ampliPHOX比色検出法の模式図。(A)ビオチン化ターゲットDNAは、配列内の各スポットにハイブリダイズされ、そして(B)ampliTAGで標識。(C)ampliPHY溶液を添加し、(D)目に見えるポリマーのスポットを形成するために光にさらされる。(E)に形成されたポリマーのスポットが続いてコントラストを向上させるために、非毒性の色素で染色されています。ontent">図2(A)インフルエンザの低密度マイクロアレイのレイアウト。シーケンス1-7と10から13までのターゲットインフルエンザ、およびシーケンス8,9ターゲットインフルエンザB.(B)ampliPHOXとの両方で同一の検出パターンを示す2009年新型H1N1("豚インフルエンザ")標本の(C)蛍光画像方法。図3左からインフルエンザH3N2、ヒト起源H1N1、2009年新型H1N1(豚由来)、および負の試料のための右の、代表的なampliPHOXイメージに。すべての3つのサブタイプは、アレイ上で視覚的に明確なパターンを示す。PCRの増幅が阻害されなかったことを示す、見ていることを否定的に注意してください。librarian.Discussionここで紹介するampliPHOX比色検出技術は、低密度マイクロアレイのアプリケーション用の単一のカラー蛍光検出に迅速に、安価な代替品です。図1に模式的に示すように、検出原理は、光開始剤のラベルを使用する(1B)に基づいています。モノマー含有溶液(1C)、光照射の存在下で光重合開始剤(ampliTAGが)のみというラベルの領域(1D)の重合反応をトリガします。インフルエンザの識別およびサブタイピングのためのDNA配列にここに示されていますが、技術は、マイクロアレイ上に捕捉された任意のビオチン化製品を検出するために拡張することができます。例として、異なる試薬の化学反応を用いて光重合ベースの検出については前の仕事は、核酸と抗体ベースのアレイの両方で実証された。12その他にも光重合ベースのシステムの抗体とタンパク質ベースのアプリケーションのための概念実証を示している。​​の化学的性質を利用した。13,14インフルエンザ低密度マイクロアレイと代表的な画像の概略図を図2に見ることができます。図2Aに示すように、配列は/コントロール(赤)と14のユニークなキャプチャシーケンス(青で)、三重の各斑点のあるスポッティング空間マーカが含まれています。merの)オリゴヌクレオチドである。キャプチャシーケンスは異なるインフルエンザのサブタイプのチップ上で明らかに異なるパターンを生成するように設計されています。-2009新型H1N1の検体の検出と伝統的な蛍光の直接比較を示す。aQuire)を使用して生成されました。同じ全体的な検出パターンが簡単にメソッドの両方で見ることができます、しかし、ampliPHOXの結果が肉眼で見えるようになります。図3に示す3つの代表的なインフルエンザここで記述されたプロトコルによって処理されるように陽性検体と負標本からampliPHOX結果です。図3a、3bと、そして人間の原点それぞれH3N2、ヒト起源H1N1、豚起源インフルエンザ(2009年新型H1N1)、のための3Cショーの結果。全体の検出パターンの大きな違いは、簡単にこれらの3つのイメージのために見ることができます。起源については新型インフルエンザの検体を信号を生成する(3C)。このアプローチは、マイクロアレイ上で正常型およびサブタイプのインフルエンザウイルスに以前に使用されています。PCR反応の阻害や故障がないことを示す、内部統制のシーケンス上の信号を示しています。これらの画像の解釈が容易にampliVIEWのソフトウェアで自動化されています。ユーザは、最初にこのレイアウトのための一定の"答え"を生成するために存在する必要のあるターゲットを記述するためにその後マイクロアレイのレイアウトを定義する、とするソフトウェアを使用しています。図2Aに示すように、インフルエンザのレイアウトは、に応じて、そのような"インフルエンザ陽性"、"インフルエンザBポジティブ"、"非季節性インフルエンザ"、"季節性インフルエンザ"、そして"負"のような論理的な結果を生成することができます望ましい成果。これらの論理的な割り当​​てが行われ、保存されると、ソフトウェアが自動的に少しユーザー入力と結果を提供するために、画像を解釈することができます。ampliPHOX検出技術は、数分で蛍光と似て感度と低密度マイクロアレイ用のビジュアル、発色結果を生成します。我々は信じての組み合わせで使いやすい、低コストの機器で安価な試薬は、より多くのターゲットに特にとして、従来のマイクロアレイの検出方法に魅力的な代替手段を提供する、低密度診断/ゲノムマイクロアレイますます様々なアプリケーションで使用されるようになった。librarian.Disclosures著者のすべてはInDevR、(株)、非営利のエンティティの従業員です。InDevRは、本明細書に記載ampliPHOX技術を商業化されています。U01AI070276とR43AI077112を認めている。gdpr@jove.com.。