPS細胞の胚様体を非接着培養して、ヒトiPS細胞の中胚葉系細胞への分化を誘導する工程、及び(3)上記工程(2)で得られたヒトiPS細胞の中胚葉系細胞を非接着培養して、骨芽細胞への分化を誘導する工程を含む方法。項2.項1に記載の方法であって、前記工程(2)において中胚葉への分化を誘導するための成分としてレチノイン酸のみを配合した培地を用いる方法を除く、方法。項3.前記工程(1)における培養時間が0.5〜3.5日間である、項1又は2に記載の方法。項4.前記工程(2)における培養が、Wntシグナル活性化剤及びヘッジホッグシグナル阻害剤からなる群より選択される少なくとも一種の存在下で行われる、項1〜3のいずれか1項に記載の方法。acid)、WAY−316606、NSC−693868、リシニン(ricinin)、7−oxo−β−シトステロール(7−oxo−β−sitosterol)、IM−12、HLY78等からなる群より選択される少なくとも一種である、項4に記載の方法。項6.前記ヘッジホッグシグナル阻害剤が、シクロパミン、AY9944、GANT58、GANT61、ジェルビン、SANT−1、SANT−2、U18666A、ベラトラミン、ビスモデギブ(Vismodegib)、Cur−61414、ロボトニキニン(Robotnikinin)、JK184、HPI−4等からなる群より選択される少なくとも一種である、項4又は5に記載の方法。スタチン化合物からなる群より選択される少なくとも一種の存在下で行われる、項1〜6のいずれか1項に記載の方法。項8.項1〜7のいずれか1項に記載の方法により、ヒトiPS細胞から骨芽細胞塊を製造する工程、及び当該骨芽細胞塊を不活化処理する工程を含む、骨再生剤の製造方法。本発明によれば、非接着培養を用いることによりヒトiPS細胞から立体的な骨芽細胞塊を得ることができる。本発明によれば、袋状でない中実の骨芽細胞塊を得ることができる。【図1】本願実施例における中胚葉細胞塊の形成を評価するための免疫蛍光染色の結果を示す。【図2】本願実施例における各試験の培養手順の概要と得られた細胞塊の写真を示す。Kossa染色、又はOsteocalcinの免疫蛍光染色の結果を示す。