Typhimurium及びS.Dublin、ブタではS.Choleraesuis及びS.Typhimurium、ニワトリではS.Enteritidis及びS.Typhimuriumを主原因とする。それ以外の血清型を原因とした症例の発生報告も少なくない。家畜にサルモネラ症を引き起こす血清型の多くは、ヒトの急性胃腸炎事例からも分離されていることから、肉や卵などの畜産食品のサルモネラ汚染とヒトのサルモネラ症との関係が、公衆衛生上重要な問題として提起されてきた。家畜のサルモネラ感染は、生産性に影響を与える家畜疾病としてのみならず、食品である畜産物の安全・安心にかかわる重要な関心事項にもなっている。よると、2004年の家畜のサルモネラ症の発生は、ウシで93戸530頭、ブタでは68戸403頭、ニワトリでは4戸59羽であった。これらは有症の発生事例の届出数であり、不顕性感染事例は含まれない。実際にはどれほど存在するか想像もつかないサルモネラに不顕性感染した動物は、他の個体への感染源となって汚染を拡大するだけでなく、生産される畜産物に菌が付着することによって食品汚染の原因ともなる。従って、家畜のサルモネラ感染対策においては、顕性感染の発生の制御はもちろんのことながら、不顕性に感染している保菌動物に対する対策もこれに勝るとも劣らず重要な課題である。家畜のサルモネラ症対策として、一般的に抗生物質の投与が行われるが、多用すると耐性菌の出現を誘発するという問題もあり、不用意に投与することは避けるべきである。徹底した洗浄・消毒といった衛生対策の向上により農場の清浄化を目指す必要があるが、一度サルモネラが侵入すると一般的な衛生対策のみで完全に菌を排除することは極めて困難とされている。そのため、対策の基本は、まず第一に農場に菌を侵襲させないことである。導入する動物の検疫、畜舎環境を含めた定期的な微生物モニタリング、ヒトの出入制限や着衣交換等によるバイオセキュリティーの強化、清掃・消毒の徹底、媒介動物の駆除および生菌剤の投与等が重点項目となる。ワクチン接種もその項目のひとつである。我が国では、ウシ及びニワトリ用のサルモネラワクチンは利用可能となったが、ブタ用ワクチンはいまだ利用できない。ニワトリ用ワクチンは、ニワトリのサルモネラ症を予防することよりも、むしろ腸管内に定着するサルモネラの菌数を低減することにより、鶏卵へのサルモネラの移行を防ぐことを目的としている。統計をみる限りでは、ニワトリ用ワクチンの普及に伴いヒトのS.Enteritidisによる食中毒の発生数は減少傾向にあるようにみえるが、いまだS.Enteritidisの浸潤のある農場も認められることから、今後、さらなる徹底した対策を実施してゆく必要がある。家畜のサルモネラ症対策は、安全かつ安心できる畜産物を生産する上での根幹となることから、引き続き様々な対策を総合的かつ徹底的に実施してゆくことが不可欠である。日本獣医学会(2006年)要旨:鶏コクシジウム症は、Eimeria属原虫の寄生による鶏の腸炎を主体とする疾病である。産卵率などを悪化させるため、産業上非常に重要視されている。tenellaの5種類が主体である。本病は、糞便中に排泄されるオーシストにより感染が広がるため、対策としてオーシストの汚染と拡散を極力排除するための良好な衛生管理が求められる。現在の集約的な養鶏形態において、鶏コクシジウム原虫の汚染を衛生管理だけで制御することは不可能であるのが実状であり、通常は飼料中にコクシジウム予防剤を添加することにより、疾病の発生を抑制しているところである。予防剤は優れた有効性、安全性を有するうえに低コストであるため、現在の予防対策の中心的役割を果たしているが、最近、耐性株の出現の問題や薬剤に頼らない食品生産を求める消費者ニーズの高まりなどから、その代替法が希求されている。EU諸国では世界に先駆け、飼料中への予防剤の添加を大幅に制限する方針が打ち出されている。この予防剤の代替法として注目を集めているのが、コクシジウム生ワクチンである。コクシジウム原虫に感染した鶏が強固な免疫を獲得する現象は古くから明らかにされていたため、計画的に鶏にコクシジウムを感染させて免疫を付与する手段として生ワクチンが開発されてきた。最初に製品化されたのは、野外分離株を継代して得たオーシストを含有する非弱毒タイプの生ワクチンであったが、その後、より安全性を高めた弱毒タイプの生ワクチンが開発されるようになった。コクシジウムの弱毒化は、早熟性を有するオーシストを作出する方法が主流である。早熟化した弱毒株の特徴として、弱毒性状が安定しており病原性の復帰がないこと、投与動物に種特異的な免疫を付与できることがあげられ、生ワクチン用株として適した性状を有する。日本においては、現在3製品の鶏コクシジウム生ワクチンが承認および販売され、主要な5種のコクシジウムのうち4種については生ワクチンで対応が可能となった。tenellaの早熟化弱毒株のオーシストを主成分としている。necatrixの早熟化弱毒株のオーシストを主成分としている。我が国においても、抗生物質や化学合成薬剤に頼らずに鶏を生産する取り組みが盛んになってきているため、これらの生ワクチンの使用量は急速に伸びている。brunettiは従来、日本にはほとんど存在しない種と考えられてきた。ところが近年、日本各地の農場からの分離例が増加しており、本種の全国的な浸潤が伺われる。brunetti用生ワクチンの開発が望まれる。塩基配列の解析により、マウス抗体の相補性決定領域(CDR)がかなり正確に推定できるようになった。モノクローナル抗体(mAb)については抗原側のエピトープのアミノ酸配列や種々の生物活性が詳細に調べられているが、mAb側についてはあまり解析されてこなかった。我々は、イヌパルボウイルス(CPV)に対するマウスmAbを作出し、その性状を調べ、CDRのアミノ酸配列と比較した。【材料と方法】精製CPVを抗原とし、マウスに免疫して得られた脾臓細胞より、ハイブリドーマを作出した。スクリーニングは感染細胞を用いた間接蛍光抗体法および精製抗原を用いたELISAで行った。得られた6種のmAbのうち、3クローンがIgG1であり、残りはIgG2a、IgG2b、IgAであった。6クローンすべてのL鎖(κ鎖)とIgAを除く5つのH鎖の可変領域を5'RACE法でクローニングし、塩基配列を決定した。【結果】既知の遺伝情報よりCDRを推定し、塩基配列の相同性を比較したところ、3種類に分かれ、A(4クローン)、B(1クローン)、C(1クローン)とした。AとCの5クローンはCPVに対して中和活性を持ち、Bは中和活性、HI活性を示さなかった。ウエスタンブロッティングで反応したのはBクローンのみで、他は反応性を持たなかった。Aは精製抗原を結合したラテックスを凝集したが、Cクローンは凝集しなかった。【考察】以上により、CDRのアミノ酸配列と抗体の活性には相関があることが示された。抗体の性状とCDRのアミノ酸配列との関連を明らかにし、CDRのエピトープとの結合性に関する情報を得ることで、より高性能のmAbを遺伝子工学的に設計する基盤となると期待される。suisの感染は哺乳豚に発生する下痢症の一因である。本虫の哺乳豚における寄生率は高いが、その感染源は明らかにされていない。suisの感染実験を行い、排泄オーシスト数の推移を調査した。【方法】3頭の1ヶ月齢雌ミニブタに、成熟オーシストをそれぞれ10,000個(豚A)、100,000個(豚B)または1,000,000個(豚C)を経口投与した。豚AとCでは投与後27日に、初回投与時と同数のオーシストを用いて、2回目の投与を行った。これらの試験豚について、初回投与後50日まで糞便1g中のオーシスト数(OPG)を毎日測定した。【結果】投与後5~6日から全頭にオーシストの排泄がみられた。その後OPG値は2~3回のピークを示した後減少し、投与後18日には検出されなくなった。最高OPG値は投与後7日に認められ、豚Aで1,277,500、豚Bで288,400および豚Cで84,900であった。2回目投与後のオーシスト排泄は認められなかった。便の性状については、全頭、全期間において異常はみられなかった。suisの実験感染モデルとして有用であることが示された。suisを排泄し、これにより本虫による農場の汚染が拡大する可能性が示唆された。日本獣医学会(2006年)要旨:【目的】イヌ免疫グロブリン(Ig)遺伝子の塩基配列は報告されているが、組換え蛋白質の発現については報告がない。cDNAをクローニングし、バキュロウイルスベクターを用いて発現させた。【材料と方法】イヌの脾臓から抽出したRNAを鋳型として、γ鎖およびL鎖の一部の塩基配列情報を基にプライマーを設計した。RT-PCR法を行ってγ鎖cDNA、κ鎖とλ鎖CLドメイン、および5'RACE法を用いてVLドメインcDNAをクローニングし、バキュロウイルスを用いて組換え蛋白を発現させ、抗イヌIg抗血清を用いてウエスタンブロッティングを行った。【結果と考察】γ鎖では4クローンが得られ、474もしくは468個のアミノ酸をコードし、クローン間でのアミノ酸配列の相同性は85.7~98.8%であった。CHドメインの比較ではヒト、マウスとの相同性はそれぞれ64.1~71.0%、61.6~63.0%であった。κ鎖cDNAは242個のアミノ酸をコードし、ヒト、マウスのそれとの相同性はそれぞれ58.9%、57.9%であった。λ鎖cDNAは231個のアミノ酸をコードし、ヒト、マウスのそれとの相同性はそれぞれ84.8%、73.3%であった。組換えバキュロウイルス感染細胞および培養上清にγ鎖、κ鎖と思われる約52、27kDaの2本のバンドが観察され、非還元状態では、約150kDaのバンドが観察されたことからヘテロ4量体と考えられた。この組換え蛋白がプロテインAと結合することも確認した。laboratory社のIgG2に相当するものであった。日本獣医学会(2006年)要旨:【背景】アルミニウムゲルアジュバントは安全性は高いが、免疫惹起能は中等度である。オイルアジュバントは免疫惹起能は高度だが、接種反応が強く、注射局所に長く遺残するという難点がある。マイクロエマルジョンアジュバントは、少量のオイル成分と免疫賦活性のある界面活性剤とを高速でホモジナイズした微粒子からなり、高度の安全性と優れた免疫原性をあわせもつとされる。本アジュバントを豚萎縮性鼻炎(AR)ワクチンに応用し、その安全性と有効性について野外豚を用いて検討した。トキソイド(Pm-T)。試験農場:AR発生歴がある2農場。試験方法:繁殖候補豚152頭を使用。注射局所において異常は無く、本ワクチンの安全性が確認された。A農場の初乳のBb凝集価(幾何平均値)は、試験群初産で5,120、経産で31,042、対照群初産で1,280、経産で8,128であった。Pm-Tの平均ELISA値は試験群で順に1.52及び2.00以上、対照群では順に0.98及び1.73であった。試験群で見られた高値の抗体は、産子にも移行した。B農場もA農場と同じ傾向であった。【結論】マイクロエマルジョンを用いたARワクチンは、安全で、かつ高度な抗体応答を惹起することが確認された。日本獣医学会(2006年)要旨:【背景】イリドウイルス(RSIV)感染症は、主要養殖魚種で大きな被害をもたらす重要疾病である。今回、RSIV不活化ワクチン中の抗原量の測定を代替できる方法としてリアルタイムPCR(rPCR)法を応用したので報告する。5F株を接種して25°Cで21日間培養し、経時的に採材したウイルス培養液。ウイルス培養液に終濃度0.1%v/vとなるようホルマリンを添加し、4°Cで12日以上感作した不活化ウイルス液。不活化ウイルス液をリン酸緩衝食塩水希釈した試作ワクチンおよび市販のRSIV不活化ワクチン。LightCyclerを用いてrPCR反応を行った。感染価の測定は、GF細胞を用いたTCID50法によった。【結果と考察】ウイルス培養液を材料としたとき、rPCR法によるウイルス量の測定結果は、感染価と有意に相関した。ホルマリン不活化ウイルス液では、若干感度は低下するものの、培養液と同様に定量が可能であった。試作ワクチンおよび市販ワクチンについても含有されるウイルスDNAの定量が可能であった。本rPCR法は、不活化ワクチン中のウイルス抗原量の測定を代替する方法として応用可能であると考えられた。日本獣医学会(2006年)要旨:【目的】2004年11月に施行された「犬等の輸出入検疫規則」に示されたわが国の動物用狂犬病ワクチン(以下、ワクチン)2回注射法による抗体応答及び安全性を5施設で確認した。安全性は、犬又は猫に1用量又は10用量を複数回注射し主に臨床所見で確認した。【結果】犬血清の中和抗体価及びFAVN国際単位の幾何平均値は、1回注射後1か月目ではそれぞれ192倍及び2.6IU/mL、6か月目では76倍及び1.0IU/mL、2回注射後1か月目では1,655倍及び15.9IU/mL、6か月目では285倍及び4.7IU/mLであった。猫血清の中和抗体価は、1回注射後6か月目では470倍、2回注射後6か月目では2,048倍であった。犬血清の中和抗体価と国際単位は相関し、中和抗体価4倍ではOIEの推奨する抗体価0.5IU/mL以上を示す血清の割合は0%、8倍では20%、16倍では83%、32倍では92%、64倍では94%、128倍以上では100%であった。犬及び猫に10用量を2回以上注射しても臨床上の異常は認められなかった。【考察】わが国の動物用狂犬病ワクチンは1回注射でも0.5IU/mL以上の中和抗体を誘導することを確認した。「犬等の輸出入検疫規則」に示された4週間隔2回注射ではブースター効果により抗体価はさらに上昇し、安全性も確認できた。中和抗体価16倍~32倍が0.5IU/mLに相当すると考えられた。IB)は鶏伝染性気管支炎ウイルス(IBV)により引き起こされる感染症で、ワクチンによる予防が行われているが、IBVは多数の血清型が報告されており、血清型の違いによる抗原性の違いが大きいため、ワクチンが有効に作用しない場合がある。IBVはウイルスゲノム内に頻繁に変異を生じることが報告されており、血清型の違いはこの変異によって生じると考えられることから、国内で分離された株の一つである宮崎株のS1遺伝子のクローニングおよび塩基配列の解析を行った。ウイルスRNAを抽出し、RT-PCRを行った。既知のS1遺伝子塩基配列を元に設計されたプライマーを用いてS1遺伝子全領域を含む約1.7kbを増幅し、プラスミドにサブクローニングした後、塩基配列を決定した。IBV宮崎株のS1遺伝子は1614bpの塩基配列からなり、予想されるアミノ酸残基は538個であった。報告されている他の株の塩基配列との相同性は83%から98%であり、アミノ酸配列の相同性は78%から94%であった。IBVのS1タンパクは免疫応答において重要な役割を担っており、S1遺伝子の変異が新たな血清型出現の主な要因であると報告されていることから、今回解析したアミノ酸配列の変異が宮崎株の抗原性を決定していることが考えられた。今後、このS1遺伝子を用いて、免疫原性の検討を行なう予定である。わが国の現在の動物用狂犬病ワクチンはシードロットシステムにより製造される組織培養不活化ワクチンである。500万頭分が供給されている。本ワクチンの検定法の概要、国際基準に照らした有効性の評価成績、安全性について述べる。最後に、国内外での新しい狂犬病ワクチンの開発動向とその利用の成果を紹介する。(CDR)を維持したまま、異物認識応答を起こさないようにフレームワーク部分を遺伝子工学的な技術を用いてヒトのアミノ酸配列に変更したヒト化抗体が作製され、実用化されている。我々はイヌ免疫グロブリンのγ鎖、κ鎖cDNAをクローニングし、また、イヌパルボウイルス(CPV)に対する中和モノクローナル抗体(CP1a?CP6a)を作製して性状解析を行った(第141回獣医学会)。これらの抗体を使用して、CPVに対する抗体のイヌ化を試みた。CP2a抗体(Vκ鎖72%、Vγ鎖59%)をベースとして選択した。CP2a抗体はCPVのVP2タンパク質にウエスタンブロッティングで反応するが、CPVに対する中和やHI活性はない。イヌγ鎖、κ鎖およびCP2a抗体のCDRをcontact法に従って予測し、イヌ化VH、VLドメインを設計した。全合成したVドメインにCドメインを遺伝子工学的に結合させ、バキュロウイルスベクターで発現した。CP2a抗体は感染培養上清に分泌され、その量は2μg/mLと概算された。CPV-VP2タンパク質に対する反応性はウエスタンブロッティングで検討した。イヌ化CP2a抗体は、ベースとなったCP2a抗体とほぼ同じ結合能力を示し、また、CPVのVP2タンパク質上の結合領域も同じであり、反応部位は219-292番目のアミノ酸配列にあると予想された。以上のことからマウスモノクローナル抗体と同等の性能を持ったイヌ化抗体が作製されたと考えられた。遺伝子の高変異領域の塩基配列を分析することにより株型別を行い、他の性状解析結果とあわせ、その疫学的背景について考察した。動物衛生研究所にて調査された。塩基配列は常法に従い決定した。