5.FPLC、HPLCの一般的取り扱い注意(横溝岳彦)5.FPLC、HPLCの一般的取り扱い注意(横溝岳彦)第二生化ではHPLCは通常、アラキドン酸代謝物の定量、ペプチドの分取に、FPLCは通常、蛋白質の精製に用いられる。両者共に、紫外吸収をもって物質の溶出を検出するが、HPLCでは吸収波長が変えられるのに対して、FPLCは280nmに固定されているのが特徴である。両者ともに2台のポンプを持ち、これらからの流量をコントロールすることによって、塩や有機溶媒の傾斜(グラジエント)を付けることができる。ポンプから送り出された液はミキサーで混合され、カラムに入る。この段階がもっとも圧力のかかる場所であり、トラブルの多い場所である。カラムの許容圧を越えて使用すると、カラム、ポンプの劣化を招くのみならず、目的とする物質の分離が不良となる。FPLCでこのトラブルが多く見受けられる。μmのフィルターを通したものを使用する。ルターを通してInjectする。*毎回、圧をチェックし、記録しておく。*FPLCの吸着カラムは毎回使用者が責任をもって洗う。FPLC、HPLCに共通した注意点としては、*使用する30分位前にランプのスイッチを入れておく。up)*使用後は忘れずにランプのスイッチを切る。(ランプには寿命があります)*使用後の後片付けをきちんと行う。塩類、有機溶媒の漏れはきちんと拭いておく。サンプル、チューブ、シリンジ、溶液ビンを片付ける。