日本獣医学会(2003年)要旨:CpGモチーフを含む合成オリゴヌクレオチドDNA(CpG-ODNs)は、マウスやヒトにおいてIFN-γおよびIL-12を誘導することが知られている。CpG-ODNsの反応性には種特異性があることが知らており、犬においてTH1サイトカインを誘導する配列は明らかとなっていない。そこで、本研究では、12種類のCpG-ODNsを合成し、犬の末梢血単核球(PBMC)におけるTH1サイトカインを誘導する配列を検索した。12種類のCpG-ODNsで刺激したPBMC中のIFN-γmRNAの発現を定量的リアルタイムPCR法で、またPBMC培養上清中のIFN-γをELISAを用いて測定した。コントロールとして、無刺激のPBMCを用いた。その結果、2種類のCpG-ODNsが有意に高いIFN-γ誘導能を示した。この2種類のCpG-ODNsのCpGモチーフをGpCに変換したコントロールODNs(GpC-ODNs)を作製し、IFN-γ誘導能を比較した結果、No.2のCpG-ODN(5'-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3')はCpGモチーフ依存性に、有意に高いIFN-γを誘導することが明らかとなった。このCpG-ODNは、PBMCにおいてIL-12p40mRNAの発現を有意に増強することが明らかとなった。このCpG-ODNによるIL-4、IL-12p35、IL-18のmRNAの発現増強は認められなかった。以上の結果から、No.2のCpG-ODNは、犬においてTH1サイトカインを誘導する配列であることが明らかとなった。今後、このCpG-ODNはアレルギー性疾患や腫瘍に対する新規治療法への応用が期待される。PMWSの野外例および実験例にはしばしば重度の肝臓病変が認められ、肝細胞がPCV2感染増殖の場の一つであることを示している。そこで、我々は豚の初代培養肝細胞においてPCV2の増殖性を調べ、他の培養細胞のそれと比較・検討した。【材料と方法】3日齢の子豚を麻酔下にて開腹し、門脈にカニュレーションした。肝灌流液にて脱血後、コラゲナーゼ溶液を灌流し肝臓を摘出した。肝組織を5%FCSを添加したPBS中で細切・分散させ、低速遠心ならびにナイロンフィルター濾過により単離細胞浮遊液を得た。10%FBS、EGF、インスリン、デキサメタゾンを添加したWE培地を用い、コラーゲンコーティングディッシュで培養した。培養1日後にPMWS罹患豚臓器乳剤(PCV2感染価,約104TCID50/ml)を感染させ、接種後2、3、4日目に採材し、ウイルス抗原および遺伝子の検出と電顕検索を実施した。対照として豚腎由来(SK)細胞を同様に感染させ検索した。おけるウイルス抗原は接種後2日で最も多くの細胞の、主に核内全域と核周囲細胞質で多量検出された。SK細胞では接種後3日目に抗原が最も多く、ほぼ同様なパターンで観察されたが、陽性細胞数は肝細胞に比べて明らかに少なかった。PCV2に対して感受性を示し、それはPMWS罹患豚の肝臓にみられるPCV2の増殖性を裏づけていた。日本獣医学会(2003年)要旨:鶏のコクシジウム症は原虫寄生による腸炎であり、通常、ブロイラーおよび種鶏で発生し、飼料要求率の低下、死亡率の上昇、産卵率の低下などを起こす養鶏産業における重要疾病である。tenella、E.acervulina、E.maximaおよびE.necatrixである。前の3種はブロイラー及びその他の鶏種においてごく一般的であるが、E.necatrixによる発病は長期間の飼育鶏で中雛期以降に見られる。原虫の蔓延は世界中に及び、原虫の諸性状特に感染源となるオーシストの諸種消毒剤に対する抵抗力の強さから絶滅のはなはだ困難な疾病と理解されている。病変、オーシスト排泄状況などにより実施されるが、分離した原虫種の同定等に関しては最近PCRが使用できるようなった。E.necatrixの感染確認については組換え蛋白抗原を用いた特異的ELISAが開発されている。本病予防には良好な衛生管理が不可欠であり、これに加え、ブロイラーでは飼料添加の予防剤、主にイオン透過担体抗生物質が広範に用いられている。新薬開発の困難性から、今後多品目の出現は望めず、これに反し、諸種の生ワクチンが登場している。tenella、E.acervulina、E.maximaの弱毒株を用いた3価生ワクチンが一部のブロイラーに使用されてきた。最近、E.necatrixに対する弱毒生ワクチンも開発され、実用に供しうることとなった。日本獣医学会(2003年)要旨:2002年8月から11月にかけて、南九州で高率の死亡あるいは大腸菌症を伴う伝染性ファブリキウス嚢病(IBD)が頻発した。発生農場8症例のファブリキウス(F)嚢から、RT-PCRによりIBDウイルス(IBDV)遺伝子が検出された。各症例由来増幅DNAについて、VP2遺伝子可変領域の8種の制限酵素による切断断片長の多型性を解析した。その結果、症例1~5及び7由来DNAの切断パターンは1990年分離の高度病原性株のそれと類似し、症例6及び8由来DNAの切断パターンは1992年分離の従来型病原性株のそれと一致した。IBDVの主要中和エピトープを認識するモノクローナル抗体は、検出された全ての材料と反応し、抗原の同一性が確認された。症例1(02-01株)及び症例8(02-08株)各々のF嚢乳剤を5週齢のSPF鶏に経口投与してその病原性を調べた。褪色などが認められた。02-08株を投与された鶏では、死亡例はなく、20%が軽度の臨床症状を呈したが、剖検で全羽にF嚢の萎縮あるいは水腫が認められた。これらの結果から、02-01株は高度病原性株、02-08株は従来型病原性株であることが確認された。市販IBD生ワクチン(MB-1・E株)で免疫された鶏及び非免疫鶏を用いて、02-01株の攻撃試験を実施したところ、非免疫群は全羽発症、73%が死亡したのに対し、免疫群では臨床的異常が全く認められず、100%の防御が成立した。このことから、上記ワクチンは02-01株に対して有効であることが確認された。日本獣医学会(2003年)要旨:小動物の癌治療においては抗がん剤投与による骨髄抑制が深刻な問題である。ヒトにおいては二次感染を防止するため、顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)が補助剤として臨床応用されている。ヒト用のG-CSF製剤は短期では効果があるが、長期投与では中和抗体が誘導され、投与G-CSFのみならず、内因性G-CSFの作用まで抑制されることが報告されている。我々はネコG-CSFを好中球減少時の治療薬として実用化することを目標に遺伝子をクローニングし、N末端にヒスチジンヘキサマーを含むペプチドを付加して、大腸菌で発現させた。Ni-NTAカラムにより精製したネコG-CSFは分子量約2万のタンパク質が主成分であった。50μgタンパク質、生物活性で10~20万単位を1バイアルとし、以下の健康ネコを用いた実験では1バイアル/日/頭で投与した。11日間の連続投与では、末梢血中の好中球数の顕著な増加のほか、単球等の増加も観察された。この間、体温上昇等の臨床症状は観察されず、また、投与終了時に採血した血清でウエスタンブロッティングを行ったが、抗体は検出限界以下であった。増殖・分化が顕著であった。健康ネコにサイクロフォスファマイド300mg/m2を2日間連続投与すると5、6日後に末梢血中の白血球数が低値となるが、G-CSFの2日間連続投与により末梢血中の好中球数の回復が認められた。このとき、骨髄中の顆粒球系前駆細胞の増加は認められなかったことから末梢血中の血球の増加は骨髄プールからの放出によると思われた。これらの健康ネコを用いた実験により組換えネコG-CSFの有用性が確認された。日本畜産学会(2003年)要旨:【目的】白卵系(WE系)およびセラダン色卵を産むGUC系との交配群において光沢のある純白卵殻卵(以下純白卵)を産む個体が出現した。本報告はこの純白卵の遺伝子分析の結果である。【方法】この純白卵は白卵(常染色体性劣性)およびセラダン(常染色体性劣性)両遺伝子がホモの状態で出現すると思われた。そこで、純白ホモ系(WC系)を作出し、WC×WEおよびWC×GUCの雌雄正逆交配を行ない、後代における雌の卵殻色の出現頻度を観察した。【結果】WC×WEおよびWE×WCの各交配からは白卵を産む個体のみがそれぞれ183、154得られた。次に前述の交配に用いた同一のWC系の個体を用いたWC×GUCおよびGUC×WCの各交配からはセラダンを産む個体のみがそれぞれ170、25得られた。これらの結果は、純白卵は白卵およびセラダン両遺伝子がホモの状態で出現することを示した。純白卵を雌に用いた場合は受精率および孵化率が低下することも判明した。日本畜産学会(2003年)要旨:【目的】ニホンウズラは食卵や食肉としてのみならず、実験動物やモデル動物として貴重である。同じ家禽のニワトリと比較しても遺伝的情報は乏しく連鎖地図も未だ作成されていない。Polymorphism(AFLP)法を用いたニホンウズラの遺伝連鎖地図作成を目的とした。維持されているニューロフィラメント欠損症系統(Quv系)のオスと筋ジストロフィー発症系統(LWC系)のメスで戻し交配により得られた戻し交雑家系(kobe-NIBS家系)50個体を利用した。AFLP法は定法に従い、制限酵素はEcoとMse、EcoとTaqの組み合わせを用いた。プライマーは3塩基選択的プライマーを用い、128セットを使用した。score3の閥値で連鎖群を作成した。【結果】AFLP法で得られた多型マーカー数は741であった。ニューロフィラメント欠損症と筋ジストロフィー、性の表現型を併せて計744マーカーを用い連鎖解析を行った。連鎖解析の結果、703マーカーが47連鎖群を形成した。同一遺伝子座に位置した多型は385であったため、実質的なマーカー数は359であった。筋ジストロフィーの表現型を含む41マーカーが連鎖しなかった。今後、さらにマーカー数を増やし、連鎖解析を行う予定である。日本畜産学会(2003年)要旨:【目的】A(高IgG)系およびB(低IgG)系ニホンウズラのMhcCojaIおよびIIβにおける発現遺伝子座の解析の結果、少なくとも5つのHaplotypeが存在することが示唆された。そこでこのHaplotypeの簡便なMarkerとなるDNA多型を検索した。飼育管理されている、A、B系ならびにAMRP、SBPN、PNN、TKP系個体の赤血球核由来DNAをTemplateとした。haplotypeの異なる個体間および各系統間でPCR産物の断片長および塩基配列を比較した。satelliteDNAについて移動度の異なるPCR産物が確認された。haplotypeとの関連が示唆された。AMRP、SBPN、PNN、TKP系においてさらに反復回数の異なる多型が確認された。intracellularis(Li)を起因とする豚の腸管感染症である。罹患豚は、急性経過をたどると激しい血様下痢を呈して急死し、慢性例では持続性の下痢を伴って発育不良となる。我が国においても本疾病の存在は報告されているがLiの培養はなされておらず、これまでその性状は不明であった。【材料と方法】栃木県の1養豚場で血便を呈して瀕死となった160日齢の肥育豚を剖検し、その回腸を材料とした。腸管からの菌の回収、培養はLawson(1993)らの方法に基づき、株化細胞はIEC-18およびHEp-2を用いた。Li特異的PCRはJones(1993)の方法によった。【結果及び考察】供試豚の回腸粘膜は肥厚し、病理組織学的には回腸の腸陰窩の過形成と陰窩上皮細胞の有糸分裂像が多数みられ、Warthin-Starry染色により腸陰窩上皮細胞内に彎曲した短桿菌が多数確認された。腸管粘膜及び腸内容からLi特異的遺伝子断片が検出され、これらの所見から本症例を増殖性腸炎と診断した。腸管粘膜から菌を回収し細胞へ接種したところ、培養液中に継続してLi遺伝子が検出され、継代を経て1.5カ月以上持続的に検出された。培養細胞の細胞質内には免疫染色により明瞭に染色されたLi菌体の存在が確認された。この菌の16SrDNAを増幅してその塩基配列を決定したところ、既報にあるLiNCTC12656T株の配列と100%一致した。我が国に浸潤しているLiを培養細胞を用いて増殖させ、その特徴付けを行うことが可能となった。日本獣医学会(2003年)要旨:【背景】インターフェロン(IFN)は抗ウイルス作用等多様な生物活性を持つサイトカインであり、近年、獲得免疫のみならず自然免疫の場でも種々の生体防御反応に関与していることが報告されている。イヌでは、α、β、γの3種がクローニングされているが、それらの解析は十分でない。我々は、第119回本学会でイヌIFN-α1の遺伝子のクローニングおよび発現を報告した。今回、ヒスチジンヘキサマータグ(His-tag)を利用して精製し、イヌに投与して効果を確認した。【材料と方法】イヌIFN-α1はC末端側にHis-tagを付加し、組換えバキュロウイルスで発現し、Ni-NTAカラムを用いて精製した。IFN活性はA72細胞と水疱性口内炎ウイルスを用いて測定し、LUで表示した。投与IFNの効果は2',5'オリゴアデニル酸合成酵素(OAS)タンパク質の誘導をWB法で検出することで確認した。【結果】組換えバキュロウイルスの感染培養上清中には約20μg/mlのイヌIFN-α1が発現した。アミノ酸配列から予想される分子量19.8kDaに比べ、発現タンパク質は26kDaと大きく、糖鎖の付加が予想された。Ni-NTAカラムを用いたイヌIFN-α1を1段階精製し、SDS-PAGEで純度約90%の標品を得た。このサンプルを2×106LU/kgでビーグル犬に皮下投与したところ、3~6時間後に一過性の体温上昇が見られ、また、8時間後にはOAS誘導が認められた。臨床所見は観察されなかった。【考察】バキュロウイルス系で発現したイヌIFN-α1は生体内投与でも活性を保持しており、イヌIFN-α1の生物活性の解析に重要なツールになると思われた。日本獣医学会(2003年)要旨:【目的】我々は第134回本学会において、ヨーロッパ型馬2型インフルエンザウイルス(H3N8)の流行に対応するワクチン株としてAvesta/93が、発育鶏卵での増殖性、継代による抗原変異性、マウス及び馬に対する免疫原性及び交差反応性等の成績により最も適していることを報告した。馬注射試験を実施したので報告する。本試作ワクチンを軽種馬12頭に4週間隔で2回筋肉内注射し、各注射後2週間の臨床観察及び体温測定による安全性、ならびに免疫原性を検討した。【結果と考察】試作ワクチン3ロットは、製造直後及び製造後12か月目に実施した規格試験において、いずれも全ての試験に適合した。馬注射試験では、注射後の発熱、局所反応等は認められず、また、馬インフルエンザウイルスAvesta/93に対するHI抗体価は幾何平均で34倍と有意な上昇を認めたことから、本試作ワクチンの馬に対する安全性及び免疫原性が確認された。【おわりに】本ワクチンは本年4月に製造承認申請を行い、2004年春に早期実用化が期待される。3種混合不活化ワクチン中の馬インフルエンザウイルス抗原としてAvesta/93を含有させる必要がある。日本獣医学会(2003年)要旨:いわゆる環境ホルモンの鳥類における内分泌撹乱作用を検証する新たなスクリーニング法として、演者らはF1(AWE×WE)ウズラ胚を用いた性転換試験法を開発し、この試験法がエストロジェン様作用の検出に有用であることを報告してきた(第53回ACVP)。今回は、本試験を用いてE2、EEおよびDESのエストロジェン様作用の程度を比較検討した。【材料と方法】用いたF1(AWE×WE)ウズラは、ニホンウズラのAWE系(アルビノ系、白色羽装)雄とWE系(野生色羽装)雌の交配によって得られ、十字遺伝によりF1の雄は野生色羽装、雌は白色羽装を示す。1群40~45個の孵卵直前(孵卵0日)の卵白内にE2、EEおよびDESをそれぞれ20、200および2,000ng/20μL投与し、対照群には溶媒(コーン油)のみ20μL投与した。孵卵16日に胚を肉眼的に観察し、生殖器を病理組織学的に検索した。【結果】対照群では全ての生存胚の遺伝的性別(羽装)と孵卵16日の生殖器の性別が一致していた。EE2,000ng群を除く他のE2、EEおよびDES投与群では羽装と肉眼的な生殖器の性別が一致していたが、EE2,000ng群では14羽の雄羽装を示す個体のうち6羽に右精巣の痕跡化および左精巣の卵巣様外観(雌化)が認められた。E2、EEおよびDES投与群の左生殖腺の卵精巣出現率は投与用量と相関しており、EEの出現率が最も高かった。左側の卵精巣の程度もEEが最も強く、次いでDES、E2の順であった。肉眼的に雌化と判断されたEE2,000ng群の6羽の左精巣の殆どの領域が卵巣組織で占められていたが、僅かに精巣組織が残存していたことにより雄と判断された。【考察】今回の結果から、本スクリーニング法が環境ホルモン様化学物質のエストロジェン様作用の検出およびその程度の検索に有用であることが示された。日本獣医学会(2003年)要旨:【目的】我々は第134回本学会において豚回虫雌成虫の各器官における抗原性について、ELISA法により検討を行い、その結果を報告した。豚回虫の抗原性については他にウエスタンブロッティング法などいくつかの報告がなされているが、虫体内の局在部位については十分な検討がなされていない。行うため、自然感染豚血清を用い、豚回虫の成虫を20%中性緩衝ホルマリン液および4%パラホルムアルデヒド液(pH7.4)で固定後、常法に従い、パラフィン切片ならびに凍結切片を作製した。用い、二次抗体にはHRP標識抗豚IgGを用いた。陰性対照として豚回虫非感染の豚の血清を一次抗体として用い、DABで発色させた後、メチルグリーンで核染色し、抗原の局在性の検討を行った。対する強い反応が認められ、陰性対照血清においては全く反応しなかった。これより、卵巣内に多くの抗原が存在することが示唆された。前本学会で報告した豚回虫雌成虫の各器官におけるELISA法の検討結果と一致する所見が認められた。日本神経ウイルス研究会帯広大会(2003年)要旨:プリオン蛋白質(PrP)の正常機能は充分に明らかにされていない。その理由の一つに、組織や細胞からの精製が非常に難しいということが挙げられる。1993)によると、100頭の正常ハムスター脳から、わずか数μgしかPrPは精製できないと報告されている。用いて組み換えPrPの産生を試みた論文が報告されている。細胞内で蛋白が大量に産生されるとしばしば凝集するため、変性条件で精製を行わなければならず、機能解析には適していなかった。(GPI)アンカー付加シグナルを除いた組み換えPrP(bacMuPrP)を発現させ、培地に遊離されたbacMuPrPをnativeな条件で精製し、その性状解析を行なった。その結果、以下のような結果を得た。formを形成、糖鎖はほとんど付加されていなかった。(SOD)様活性を持つことが報告されているが、bacMuPrPはSOD様活性を示さなかった。これらの結果から、bacMuPrPがマウスや大腸菌で産生されたPrPとは異なった性状を有している可能性が示唆された。101回大会(2003年)要旨:【目的】白卵形(WE系)およびセラダン色卵を産むGUC系との交配群において光沢のある純白卵殻卵(以下純白卵)を産む個体が出現した。本報告はこの純白卵の遺伝子分析の結果である。【方法】この純白卵は白卵(常染色体性劣性)およびセラダン(常染色体性劣性)両遺伝子がホモの状態で出現すると思われる。そこで、純白ホモ系(WC系)を作出し、WC×WEおよびWC×GUCの雌雄正逆交配を行い、後代における雌の卵殻色の出現頻度を観察した。【結果】WC×WEおよびWE×WCの各交配から白卵を産む個体のみがそれぞれ183、154得られた。次に前述の交配に用いた同一のWC系の個体を用いたWC×GUCおよびGUC×WCの各交配からセラダンを産む個体のみがそれぞれ170、25得られた。これらの結果は、純白卵は白卵およびセラダン両遺伝子がホモの状態で出現することを示した。純白卵を雌に用いた場合は受精率およびふ化率が低下することも判明した。101回大会(2003年)要旨:【目的】ニホンウズラは食卵や食肉としてのみならず、実験動物やモデル動物として貴重である。同じ家禽のニワトリと比較しても遺伝的情報は乏しく連鎖地図も未だ作成されていない。法を用いたニホンウズラの遺伝連鎖地図作成を目的とした。維持されているニューロフィラメント欠損症系統(Quv系)のオスと筋ジストロフィー発症系統(LWC系)のメスで戻し交配により得られた戻し交雑家系(kobe-NIBS家系)50個体を利用した。lの組み合わせを用いた。プライマーは3塩基選択的プライマーを用い、128セットを使用した。score3の閾値で連鎖群を作成した。【結果】AFLP法で得られた多型マーカー数は741であった。ニューロフィラメント欠損症と筋ジストロフィー、性の表現型を併せて計744マーカーを用い連鎖解析を行った。連鎖解析の結果、703マーカーが47連鎖群を形成した。同一遺伝子座に位置した多型は385であったため、実質的なマーカー数は359であった。筋ジストロフィーの表現型を含む41マーカーが連鎖しなかった。今後、さらにマーカー数を増やし、連鎖解析を行う予定である。101回大会(2003年)要旨:【目的】A(高IgG)系およびB(低IgG)系ニホンウズラのMhcCojaIおよびIIβにおける発現遺伝子座の解析の結果、少なくとも5つのHapltypeが存在することが示唆された。そこでこのHapltypeの簡便なMarkerとなるDNA多型を検索した。飼育管理されている、A、B系ならびにAMRP、SBPN、PNN、TKP系個体の赤血球核由来DNAをTemplateとした。haplotypeの異なる個体間および核系統間でPCR産物の断片長および塩基配列を比較した。DNAについて移動度の異なるPCR産物が確認された。haplotypeとの関連が示唆された。AMRP、SBPN、PNN、TKP系においてさらに反復回数の異なる多型が確認された。4回大会(2003年)要旨:【目的】ニワトリ遺伝性筋ジストロフィー(ニューハンプシャー413系)は40年以上前からその存在が知られているにもかかわらず、疾患原因遺伝子はまだ明らかにされていない。我々は連鎖解析の結果kら、この疾患遺伝子はニワトリ第2染色体q腕上に存在することを示唆した。よりニワトリ第2染色体q腕とヒト第8染色体q腕の間でsyntenyが認められ、ヒト第8染色体q腕の機能遺伝子が本疾患原因遺伝子である可能性が示唆された。anhydrase3(CA3)遺伝子のクローニングおよび発現解析を行い、疾患原因遺伝子であるか否かを明らかにすることを目的とした。【方法】マウスCA3プローブを用いてニワトリcDNAライブラリーからスクリーニングを行い、ニワトリCA3遺伝子の翻訳領域の全塩基配列を決定した。ノーザンハイブリダイゼーションにより、正常個体と疾患個体の筋肉組織間でCA3遺伝子の発現を比較した。【結果】ニワトリCA3遺伝子は262アミノ酸残基からなり、哺乳類(260アミノ酸残基)より長い配列を示すことが明らかになった。ヒトCA3との相同性は82.4%であった。正常個体でより高い発現が見られた。本疾患では胸筋で主な症状が見られるため、CA3遺伝子が原因遺伝子である可能性が示唆された。他に疾患原因遺伝子があり、その影響によりCA3遺伝子が高発現している可能性も考えられる。今後、正常個体と疾患個体間でCA3遺伝子の翻訳、非翻訳領域の塩基配列を比較しその差異を調べることにより、原因遺伝子であるかどうかを確認することができると思われる。好中球は生体の非特異的免疫機構の一員で、感染防御において主要な役割を果たしているが、末梢血中の好中球はその半数が24時間以内にアポトーシスにより死滅する。ヒト好中球では、LPSによってアポトーシスが抑制されることが知られているが、アポトーシス制御の中心的役割を果たしているBcl-2ファミリーの発現については、検出方法の違いのためか異なった成績が報告されている。犬Bcl-2ファミリーについてはほとんど検討されていない。PCRを用いて経時的に検討した。RT-PCR法およびRACE法を用いて犬末梢血細胞から各遺伝子のcDNAをクローニングし、その塩基配列を解析した。Bcl-xL、Mcl-1のcDNAの長さは1252bp、2694bpで、推測されるアミノ酸数は233残基、350残基であった。犬Bcl-xLおよびMcl-1のアミノ酸配列はヒトとは99.6%と88.7%、マウスとは97.0%と75.7%、ラットとは97.9%と77.1%の相同性を有していた。Bcl-2については3'末端を含む688bpの配列を明らかにした。これら塩基配列をもとに発現解析用プライマーを作成し、LPS(100ng/ml)を加えて犬好中球を培養したところ、Mcl-1の発現が約30倍に増大した。Bcl-xLの発現は、感作前の約500倍と著しく増大したが、Bcl-2の発現はわずかであった。これらのことからLPSによる好中球のアポトーシス抑制にはBcl-xLが強く関与しているものと考えられた。日本トキシコロジー学会学術年会(2003年)要旨:トキシコキネティクス(TK)のデータは一般に臨床的用量よりも高い用量を用いる毒性試験から得る。高投与量では吸収や代謝過程で飽和が起こり、非線形な体内動態を示す場合がある。そのような場合、TKにおいてはデータ数が多くないため、適切に動態学的パラメータが求められない。非線形な動態の解析には数値積分を用いたり、求めるパラメータ数を増やす必要性が生じる。本研究では、TKデータから得た血漿中薬物濃度プロファイルを用いて、同時解析により動態学的パラメータ(Ka、Vd、Vmax、Km)を求める方法を検討した。経時的(0.5、1、2、4、8、24時間後)に採血し、血漿中CA濃度をLC/MSを用いて測定した。解析には消失に飽和を仮定した1-コンパートメントモデルを用いた。Newton法によるデータフィッティングを3投与量の血漿中CA濃度プロファイルに対して同時に行った。[結果と考察]解析の結果、単一モデルによる動態学的パラメータを算出できた。このパラメータを用いることにより、投与量を変えた場合や反復投与した場合の血漿中濃度推移をより正確にシミュレイションすることが可能であると考えられた。TKなどのように採血ポイント数が少ない場合でも動態学的情報を得ることができるため、有用な解析法であると考えられた。