和彦・横溝岳彦)改訂@1998年3月18日アガロースゲルからのDNA断片の回収は、現在kitを用いて行われている。二つのkitに関して使用法を解説する。20021)グラスビーズによる回収のkitである。Quickよりは回収率は良いが、DNAのpurityは若干落ちるようである。筆者(横溝)はligationするDNAもこれで回収しているが、特に大きな問題はない。短波長UVではDNAが切断されてしまうので注意。・ゲルから目的のバンドを切り出す。この際、ゲルの上下左右でDNAの含まれていない場所はできるだけ除くようにする。・ゲルを細かく切り、エッペンドルフチューブに入れ、空のチューブに対してゲルによる重量増加を計算する。Lを入れ、55°Cでゲルを溶かす。10分以上かけて完全に溶かすことが重要である。rpm、30秒、supを除く。遠心はアガロースを析出させないため室温で行う。LのQX1を加え、よくsuspendする。この段階で再度55°Cで5分処理することでagaroseの持ち込みを少なくすることができる。rpm、30秒、supを除く。EtOHが加えてあるか確認すること)で2度洗う。・ビーズが白色になるまでふたをあけて放置。(37度で暖めても可。8.5によくsuspendし、室温5分。(DNAが長いときは暖める。rpm、30秒、supを回収。8.5によくsuspendし、室温5分。(DNAが長いときは暖める。rpm、30秒、supを回収。・一部を電気泳動し、回収量を推定する。28106)グラスビーズの代わりにシリカゲルが膜になってカラムになっているだけであり、原理は1)と同じである。DNAはきれいであるが、回収率が悪いのが問題点である。短波長ではDNAが切断されてしまうので注意。・ゲルから目的のバンドを切り出す。この際、ゲルの上下でDNAの含まれていない場所はできるだけ除くようにする。・ゲルを細かく切り、エッペンドルフチューブに入れ、空のチューブに対してゲルによる重量増加を計算する。bufferを入れ、55°Cでゲルを溶かす。10分以上かけて完全に溶かすことが重要である。(QX1の量についてはkitのマニュアルを参考にすること)・(optional)ゲルを同じ量のisopropanolを加えて混合。L以上の時は2回に分けて行う。遠心はアガロースを析出させないため室温で行う。LのQX1を加え、再度遠心。rpm、30秒で洗う。rpm、30秒遠心し、PEを完全に除く。8.5を加え、室温1分。rpm、30秒で溶出。・一部を電気泳動し、回収量を推定する。