21.CRISPR/Cas9とCRISPR/Cas12aによって、シアノバクテリアの遺伝子置換、マーカーレス点変異、および遺伝子ノックアウトとノックインの多重化が効率的に実現された;CRISPRiによる内在遺伝子の発現抑制により、競合パスウエイのフラックスを低減して目的とする化合物産生へとフラックスを向けることも実現された。H16は水素細菌の一種であり、バイオプラスチックの産生や遺伝子組み換えによるブタノール産生などで関心を集めている。eutrophaへのCRISPR-Cas9のエレクトロポレーションが制限修飾(restriction-modifcation:RM)系による制約を受けることを見出した。MG1655との比較からRM系に関与する5種の制限酵素遺伝子を推定し、そのノックアウト実験を行い、H16_A0006とH16_A0008-9のノックアウトによりエレクトロポレーションの効率がそれぞれ1,658倍と4倍へと向上することを見出した。果糖によりアラビノース誘導性BADプロモーターのリーキーな発現を抑制することでcas9発現を最適化し、相同組換えを介した遺伝子編集を実現し、5種類の遺伝子の編集を78.3~100%の効率で実現した。CRISPR-Cpf1とNHEJを介した遺伝子編集は実現しなかった。29.TALENやCRISPR/Cas9を利用した外来遺伝子を含まず精密、迅速かつ効率的な遺伝子編集が可能になり、また、ジャガイモのゲノムが解明され、効率的な形質転換技術が開発されたことによって、ジャガイモの遺伝子工学が大きく進展した(下図は、レビューから引用したFig.1)。zingiberensisは、ステロイドホルモンの出発物質であるジオスゲニンを産生する薬用植物である。zingiberensisのゲノム編集を初めて実現した。20.様々な研究グループが開発したハイスループット機能ゲノミクスに利用可能なプール型CRISPRライブラリーを、Addgeneから実費で入手可能であるが、利用者はそれぞれの研究目的に合わせてライブラリーをカスタマイズする必要があり、それには、かなりの時間、作業および経費がかかる。RNPsを利用してコンベンショナルなライブラリーを簡便にカスタマイズする手法を開発した。rc-gRNAs)を設計する。単一遺伝子を標的とする検証に加えて、プール型CRISPRライブラリーからCas9とrc-gRNAのRNPにより、FDA承認薬に関連する27種類のキナーゼ遺伝子を標的とする81種類のgRNAsを同時に除去したカスタム化ライブラリーによるハイスループット・スクリーニングが可能なことも実証した。(リラックス状態からループまたはリング構造へ、続いて、捩じれながらさらにコンパクトなクラスターへ)で急速に凝縮することを見出した。グルコース飢餓に起因する効率的rDNA凝縮には、コヒーシン複合体ではなくコンデンシン複合体が必要であることが明らかになった。rDNAに結合したdCas9が発現している細胞の生存にDNAヘリカーゼSgs1が必須であることを見出した。dCas9が結合した部位におけるDNA複製へのヘリカーゼの関与が示唆された。jejuni由来Cas9とLbCpf1;VegfaまたはHif1αを標的とするLbCpf1は、眼球組織おける当該遺伝子発現を阻害し、脈絡膜血管新生を抑制し、オフターゲットは非検出。mapping)以後、酵素の利用、蛍光タンパク質タグの遺伝的導入、細胞のバーコンディングなどの技術によって発展してきたが、近年、ルネサンスが進行しつつある。細胞系譜を追跡する上で目印となるゲノム変化を、CRISPR-Cas9やCre-loxP部位特異的組換えによって生成し、一細胞RNA/DNAシーケンシングによって、各細胞の広範かつ多様な目印を読み分けることで、1回の実験で多数の細胞系譜を追跡することが可能になった。system***が取り上げられている。10種類のloxPサイトを9種類のシロイヌナズナ遺伝子由来のユニークな178塩基長配列で繋げたカセットをRosa26遺伝子座に組み込んだ人工DNA組換えサイトPolylox****によるマウスの造血幹細胞の系譜解析の事例も取り上げられている。coliの機能ゲノミクスで検証した。coliの機能ゲノミクスを進めた。Tn-seq)に優ることを示した。