DG-NPは、デキストラナーゼを含む培地での優れた膨潤および分解特性によって特徴付けられました。薬物放出研究は、DG-NPからの効率的な骨形成タンパク質(BMP)放出が、負荷されたBMPの90%以上が放出される分解条件下で12日間以上維持されることを示しました。24時間の細胞毒性試験では、DG-NPに起因する関連する細胞損傷は認められませんでした。)チャネルに及ぼす影響を調査します。ラットCASMCは、酵素消化法によって分離されました。電流は、室温の全セル構成でパッチクランプ技術により記録されました。Lで適用した場合に観察されました。電流が用量依存的に増加しました。電流の443.1%±22.1%は、それぞれ上記の濃度で増加しました。電流が徐々にブロックされました。MMP-3)は、腫瘍の浸潤と転移に関与することが知られている酵素です。この研究では、ケルセチン、ケンペロール、ゲニステイン、ゲニスチン、ダイゼインなどの野菜や果物のフラボノイドを、MDA-MB-231乳癌細胞株のMMP-3の分泌と活性を調節する能力についてテストしました。MTTアッセイを使用して、フラボノイドの毒性濃度範囲を評価しました。MDA-MB-231細胞が侵入する能力は、改変ボイデンチャンバーシステムを使用して評価されました。MMP-3の活性は、カゼインザイモグラフィーによって決定されました。MMP-3の分泌は、ウエスタンブロッティング、カゼインザイモグラフィーを使用して評価され、ELISAによって確認されました。ウサギ小腸からの縦および円形の平滑筋の自然収縮におけるタキキニン受容体の役割を研究し、サブスタンスP(SP)の作用機序を決定する。セグメントが準備されました。等尺性力変換器を介してコンピューターを使用して、縦横の平滑筋の自然収縮を記録しました。タキキニン受容体の特定のアゴニストおよびアンタゴニストが臓器浴に追加されました。SP)、NK2受容体(NKAおよび(β-Ala8)-NKA)、およびNK3受容体(NKBおよびSenktide)のアゴニストはすべて、小腸の収縮を誘発しました。218795によって減少しました。SPによる収縮も、アトロピン、ベラパミル、PKC阻害剤スタウロスポリン、PLC阻害剤U73122によって減少しました。タキキニンNK1、NK2、およびNK3受容体は、ウサギの腸の平滑筋の収縮を仲介します。SPはタキキニンNK1受容体を介して平滑筋細胞に直接作用します。タキキニン(TK)は、哺乳類の中枢および末梢神経系全体に分布する神経ペプチドのファミリーです。ハーブ誘発性肝障害(HILI)の症例数が増加していることが報告されており、新しい臨床的課題を提示しています。Thunb(PmT)を例にとり、HILIの分子メカニズムを調査するための計算システム毒性学アプローチを提案しました。PmTの化学成分は、3つの主要なTCMデータベースおよび天然物に関連する文献から抽出されました。次に、データ統合を通じて既知のターゲットを収集し、潜在的な化合物とターゲットの相互作用(CTI)を、サブストラクチャー薬物ターゲットネットワークベースの推論(SDTNBI)メソッドを使用して予測しました。HILIの症状を評価することにより肝毒性関連遺伝子をスクリーニングした後、化合物と標的の相互作用ネットワークが構築されました。スコア関数、すなわち、Ascoreは、肝臓における化学物質の毒性を推定するために開発されました。CYP450酵素との相互作用の予測などの分析ツールを使用して、二相性効果の可能なメカニズムを決定しました。CTIが得られました。+)の歪んだ細胞質蓄積は、白血病の病因と密接に関連しています。アポトーシスを誘導できるかどうかを調査することでした。NPM1遺伝子変異を保有するOCI-AML3細胞株を調べました。細胞増殖はMTTアッセイにより検出されました。フローサイトメトリーとヘキスト33258染色を使用して、細胞アポトーシスを評価しました。関連タンパク質の発現と細胞内局在は、ウエスタンブロットと免疫蛍光染色によって検出されました。mRNA発現はRT-PCRによって検出されました。+タンパク質の核移行を伴うOCI-AML3細胞のアポトーシスを誘導しました。オリドニンは、Crm1(核輸出シグナル含有タンパク質の輸出受容体)の発現を変化させなかったが、Crm1の核移行を誘発した。(+)異性体であるデキシブプロフェンは、神経変性障害の治療に効果的な治療薬です。その臨床使用は、限られた脳分布によって妨げられています。この研究の目的は、脳を標的とするデキシブプロフェンのプロドラッグを設計および合成し、生体内分布と薬物動態分析を使用して脳を標的とする効率を評価することでした。生体試料中のデキシブプロフェンの濃度は、高圧脂質クロマトグラフィー(HPLC)を使用して測定されました。得られたデータと統計を使用して、血漿および組織中の薬物の薬物動態パラメーターを計算しました。エタノールアミン関連構造を含むように変更された5つのデキシブプロフェンプロドラッグが設計および合成されました。NMR、IR、およびHRMSを使用して確認されました。kgのデキシブプロフェンに相当)の静脈内投与の10分後および血漿を測定した。vitroで栄養欠乏により誘導されるアポトーシスから中枢神経を保護できるかどうかを判断し、その根底にあるメカニズムを解明する。初代ラット小脳顆粒細胞(CGCs)は、神経毒性を誘発するために24時間B27(血清代替物)欠乏を受け、LDHアッセイとWST-1アッセイを使用して細胞生存率を分析しました。DNAラダーリングアッセイおよびTUNELアッセイを使用して、細胞アポトーシスを検出しました。カスパーゼ-3およびBcl-2の発現、およびAktおよびGSK-3βのリン酸化は、ウエスタンブロット分析を使用して検出されました。mRNA発現は、RT-PCR分析を使用して決定されました。B27欠乏は、LDH放出、DNAラダーリング、カスパーゼ3活性化および陽性TUNEL染色によって示されるように、CGCのアポトーシスを有意に増加させました。ARB(テルミサルタン、カンデサルタン、またはロサルタン)での前処理は、CGGCのB27欠乏誘導性アポトーシスを部分的にブロックし、テルミサルタンが最も効果的なものでした。B27欠乏はCGCでAT1a受容体の発現を著しく増加させ、AktおよびGSK-3β活性化を阻害し、Bcl-2レベルを減少させ、カスパーゼ-3を活性化しました。エルゴステロールは、抗腫瘍および抗血管新生活性を持つ植物ステロールであるが、難溶性です。この研究では、ポリ(ラクチド-co-グリコリド)(PLGA)ナノ粒子のカプセル化を介して抗腫瘍作用と経口バイオアベイラビリティを強化しようとしました。Erg)を調製しました。それらの物理化学的特性が特徴付けられ、ヒト癌細胞株に対する細胞毒性がMTTアッセイで評価されました。Ergの薬物動態と組織分布を、それぞれラットとマウスで調査しました。mVで、カプセル化効率と負荷容量は許容範囲でした。Ergは遊離エルゴステロールと比較して経口バイオアベイラビリティが4.9倍に増加し、長期の血漿循環を示しました。血管拡張剤刺激リンタンパク質(VASP)の発現は、ヒトの癌で上方制御され、より侵襲性の高い腫瘍ステージと相関しています。ヒト胃癌細胞のVASPタンパク質に作用するメカニズムを解明することでした。VASPが発現および精製されました。固有蛍光分光法を使用して、マトリンのVASPへの結合を研究しました。CD分光法を使用して、VASPタンパク質の二次構造の変化を調べました。ヒト胃癌細胞株BGC823がテストされました。スクラッチ傷および細胞接着アッセイを使用して、それぞれ細胞遊走および接着を検出した。リアルタイムPCRおよびウェスタンブロット法を使用して、VASPのmRNAおよびタンパク質の発現を測定しました。Lであったため、2つの分子間の直接結合は弱かった。mL)は、CDスペクトルに示されるVASPタンパク質の二次構造に明らかな変化を引き起こしました。mL)で処理すると、細胞の移動と接着が大幅に抑制されました。TGR5アゴニストは、腸のグルカゴン様ペプチド-1(GLP-1)の放出を刺激しますが、全身への暴露により、胆嚢充満などの望ましくない副作用が引き起こされます。本研究では、分子量と極性が大きいDPP-4阻害剤であるリナグリプチンと、前述のTGR5アゴニストであるMN6をリンクして、副作用と二重機能が低下した新規の低吸収TGR5アゴニストであるOL3を生成しましたTGR5の活性化とDPP-4の阻害による血糖値の低下。TGR5活性化は、ヒトまたはマウスTGR5およびCRE駆動ルシフェラーゼ遺伝子を安定して発現するHEK293細胞でアッセイされました。DPP-4阻害は、代理基質の加水分解速度に基づいて評価されました。GLP-1分泌は、ヒト腸内分泌NCI-H716細胞で測定されました。OL3透過性は、Caco-2細胞でテストされました。マウスで評価されました。L)でGLP-1分泌を刺激しました。値で、ヒトおよびマウスDPP-4を阻害しました。インスリン分泌細胞株INS-1の活性と中性セラミダーゼ(N-CDase)の発現とサイトカインに対する細胞応答におけるその役割を調査します。mLインターフェロン-γ)。INS-1細胞におけるN-CDaseの発現と活性は、N-CDase-siRNAトランスフェクションを使用して特異的に阻害されました。アネキシンV-フルオレセイン-イソチオシアネート/ヨウ化プロピジウムフローサイトメトリーを使用して、INS-1細胞のアポトーシスを評価しました。INS-1細胞はいくつかの基礎N-CDase活性を示し、サイトカインはN-CDaseの活性化に時間依存性の遅延を引き起こした。その結果、N-CDaseの活性化は刺激後8時間で最初に検出されました。16時間でピークに達し、24時間で上昇したままでした。サイトカインはまた、INS-1細胞におけるN-CDaseのmRNAおよびタンパク質発現をアップレギュレートしました。N-CDase活性がRNA干渉によって阻害されると、INS-1細胞のサイトカイン誘導アポトーシスが著しく増加しました。骨髄間質細胞(BMSC)の増殖を促進するジンセノサイドRg1の可能なメカニズムを調査します。H]-チミジンの取り込みにより評価しました。BMSCのエストロゲン受容体(ER)結合活性は、特定のERアンタゴニストとER結合アッセイによって決定されました。ERαの発現に対するジンセノシドRg1の影響をRT-PCRおよびウェスタンブロット法により調べた。182、780、またはERα特異的アンタゴニストメチルピペリジノピラゾールによって完全にブロックされます。17β-エストラジオールのBMSC細胞溶解物への特異的結合を置き換えることができず、エストロゲン効果のためにRg1とERの直接の相互作用は必要ないことを示唆しています。ラットの子孫の血圧と体重に対するリポポリサッカライド(LPS)への出生前暴露の影響を調査します。16の健康な妊娠ラットをランダムに2つのグループに分けました。kg)を腹腔内注射した。対照群の患者は、生理食塩水のみで治療されました。分娩後、すべての子孫の体重を測定し、6週目から24週目までの2週間に1回、テールカフ法により血圧を測定しました。15週目に、彼らの食物摂取量は毎日計量されました。24週目の終わりに、ラットは断頭により殺された。幹細胞は腫瘍形成に帰着し、腫瘍細胞の増殖を阻害することが報告されています。私たちの研究の目的は、ヒト間葉系幹細胞(hMSC)によって媒介される肝細胞癌細胞と乳癌細胞の抑制性増殖の分子機構を実証することでした。H7402ヒト肝細胞癌細胞およびMCF-7ヒト乳癌細胞の増殖は、Z3細胞またはBMMS-03細胞などのhMSCs培養からの馴化培地で処理した後、5-ブロモデオキシウリジン(BrdU)取り込みアッセイおよびフローサイトメトリーアッセイにより測定しました。Z3細胞またはBMMS-03細胞からの馴化培地で処理された肝細胞癌または乳癌細胞のうつ病におけるNF-κBまたは阻害剤κBα(p-IκBα)のリン酸化の役割を、レポーター遺伝子アッセイ、定量的リアルタイムPCRによって調べた、およびウエスタンブロット分析、それぞれ。H7402細胞およびMCF-7細胞の増殖は、治療後のBrdU取り込みアッセイおよびフローサイトメトリーアッセイにより大幅に減少しました。NF-κBの転写活性とmRNAレベルは、レポーター遺伝子アッセイと定量的リアルタイムPCRにより、用量依存的に処理細胞でダウンレギュレートされました。タンパク質レベルでは、NF-κBおよびp-IκBαは、ウェスタンブロット分析により処理細胞で減少しました。MAPKシグナル伝達のダウンレギュレーションを介して、換気関連肺損傷(VALI)のマウスモデルで保護的な役割を果たしているという仮説を検証します。kg、ip)の特異的阻害剤を投与しました。Wort前処理の有無にかかわらず、2時間18%の周期的伸張にさらされました。/乾燥重量比、および肺洗浄タンパク質濃度によって評価されました。肺組織および細胞溶解物もタンパク質および組織学的レビューのために収集されました。MAPKの発現を増加させた。分子シミュレーションを利用して、ヒトシクロオキシゲナーゼ-2((h)COX-2)の選択的阻害剤をスクリーニングします。8つのキサントン誘導体、化合物AHは、構造ベースの研究方法論で採用されました。レスベラトロールとNS-398は、それぞれCOX-1とCOX-2のコントロール化合物として選択されました。ドッキングの結果を記録し、複合体の相互作用エネルギーをCHARMm力場によって計算しました。NS-398はCOX-1の活性部位にドッキングできませんでした。COX-1に特異的な選択的化合物であるレスベラトロールは、COX-1にドッキングしている間、より低い相互作用エネルギーを獲得しました。化合物BとFがそれぞれCOX-1とCOX-2の触媒部位にドッキングされている間に、より低い相互作用エネルギーが調査されました。7-テトラヒドロキシキサントンは、COX-1とCOX-2の両方に対する高い阻害効力を明らかにした。ドッキングの構造は、相互作用エネルギーの値に影響を与えます。水素結合は、複合体全体の安定性も高めることができます。これは、化合物BがCOX-1のトンネル状の活性部位に適切な立体構造を持っていることを示唆している可能性があります。エチルファンチノリン(YH-200)は、ビスベンジルイソキノリン誘導体です。この研究の目的は、マウスにおける抗うつ薬のような作用とYH-200の基礎となるメカニズムを調査することでした。kg、ig)で処理しましたフィールドテスト(OFT)。kg)は、FSTとTSTの両方で不動時間を大幅に短縮し、FSTの不動までの待ち時間を延長しました。kg)よりも強力でした。Metrnlは新規の分泌タンパク質ですが、その生理学的役割はとらえどころのないままです。この研究では、ヒトにおけるMetrnlの組織発現パターンを調査し、最も高度に発現したレベルの組織での生理的役割の可能性を調査しました。69ドナーからの19種類の組織を含むヒト組織マイクロアレイを使用して、Metrnlの組織発現パターンを調べ、新鮮なヒトおよびマウス組織で発現パターンをさらに検証しました。腸上皮細胞特異的Metrnlノックアウトマウスが生成され、Metrnlの生理学的役割を分析するために使用されました。Metrnlは、ヒトの胃腸管で最も高度に発現され、腸上皮で特異的に発現されました。mRNAは、試験した14種類の組織の中で、マウスの消化管でも最も高発現していました。腸上皮細胞に特異的なMetrnlノックアウトマウスでは、腸液中のMetrnlレベルは有意に低下したが、Metrnl血清レベルは低下傾向を示したが、この変化は統計的に有意ではなかった。ムチン2の発現に影響を与えなかったが、膵島の再生などの抗菌ペプチドの発現を統計的に減少させた由来の3ガンマ(Reg3g)およびラクトトランスフェリン。5-ジヒドロキシスチルベンの抗腫瘍効果を調べる。直接的な細胞計数により決定された。5-ジヒドロキシスチルベンの細胞メカニズムを研究しました。抗腫瘍効果を分析した。5-ジヒドロキシスチルベンは、細胞内の細胞内活性酸素種の急速かつ持続的な増加を誘導したが、細胞死は2つの抗酸化剤によって阻害されなかった。形成、ミトコンドリア膜電位の低下およびポリ(ADP-リボース)ポリメラーゼ分解を引き起こし、カスパーゼ阻害剤Z-VAD-FMKは細胞死を部分的に防ぐことができた。LC3-II形成および細胞内GFP-LC3凝集の有意な増加を誘発しました。オートファジー阻害剤は細胞死を部分的に逆転させた。5-ジヒドロキシスチルベンはユビキチン化コンジュゲートの蓄積を誘導し、細胞内のプロテアソーム活性を阻害しました。間葉系幹細胞(MSC)は、心臓置換療法の有望な候補です。炎症性因子のために、移植後にすぐに失われます。MSCの低酸素/再酸素化誘導アポトーシスに対する低酸素プレコンディショニング(HPC)の影響を研究することを目的としました。10分、20分、および30分群を含む6つの群に分けられました。Rによって誘導される生存率を増加させました。HPCはミトコンドリア膜電位を著しく安定化し、Bcl-2およびVEGF発現を上方制御し、ERKおよびAktのリン酸化を増加させました。ポジティブコントロールとして、CsAはHPCと同じ機能を持ちますが、ERKとAktのリン酸化を促進し、VEGFを上方制御します。心室細動(VF)の発生は、心筋のチャネル障害の悪化に依存しています。再灌流でのVFの突然の出現に関連した分子変化を調査することは興味深いです。再灌流の分子変化を修正することによりVFを抑制しました。サイロキシンによって産生され、11日に10分間の冠動脈結紮/再灌流を行った。ハンドリングとETシステムおよびカルシウム過渡現象の発現を行った。ラットCM心臓の再灌流でVFの高い発生率が見つかりましたが、再灌流前にVFはありませんでした。ハンドリングシステムの異常を示しました。7回膜貫通セグメント(7TMS)であるヒトCXCR3は、主にTh1を介した応答で発現しています。10(IP-10)は、CXCR3の重要なリガンドです。それらの相互作用は、白血球の移動と活性化にとって極めて重要です。7TMSのチロシン硫酸化は、リガンド結合に実質的に寄与する翻訳後修飾です。IP-10へのタンパク質の結合におけるCXCR3のチロシン硫酸化の役割を研究することを目指しました。よって調製されました。293T細胞に、リン酸カルシウムを使用してCXCR3またはその変異体をコードするプラスミドをトランスフェクトしました。標識した後、硫酸化を測定するために免疫沈降により分析した。I標識IP-10を使用した実験を実施して、そのリガンドに対するCXCR3の親和性を評価しました。カルシウム流入アッセイを使用して、細胞間シグナル伝達を測定しました。私たちのデータは、硫酸基がCXCR3のチロシン27および29に付加されていることを示しています。MYPT1軸を活性化する重要なタンパク質を特定します。標的mRNAおよびタンパク質レベルは、それぞれqPCRおよびウェスタンブロット分析を使用して決定されました。ラットの大動脈リングを分離し、等尺性収縮を力変換器とレコーダーで測定しました。mRNAのレベルを有意に増加させました。L)による治療の3、6、および9時間後、LARGタンパク質、RhoA活性、およびVSMCのミオシンホスファターゼターゲットサブユニット1(MYPT1)のリン酸化レベルが大幅に増加しました。有糸分裂の進行のさまざまな面で重要な役割を果たし、有望な抗がん剤の標的として考えられているヒトポロ様キナーゼ1(Plk1)の新規阻害剤を検索し、Plk1に対する活性化合物の潜在的な阻害メカニズムをさらに調査する、したがって、強力な抗腫瘍リード化合物を開発しています。表面プラズモン共鳴(SPR)技術ベースのアッセイと酵素阻害アッセイPlk1阻害剤をスクリーニングするために使用されました。ウエスタンブロット法を使用して、強力なPlk1阻害剤をさらに特定しました。Plk1に対する活性化合物の阻害メカニズムを調べるために、酵素阻害アッセイ、SPRおよび酵母ツーハイブリッド技術ベースのアッセイを使用しました。アリストラクタムAIIIaは、Plk1阻害剤を探索するためのもう1つの効率的な戦術であるポロボックスドメイン(PBD)を標的とする、新しいタイプのPlk1阻害剤として同定されました。M期でHeLa細胞の有糸分裂停止を誘導し、アポトーシスを促進できることが示されたHeLa細胞で。神経保護化合物を発見し、発見された活性化合物YQ138を新規GSK-3β阻害剤として特徴付けるため。初代ラット小脳顆粒細胞(CGC)をグルタミン酸で処理し、細胞生存率をMTTアッセイで分析しました。活性化合物は、OGDまたは血清欠乏により誘発される神経損傷モデルでさらにテストされました。GSK-3β下流タンパク質(Nrf2、HO-1、NQO1、Tauおよびβ-カテニン)の発現レベルは、ウエスタンブロット法で検出されました。kg、iv)で治療しました。約2000個の潜在的なキナーゼ阻害剤で構成される化合物ライブラリから、YQ138は神経保護効果を発揮することがわかりました。L)での前処理は、グルタミン酸による神経細胞死を用量依存的に抑制しました。L)での前処理は、OGDまたは血清欠乏による神経細胞死を有意に抑制しました。Gordonの根皮から分離されたジテルペン酸であるシュードラル酸B(PAB)は、いくつかのがん細胞株で抗腫瘍効果を発揮します。私たちの以前の研究は、PABが主にヒト肺癌A549細胞(p53野生型)の成長の抑制でアポトーシスよりもむしろp53-p21活性化を介して老化を誘発することを示しました。p53欠損ヒト肺がんH1299細胞では、PABは老化することなくアポトーシスを引き起こしました。この研究では、PAB処理したヒト肺癌細胞株の老化からアポトーシスへの切り替えの原因となるメカニズムを調査しました。老化細胞をSA-β-gal染色により調べた。FACScanフローサイトメーターを使用して、グルコースの取り込みとアポトーシス率を評価しました。市販のアッセイキットを使用して、ATPおよび乳酸のレベルを測定しました。siRNAのトランスフェクションを使用して、p53またはp21の発現をノックダウンしました。ウエスタンブロット分析を適用して、タンパク質発現レベルを測定しました。L)が老化を引き起こし、グルコース利用率が時間依存的に増加しました。p53またはp21のノックダウンは、グルコースの摂取と代謝を有意に減少させたが、PAB誘導アポトーシスを上昇させた。ミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)が乳癌細胞の高い増殖能力に貢献していたかどうかを調査します。MCF-7およびLM-MCF-7細胞株での軟寒天コロニー形成を測定しました。MCF-7およびLM-MCF-7の細胞周期は、フローサイトメトリー分析を使用して検出されました。p38、p-JNK、total-JNK、survivin、Bcl-2、p-MLC、カスパーゼの発現レベルを検出しました9、切断されたカスパーゼ-9、およびMLCK。アドリアマイシン(ADR)、ML-7およびSB203580で処理した後、フローサイトメトリー分析とアネキシンV-FITC蛍光顕微鏡を使用してアポトーシスを調べました。MLCKの発現レベルは上方制御され、リン酸化p38(p-p38)のレベルはLM-MCF-7細胞で減少しました。