Y=C/T)と'promiscuous'であり、Cas9オーソログのほとんどがG-richなPAMを認識するのに対して、CdCas9はG-lessなPAMも認識する。協働に依存することを明らかにした。研究グループはCdCas9のPAM配列についても、改めて、CdCas9-sgRNA22によるプラスミド切断実験で検証し、第1/2塩基には縛りがなく、第3塩基のRが必須であり、第4塩基から第6塩基にはアデニンへの偏りが存在することを見出した。vitroでのDNA切断速度が遅く、ヒト細胞内では標的にindelsを誘導しないことが、報告されていた。21-および22-nt)。DNA切断実験を行い、sgRNA20では先行研究同様にDNA切断活性を示さなかったが、sgRNA21~sgRNA24を使用した場合はCdCas9がDNA切断活性を示し、sgRNA22が最適であり、SpCas9よりも遅いが2分以内にDNAを切断することを特定した。vitro実験結果と異なり、いずれも編集活性を示さなかった。CdCas9-sgRNA22がTet1EX4とTet1EX12に対してそれぞれ5%と8%の編集効率、CdCas9-sgRNA24がTet1EX12に対して56%の編集効率を示した。CdCas9のDNA切断機序は他のCas9オーソログと類似していることを示唆する構造であった。CdCas9とsgRNA結合の構造基盤およびPAM認識の構造基盤についても、他のCas9オーソログと比較しながら詳細に論じた。2019-04-25.腫瘍浸潤T細胞は高頻度で抗腫瘍性を失う。CD8+T細胞は、コレステロールを取り込み、免疫チェックポイント分子を高発現させ、疲弊。(ERストレス)が上昇し、免疫チェックポイント分子発現亢進。ERストレスのセンサーXBP1が活性化され、PD-1と2B4の転写を調節。(原論文Introductionに準拠)腫瘍浸潤CD8+T細胞は、抗原に繰り返し暴露され、また、腫瘍微小環境による免疫抑制を受けて、徐々に抗腫瘍活性を失い疲弊し、PD-1、LAG-3、TIM-3、2B4、CTLA-4といった免疫チェックポイント分子を高発現するに至る。免疫チェックポイント分子、中でもPD-1、を標的とする抗体による癌免疫療法はかってない著効を示すが、一方で、低い奏効率、毒性および再発の課題を伴うことから、免疫チェックポイント発現の調節機構と、免疫チェックポイントを標的とする新たな戦略が必要とされている。これまでに、PD-1の発現を調節する因子として、STAT3、STAT4、NFATc1、T-bet、およびBlimp-1といった転写因子や、DNAメチル化やヒストン修飾が報告されてきた。TIM-3の発現を調節する因子として、T-bet、AP-1およびc-Junが報告されている。2019-04-17.がん化学予防は、天然物、合成または生物学的製剤を利用して、発がんの初期または前がん状態の細胞のがん細胞への進行を、逆行、抑制または予防する手法を言う。国立がんセンターの研究チームは今回、がんの初期段階の'hallmark'とされた細胞増殖とアポトーシスを指標とする化合物スクリーンに替えて、正常細胞または良性腺腫の悪性形質転換を予防する観点からの化合物スクリーンを行ない、大腸がんの化学予防薬候補として既存の抗真菌薬を同定した。約1900サンプル)由来の既存薬1,280サンプルを対象として、それぞれ未分化状態の維持と炎症反応の誘導に関与する転写因子TCF/LEFとNF-κβの活性を抑制し、抗酸化ストレスに寄与する転写因子NRF2の活性を亢進する化合物8種類を大腸がん予防薬候補として同定した。eNews)で評価し、イトラコナゾールが腸ポリープ形成を顕著に抑制することを見出した。この抑制効果が、部分的に、イトラコナゾールのコレステロールの細胞内輸送阻害を介した転写因子の活性調節に由来することが、示唆された。repositioning/repurposing/reporiling)*が創薬の手法として有効であることを示した。ドラッグ・リポジショニングは、長い時間と巨額の経費を必要とし、また、候補薬のドロップアウトが発生する段階である安全性試験の回避が可能になることから、注目を集めている創薬手法である。Cas12bの中で、より小型で標的特異性がより高いCas12bゲノム編集ツールボックスを拡張した。新奇Cas12bによる拡張その特徴から応用展開が期待されるCas12bの中で実用になっているのはAsCas12bとAkCas12bの2種類だけであある。S1引用左下図参照)について、dsDNA切断活性を測定した。a/b引用右上図参照)。BsCas12bについては、多重sgRNAsを利用した4重同時編集が可能なことを実証した。2015)の間にもあることが、報告されている。研究チームは、8種類のCRISPRシステムの間で、Cas12bオーソログのアミノ酸配列と、pre-crRNA:tracrRNA二本鎖のDNA配列ならびに2次構造の保存性が高いことを見出し、前述の互換性の検証実験を行なった。そこで、CRISPRアレイが不明なCas12bに、同系ではないsgRNAsを組み合わせる実験を進めた。