低酸素模倣化合物(Desferrioxamine)を添加。【図4】本願実施例で用いたシーソー型バイオリアクターの概要を示す。【図5】本願実施例で用いた培養フラスコの概略図を示す。【図6】胚様体誘導期間がその後の中胚葉誘導に及ぼす影響((Brachyuryタンパク質発現))。本願実施例における中胚葉細胞塊の形成を評価するための免疫蛍光染色の結果を示す。【図7】胚様体誘導期間がその後の中胚葉誘導に及ぼす影響(Brachyury遺伝子発現)。本願実施例において種々の日数で胚様体誘導し、中胚葉誘導した場合のBrachyury遺伝子の発現量のグラフを示す。【図8】1日間の胚様体誘導による中胚葉誘導前後の中胚葉マーカー遺伝子発現に及ぼす影響。本願実施例における中胚葉誘導前後のBrachyury遺伝子の発現量のグラフを示す。【図9】CHIR99021およびCyclopamineが中胚葉誘導に及ぼす影響。本願実施例におけるBrachyury遺伝子の発現量に対するCHIR99021及びcyclopamine非存在下の影響に関するグラフを示す。おける骨芽細胞分化誘導した細胞塊とヒト凍結乾燥骨とのFTIR解析結果を示す。:ヒト凍結乾燥骨(FDBA)。おける三次元骨芽細胞塊の骨再生能の評価結果を示す。本発明は、ヒトiPS細胞から骨芽細胞塊を製造する方法であって、(1)未分化ヒトiPS細胞を非接着培養して、胚様体の形成を誘導する工程、(2)上記工程(1)で得られたヒトiPS細胞の胚様体を非接着培養して、ヒトiPS細胞の中胚葉系細胞への分化を誘導する工程、及び(3)上記工程(2)で得られたヒトiPS細胞の中胚葉系細胞を非接着培養して、骨芽細胞への分化を誘導する工程を含む方法を提供する。本発明の方法は、未分化ヒトiPS細胞を非接着培養して、胚様体の形成を誘導する工程を含む。原料として用いるヒトiPS細胞としては、体細胞に核初期化物質を導入することにより作製されたものを用いることができる。)、及びそれらの前駆細胞(組織前駆細胞等)等が挙げられる。細胞の分化の程度に特に制限はなく、未分化な前駆細胞(体性幹細胞も含む)であっても、最終分化した成熟細胞であっても、同様に本発明における体細胞の起源として使用することができる。組織幹細胞(体性幹細胞)が挙げられる。本発明において「核初期化物質」とは、体細胞からiPS細胞を誘導することができる物質(群)であれば、タンパク性因子又はそれをコードする核酸(ベクターに組み込まれた形態を含む)、あるいは低分子化合物等のいかなる物質から構成されてもよい。核初期化物質がタンパク性因子又はそれをコードする核酸の場合、好ましくは以下の組み合わせが例示される(以下においては、タンパク性因子の名称のみを記載する)。Sox17又はSox18で置換可能である。Klf2又はKlf5で置換可能である。L-Mycで置換可能である。(2008)を参照)。