(dCas9-VPR)による十分な遺伝子発現活性化を実現した。vitro実験ラットの大脳皮質、海馬および線条体由来の初代神経細胞において、遺伝子のクラスやサイズに左右されない遺伝子発現活性化を確認した。多重sgRNAsによる単一遺伝子の相乗的な発現活性化や、異なる一連の遺伝子の発現を同時に活性化することも確認した。(dCas9-KRAB)による発現抑制も、転写開始点近傍を標的とすることで可能なことを確認した。BDNF)をモデルとして、特定の転写物を選択的に上方制御することが可能なことを示した。I-IXaにはそれぞれの上流に独自のプロモーター領域が存在することから、プロモーターの組み合わせによって多様な転写物が生成される。vivo実験CRISPRaをレンチウイルスにより成体ラットの前頭前皮質、海馬および側坐核に注入し、選択的な遺伝子発現活性化を実証した。2018-12-12.クロマチン構造がゲノム編集効率に影響を与えると考えられているが、その影響の定量は困難であった。1引用下図左参照)を開発し、表題の結果を得た。2018-12-14.癌細胞で見られるPTEN発現不全は、変異、転写抑制および遺伝子サイレンシングなどに起因する。(VPR)-sgRNAにより、メラノーマ細胞株とトリプルネガティブ乳癌細胞株において、sgRNAの推定オフターゲット部位における転写に影響を与えることなく、PTEN発現の亢進を実現した。その結果、下流の発癌パスウエイが抑制され、B-RafまたはおよびPI3K/mTORの阻害剤の存在下で、マラノーマ細胞株の遊走が抑制されコロニー形成が阻害された。(FTLD-tau)の病因である。Psychiatry誌で報告した。p.R406Wキャリア患者由来iPSCから誘導したニューロンと、CRISPR/Cas9で遺伝子変異を修復したアイソジェニックなニューロンのトランスクリプトームの比較から、発現に有意差がある328遺伝子を同定した。ニューロンの比較から同定した遺伝子の中で61遺伝子は、脳組織においてもニューロンの場合と同様な差異を示し、また、GABA受容体を含むパスウエイとシナプス前の機能にエンリッチされていた。mediterraneiの交雑実験でも染色体全体にわたってスペーサが獲得される。(T3SS)を活性化する。広範な疾患の病因が、相同染色体に由来する遺伝子2コピーの一方のコピーが不活性になり、遺伝子発現量が著しく低減することで発症するハプロ不全症とされ、660種類を超えるハプロ不全遺伝子が同定されてきた。2016)から、ハプロ不全遺伝子は3,000種類を超えるとされた。サイズがrAAVの許容範囲に収まらない対象遺伝子が多々ある、といった課題を伴っていた。(microdeletion)の修復には適用が困難であり、オフターゲット編集の問題も完全には解決していない。UCSFの研究チームは今回、量的形質である肥満をハプロ不全症のモデルとして、通常のCRISPR/Cas9遺伝子編集と異なり二本鎖切断過程を経ることのないCRISPRaによってハプロ不全症を治療可能なことをマウスにおいて実証した。(Mc4r)のハプロ不全に起因する肥満を対象として概念実証実験を行った。ヒトのSIM1ハプロ不全は過食と肥満を、Sim1ヘテロ型変異マウスも過食と肥満を呈するがヒトSIM1の過剰発現により正常化することが知られている。kb遠位に位置するエンハンサーを標的とするsgRNAに基づくCRISPRaよりSim1の発現を上方制御しSim1ハプロ不全に起因する肥満をレスキューした。Sim1の上方制御がプロモーターまたはエンハンサーが活性な組織に限定されており、sgRNAの標的としたシスエレメントが組織特異性を決定していることが示唆された。RNA-seqとChIP-seqからも、オフターゲット編集非検出の高い組織特異性を確認した。CRISPRaシステムをrAAVでマウスの視床下部へ送達することで、Sim1(+/-)マウスの過剰な体重増加を抑制することも確認した。ヒトMC4Rのヘテロ型変異は重症肥満の主因であり、マウスのMc4rのハプロ不全も肥満に至る。(+/-)マウスにおいても、Mc4rのプロモーターを標的とするCRISPRaのrAAVを介した視床下部への到達による体重抑制効果を確認した。展望CRISPRaは、ハプロ不全およびその他の遺伝子量の異常が原因となる機能不全の治療手段として有望である。(SynBio)は、互いに直交する調節回路を組み合わせて植物の代謝プログラムと発生プログラムの書き換えを目指している。(PTAs)/CRISPRa)の開発が進んできた。(gRNA2.1)方式でdCas9に融合するdCasEV2.1に到達した。ベンサミアナタバコにおいて実証実験:dCasEV2.1の転写活性化率は標的プロモーターの本来の活性に依存するが、天然では活性が低いジヒドロケンペロール-4-レダクターゼ(DFR)の活性を10,000倍まで向上した;トランスクリプトミクスから、標的選択性がゲノムワイドで十分高いことを確認した。1引用下図参照)実験を行った。2′F-ANAおよび2′,5′-RNAを含むより広範な化学修飾を許容するなど、CRISPR-Cas9活性との化学的適合性と構造活性相関の法則が見えてきた。PAMと3'ヌクレオチド・モチーフならびにスペーサの長さと方向決めに、決定的な役割を果たすことを明らかにし、さらに、Cas4タンパク質の中でこの機能の鍵となるアミノ酸を同定した。(スペーサ獲得・組込)の効率を顕著に低減し、前者が、PAMに依存する非定型的スペーサ組込またはPAMに依存しないスペーサ組込を高頻度で誘導し、後者がスペーサ獲得を阻害することを同定した。(免疫応答)を逃れることが示唆された。acidiphilusから同定した。AaCas12bは、Cas12aと異なりcrRNA/tracrRNA二重鎖で誘導され、5′-TTNをPAM配列とし、切断部位に粘着末端をもたらす。遺伝変異マウスモデル作出を実証し、全ゲノムシーケンシングではオフターゲット編集が検出されないことを確認した。AaCas12bは、広い温度域に加えて広いpH値域で活性を示し、また、そのRNPがヒト血漿内で安定しているという特徴を備えている。