ためのプロトコルです。大腸菌株を結合することによって達成されます。全細胞生体触媒の固定化は、カルシウムアルギネートビーズ中の細胞のカプセル化により達成されます。here.Abstract我々は最近改善された生産収量と持続的な合成のための補因子再生と生体触媒の固定化の機能を備えた、シンプルな再利用可能と連結された全細胞生体触媒システムを開発しました。E.から成るこのようなシステムの開発のための実験手順であります機能的に相補的な酵素を発現する大腸菌株。一緒に、これらの二つの酵素はバイオ反応の生成物の収率を改善するため、高価な補因子の再生を仲介する協同機能することができます。アルギン酸カルシウムビーズ中の全細胞のカプセル化によって結合された生体触媒システムの固定化形態を合成する方法が報告されています。一例として、我々は、Eが結合することによって、L-アラビニトールからLキシルロースの改良された生合成を提示します大腸菌細胞が酵素のL-アラビニトール脱水素酵素やNADHオキシダーゼを発現しています。最適条件下で、150の初期濃度を用いmMのL-アラビニトール、最大Lキシルロース収率は、文献に報告されたものよりも高い96%に達しました。結合した全細胞生体触媒の固定化された形態は、遊離細胞系がほぼ完全に触媒活性を失っている間、連続した再使用の7サイクル後の最初のサイクルで得られた収率の65%を維持し、良好な動作安定性を示しました。したがって、ここで報告された方法は、L-キシルロースの工業生産だけでなく、一般的には補因子の使用を必要とする他の付加価値化合物の改善に役立つ可能性が2つの戦略を提供します。​​的に重要な生体分子1の化学酵素合成のための普及した方法となっています。-それは孤立した酵素の使用に比べていくつかの利点、特にコストのかかる下流の精製工程の排除と長寿命4のデモを提示します。補因子は、生成物の形成に必要とされる生体触媒の経路のために、全細胞系は、安価な電子供与共基質5,8,9の添加によってその場での補因子再生に提供する可能性を有します。-しかし、この容量が希少または高価な補基質10の化学量論的濃度を必要とする反応のために減少します。一緒に細胞全体の貧しい再利用して、これはスケーラブルで連続のproduの確立を妨げますctionシステム。ための全細胞システムの戦略的な改変は、前述の制限を克服するために必要とされます。具体的には、協働して動作する全細胞生体触媒の組み合わせは、有意に保有酵素14の生産性及び安定性を高めることが示されています。15によってさらに最適化することができます。我々は最近、L-キシルロース生産の16のための補因子再生と生体触媒の固定化の両方を可能にする、シンプルで再利用可能な全細胞生体触媒システムを開発しました。この研究では、このシステムは、改善された生体内変換歩留まりと生体触媒の再利用のために、これら2つの戦略を適用する実験手順を説明するための例として使用しました。L-キシルロースは、CLAに属し生物学的に有用な分子のssは希少糖と命名します。希少糖は、自然の中で非常にまれにしか発生しないユニークな単糖類または糖誘導体であるが、生物活性分子17,18における認識要素として重要な役割を果たしています。潜在的な治療薬19に至るまでのさまざまなアプリケーションを持っています。Lキシルロースは、複数のαグルコシダーゼの潜在的な阻害剤として使用することができ、また、肝炎または肝硬変17,20の指標として用いることができます。