アッセイや死細胞アッセイは、ドラッグスクリーニングや各種物質の毒性分析に用いられている。ヌクレオチド取り込み活性などといった細胞機能を対象にしている。Blueの死細胞と生細胞の染め分けによる細胞数計測法があるが、染色されないという条件だけでは、細胞増殖能を持った細胞と増殖能を失った細胞との区別ができない。使用されるようになってきた。おいて、MTTアッセイは、生細胞中のミトコンドリアの脱水素酵素活性をベースにした方法で、最もよく用いられている。MTTは細胞膜を透過し、ミトコンドリアに集積し、補酵素であるリボフラビンにより還元され、紫色のMTTホルマザンとなる。水溶性が低いため、MTTホルマザンは針状結晶となる。したがって吸光度を測定する前に、結晶を有機溶媒で溶解しなければならない。加えて、MTTホルマザンの結晶が析出してくることによって細胞膜が壊れ細胞が死滅してしまう。培地を除く操作では、浮遊してきた細胞を吸い込んでしまい各ウェル間のエラーが大きくなる。脱水素酵素を指標としたアッセイ小社では各種WSTを開発してきた。死細胞アッセイへの応用が可能である。WST-8は安定で、乳酸脱水素酵素の補酵素であるNADHから電子伝達物質を介して電子を受け取り還元されて高水溶性のWST-8ホルマザンとなる。PMSを含み、冷蔵保存で1年間安定である。Kit-8を用いたアッセイの後に、追加でアッセイすることも可能である。脱水素酵素を指標としたアッセイは、複数の要因が関わりあう。脱水素酵素、NAD、NADH、ミトコンドリア活性などである。MTTアッセイはミトコンドリアの脱水素酵素活性のみであるので、ミトコンドリア活性を反映する。Kit-8はMTTよりも高感度に測定ができる。ホルマザンが水溶性であるので、溶解のプロセスが不要なため、発色後は直ちに吸光度を測定することができる。Kit-Fは細胞増殖アッセイキットであるが、これは細胞のエステラーゼ活性を指標としたものである。Calcein-AM、BCECF-AM、CFSE、FDAなどは無蛍光であるが、細胞膜を透過し、細胞内のエステラーゼで加水分解され蛍光を発するようになる。したがって、生細胞活性をエステラーゼ活性を指標として測定することができる。細胞膜を透過した後は、加水分解されて蛍光性になるが、化合物によって長時間細胞内にとどまるものと、細胞外に放出されるものがある。Center皆さまの実験を失敗させないために技術的なお困りごとや、ご相談・ご要望などお気軽にご相談ください。当社は、皆さまの実験が早く成功できるよう技術者が一緒に考える体制を整えております。9:00-17:00(土・日・祝日を除く)※フリーコールがつながらない場合はこちらをご利用ください。