DCPS)遺伝子がAML細胞生存に必須であることを同定。DCPS阻害剤RG3039はAML細胞に毒性を示すが、正常血液細胞を障害せず、DCPSの機能喪失β両アレル変異を帯びたヒトには血液学的異常が見られないことから、DCPSはAMLの治療標的。2018.CRISPR-Casシステムのコアになるタンパク質に加えて、バクテリアやアーケアのゲノム上にCRISPR-Casと共存するタンパク質遺伝子が散在する。Kooninらは今回、新たに定義した'CRISPRicity'の計算から、これまで知られていなかった80種類のCRISPR-Cas相関遺伝子を同定した。2018.DNA二本鎖切断を回避したBE技術(関連crisp-bioブログ記事)が開発されてきた。西南大学の研究チームは今回BE3を利用して、無脊椎動物のカイコにおいてC->Tの高効率変換を実現し、塩基編集を介してナンセンス変異誘導効率66.2%を達成。Mori遺伝子の96.5%にBE3の標的サイトが存在し、14箇所に対して14箇所までのBE3同時適用が可能なことも確認した。aeruginosaはファージに対する免疫応答システムCRISPR-Casを備えている。CRISPR配列の解析)の経年変化から。idellus;ソウギョ)は中国において大きな経済的損失をもたらしている。JAM-AがGCRV感染の必須遺伝子であることを同定。2018.CRISPR-Casゲノム編集の臨床応用にはオフターゲット変異の同定が必須である。vivoでのオフターゲット同定法は実現されていない。(VIVO)法を開発した。vivoで相当なオフターゲット変異を誘導することを確認した上で、適切にgRNAを設計することで検出可能なオフターゲット変異の誘導を抑止することが可能なことを示した。Mar;20(3):228-230.エクソソームエクソソームは、各種の正常細胞や癌細胞から分泌される脂質二重膜に囲まれた不均質なナノスケールの小胞であり、細胞間コミュニケーションを担い、腫瘍細胞由来エクソソームは癌の悪性化や転移に関わるとされ、バイオマーカや治療標的として注目を集めている。PubMedによれば2017年にexosomes関連論文が1,794報刊行されている(2018/02/28時点)。NIH3T3細胞とET2B細胞の計27種類の細胞からの分泌ナノ粒子を分画・測定し、いくつかの細胞については透過電顕解析で検証した。nm)も細胞から分泌されることを見出してこれを'exomere'と命名した。nmと小さなエクソソーム(Exo-L)の2種類のサブセットに分類できることを明らかにした。MPa)3ナノ粒子はサイズを異にするだけでなく、カーゴ(核酸、脂質、グリカン、タンパク質)を異にするラベルフリーMSによりマウスメラノーマ株B16-F10、マウス膵臓癌細胞株Pan02、マウス乳癌細胞株4T1、ヒト膵臓腺癌株AsPC-1およびヒト乳癌細胞株MDA-MB-231-4175のプロテオーム解析し、exomere、Exo-SおよびExo-Lについて、それぞれ、165-483種類、433-1,004種類、247-1,127種類のタンパク質を同定し、また、ナノ粒子それぞれに特有なタンパク質を同定。ECRT複合体の構成因子がExo-S/Lにはエンリッチされていたが、exomereにはほとんど見られなかった。/結合、後期エンドソーム、トランス・ゴルジ網のタンパク質がエンリッチされていた。凝固系に関するタンパク質、およびExo-SとExo-Lには見られない類の脂質がエンリッチされていた。Alix1、Tsg101、HSC70(HSPA8)およびHsp90の発現を比較した結果、フロチリンのFLOT1とFLOT2がExo-Sのマーカであり、HSP90AB1が比較的exomereと相関し、また、CD9/CD63/CD81がいずれもExo-S/Lと相関するがその発現パターンが細胞型とExo-SかExo-L如何に依存することを見出した。マウスメラノーマ、ヒト膵臓腺癌株およびヒト乳癌細胞株については、N-結合型グリコシル化のプロファイリングと脂質組成、核酸のプロファイリングも行った。細胞型依存性と組成のナノ粒子依存性、核酸(RNA/DNA)の量やサイズの細胞型とナノ粒子への依存性を同定した。エクソマーもexmeresも造血組織(肝臓、脾臓および骨髄)に取り込まれるが、Exo-Lはリンパ節向性を示し、exmeresは主として肝臓に取り込まれることから、Exo-Lが癌の転移にかかわり、exmeresが癌進行時に肝臓における代謝のリプログラミングに関与することを、著者らは示唆した。6259–6269.著者らは先行研究で特定の癌に作用し、他の癌や正常な繊維芽細胞と免疫細胞には影響を与えない選択的低分子TJ191(2-Amino-3-methylcarboxy-5-heptyl-thiophene)を合成していた(600倍の選択性)。今回、10種類のヒトT細胞白血病/リンパ腫と末梢血単球のパネルで、TJ191の選択性がTβRIIIの発現と逆相関することを見出し、TβRIIIのCRISPR/Cas9ノックアウトにより、TJ191耐性の細胞がTJ191に感受性を部分的に回復することを示した。vivoで、Cas1-Cas2がスペーサを標準的CRISPRアレイに似た領域(オフターゲット)に挿入するが起こることを見出した。islandicusにおいてオフターゲット・スペーサ挿入が推定される事例を同定した。tumefaciensによる形質転換とCRISPR/Cas9による変異導入のプロトコルを確立;マメ科植物において共生に関与する遺伝子4種類をノックアウトした変異体を3ヶ月で作出し、6ヶ月で表現型を分析。20.SpCas9はそのHNHとRuvC活性部位によってそれぞれ標的鎖(tDNA)と非標的鎖(ntDNA)を切断する。オハイオ州立大学の研究チームは今回、Cas9が付着末端(1塩基のオーバーハング)を生成することを見出した。最初の切断後に、RuvCが3'から5'に向かって、PAMから遠位の-10塩基の位置まで分解を継続すると共に、5'から3'に向かって分解し平滑末端を生成することを見出した。planta遺伝子ターゲッティングを試み、修復テンプレートをゲノムから切り出することなく遺伝子ターゲッティングが実現されることを見出した。engineering)とCRISPR/Cas9のカウンターセレクションを組み合わせることで、実現した。aureusの3種類の菌株と臨床分離株6株に効率よくssDNAオリゴヌクレオチドを相同組み換え挿入することを同定した。aureusでは、リコンビナーゼを伴わないssODNのエレクトロポレーションでも組み換えが発生した。次に、温度感受性の2ベクターシステムにより条件付きリコンビニアリングとCas9カウンターセレクションを実現した。aureusゲノムに点変異の導入と大規模な遺伝子欠失を帯びた組み換え体の大量生産に成功した。2018.組織特異的エンハンサーでCas9発現をドライブ。20;18(1):210.PDTが誘導するオートファジーが癌細胞に細胞死をもたらすとする報告と、細胞生存が維持されるとする報告が相半ばしている(原著参考文献18)。ワルシャワ大学の研究チームは今回、単独ではオートファージの初期段階を阻害するフォトフリンが、フォトフリンPDTでは、オートファジーを活性化することを見出し、CRISPR/Cas9でATG5をノックアウトすると、HeLa細胞のPDT細胞毒性に対する感受性が高まり、細胞死が亢進し、カルボニル化タンパク質が蓄積する。22.ゲノム編集対象のヒトを含む動植物細胞へ、Cas9またはCpf1タンパク質とgRNAをRNPとして送達する手法が、より高効率で高精度なゲノム編集を実現する。RNPに必要な比較的長いgRNAを大量の細胞に導入するに十分な量化学合成は効率と経費の点で非現実的なため、gRNAは通常T7やSP6といったファージRNAポリメラーゼによるIVTで構築される。このファージRNAポリメラーゼで生成するgRNAの5'末端には、自然免疫応答を誘導するトリホスフェート(ppp)が存在する(下図参照)。gRNAsがDDX58受容体に認識され、I型インターフェロン応答を活性化し、〜80%の細胞死を誘導することを見出した。5'-pppをホスファターゼで除去して5'-OHとしたgRNAとCas9またはCpf1とのRNPによって、ヒトCD4陽性初代T細胞の突然変異誘発率95%を達成した。gRNAsよりも編集効率が高いとするこれまでの報告と整合する。KOを確認し、KOラットがグレリンに応答しないことに加えて、WTラットよりも食餌量が少なく、低体重で、褐色脂肪組織が多いことを見出した。Xieを責任著者とする15ページのレビュー;基礎、応用(ヒト疾患;家畜;エピゲノム調節;生細胞ゲノム可視化;遺伝子発現活性化と抑制;塩基編集(BE);遺伝子ドライブ;送達法)および展望。重なることを報告していた。)をノックアウトし、その欠損に伴う表現型を明らかにした(下図参照)。モデル足り得ることを示した。多シストロン性tRNA-gRNAまたはcrRNA-crRNAアレイを包含するイントロンを融合したハイブリット1遺伝子から、内在tRNAプロセシング機構またはCpf1のRNazeを利用して、gRNAsまたはcrRNAsを同時多重生成。Cpf1とイントロン性crRNAアレイからなるハイブリッド遺伝子ベクターを利用すると、通常のCpf1ベクターよりも極めて高い効率での編集実現。