Achievements「がんの特性」を生み出すための性質として「ゲノム不安定性」があり、様々ながんにおける共通の性質として認識されている。多くのがんにおいて、DNA複製ストレスが染色体レベルでのゲノム不安定性を引き起こす要因とされている。DNA複製ストレスとは、DNA損傷やdNTP枯渇など、不完全な環境で正常なDNA複製進行が妨げられる状況を指す。近年、DNA複製進行を妨げる外的な要因がない場合でも、自然発生する因子が引き金となり、DNA複製ストレスが発生していることが知られるようになり、その要因の1つとして、RNA転写中間体(RNA-DNAハイブリッド構造)とDNA複製との衝突が提唱されている。今年度は、抗がん剤トリフルリジン(FTD)によるDNA複製ストレス発生時におけるRNA転写中間体の関与の有無について、検証を行った。Ser345リン酸化、FancD2モノユビキチン化が観察された。IIとFancD2の近接が確認された。RNA転写中間体特異的な抗体(S9.6)を用いたRNA転写中間体の検出については、再現性のある結果が得られず、その特異性、定量性について、さらなる検証が必要と考えられた。Ser345リン酸化が有意に抑制されたが、Cordycepin添加では抑制効果は見られなかった。planned.Reason当初計画していた実験について、おおむね実施することができ、実験における問題点を明らかにすることができたことで、至適な解析条件なども定まってきたと考えられるため。ActivityRNA転写中間体特異的な抗体(S9.6)を用いたRNA転写中間体の検出について、その特異性、定量性について実験条件を精査することにより、再現性のある結果が得られる条件を探索する。IIとの近接などについて、定量的データを取得していく。H1のRNA転写中間体結合ドメインによるRNA転写中間体検出法についても検証する。他の抗がん剤によるDNA複製ストレス発生時における検討も進めていく。