X線照射による肺障害の予防及び/または治療剤を提供すること。その四級アンモニウム塩またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤等を提供する。Investigation)、第114巻、319-321頁、2004年]。Medicine)、第166巻、236-246頁、2002年]。Medicine)、第160巻、1771-1777頁、1999年]。これらの疾患の原因は様々であり、特定することが難しい。種々のサイトカイン及びケモカイン、活性酸素、プロテアーゼ等によって肺の血管内皮細胞や肺胞上皮細胞が障害(急性肺障害)を受けた後、通常は肺胞II型上皮細胞等の修復機転が働くが、障害の程度が強い場合や繰り返し侵襲が加わった場合は、線維化へまで進展していくと言われている。これら重篤な肺障害を引き起こす刺激の1つにX線が挙げられる。肺癌の治療手段の一つとしてX線照射が行なわれている。X線照射の晩期の副作用の1つとして肺線維症が報告されている。【0003】X線照射によって惹起される急性肺障害の後に、肺線維症が起こることが知られている。Onkologie)、第180(7)巻、442-448頁、2004年]。Physics)、第43(1)巻、169-181頁、1999年;同、第41巻、1029-1035頁、1998年]。Investigation)、第89(3)巻、981-988頁、1992年]。TNF-aが急性肺障害及びARDSの発症に関与することが知られている(別冊医学のあゆみ、ARDSのすべて、医歯薬出版、2004年3月)。オレイン酸処理によって肺の線維化にまで進行することが知られている。Pathology)、第135(2)巻、387-399頁、1989年]。Respiratoire)、第16(6)巻、733-743頁、1980年]。オレイン酸処理によって急性肺障害が惹起されることが知られている[チェスト(Chest)、第106(2)巻、583-587頁、1994年]。以上述べた通り、X線照射による肺障害とオレイン酸による肺障害は、病態の経過が一致し、病変部も類似していることから、その発症には共通の因子が関与していることが示唆される。GPR4は、肺に高発現する[ゲノミックス(Genomics)、第30巻、84-88頁、1995年]ことから、肺疾患との関与が示唆されている。Chemistry)、第276巻、41325-41335頁、2001年]。従って、X線刺激またはオレイン酸等の刺激による早期の肺障害を抑制すればその後の線維化への進展を予防または阻害できる可能性があると考えられる。有効成分とする、喘息、掻痒及び好中球性炎症疾患の治療剤が知られている(特許文献1、2及び3参照)。本発明の目的は、GPR4のシグナル伝達に関する機能を抑制する物質を有効成分として含有するX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤等を提供することにある。本発明は以下の(1)〜(13)に関する。(1)配列番号11で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質のシグナル伝達に関する機能を抑制する物質を有効成分として含有するX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。(2)以下の1)〜4)1)配列番号12で表される塩基配列の連続した15〜60塩基からなるオリゴヌクレオチドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、2)配列番号14で表される塩基配列の連続した15〜60塩基からなるオリゴヌクレオチドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、3)配列番号18で表される塩基配列の連続した15〜60塩基からなるオリゴヌクレオチドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、4)配列番号12、14及び18から選ばれるいずれか一つで表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ配列番号11で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質のシグナル伝達に関する機能を抑制する15〜60塩基からなるオリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、のいずれか一つを有効成分として含有するX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。【0009】(3)以下の1)〜4)1)配列番号11で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質と結合する抗体、2)配列番号13で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質と結合する抗体、3)配列番号17で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質と結合する抗体、4)配列番号11、13及び17から選ばれるいずれか一つで表されるアミノ酸配列において一つ以上のアミノ酸が欠失、置換または付加したアミノ酸配列からなり、かつ配列番号11で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質のシグナル伝達に関する機能を有する蛋白質と結合する抗体、のいずれか一つを有効成分として含有するX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。その四級アンモニウム塩またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。【0015】(式中、R10a、R10b及びR10cは同一または異なって水素原子または置換もしくは非置換の低級アルキルを表す)である前記(4)記載のX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。【0027】[式中、R18は前記と同義であり、R19は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のアラルキルまたは置換もしくは非置換の芳香族複素環基(テトラゾリルを除く)を表す]、-C(=X1)-OR20[式中、X1は酸素原子または硫黄原子を表し、R20は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノイル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキルカルボニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のアラルキル、置換もしくは非置換のアロイルまたは置換もしくは非置換の芳香族複素環基(テトラゾリルを除く)を表す。その薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。その薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。【0032】(8)R24が-NR15aR15b(式中、R15a及びR15bはそれぞれ前記と同義である)である前記(7)記載のX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。(9)R24が-NHR15a(式中、R15aは前記と同義である)である前記(7)記載のX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。(10)R24が-NHR15c(式中、R15cは置換もしくは非置換の低級シクロアルキルを表す)である前記(7)記載のX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。(11)R25が水素原子であり、R26a、R26b及びR26cが置換もしくは非置換の低級アルキルである前記(7)〜(10)のいずれかに記載のX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。(12)WがCR27(式中、R27は前記と同義である)である前記(7)〜(11)のいずれかに記載のX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。(13)WがCHである前記(7)〜(11)のいずれかに記載のX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤。本発明により、GPR4のシグナル伝達に関する機能を抑制する物質を有効成分として含有するX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤等が提供される。以下、式(I)、(II)または(III)で表される化合物をそれぞれ化合物(I)、(II)または(III)という。他の式番号の化合物についても同様である。化合物(I)、(II)及び(III)の各基の定義において、ハロゲンとしてはフッ素、塩素、臭素、ヨウ素の各原子が挙げられる。低級アルキルとしては、例えば直鎖状または分岐状の炭素数1〜10のアルキル、より具体的にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル等が挙げられる。低級アルコキシ、低級アルカノイル、低級アルコキシカルボニル、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルスルホニル及びモノまたはジ低級アルキルアミノにおける低級アルキル部分は、前記低級アルキルと同義である。ジ低級アルキルアミノの2つの低級アルキル部分は同一でも異なっていてもよい。低級シクロアルキルとしては、例えば炭素数3〜10の単環性、二環性または三環性のシクロアルキル、より具体的にはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ビシクロ[3.2.1]オクタニル、アダマンチル等が挙げられる。低級シクロアルキルカルボニルの低級シクロアルキル部分は前記低級シクロアルキルと同義である。低級アルケニルとしては、例えば直鎖状または分岐状の炭素数2〜10のアルケニルが挙げられ、より具体的にはビニル、アリル、2-ブテニル、3-ブテニル、4-ペンテニル、5-ヘキセニル、6-ヘプテニル、7-オクテニル、8-ノネニル、9-デセニル等が挙げられる。低級アルキニルとしては、例えば直鎖状または分岐状の炭素数2〜10のアルキニルが挙げられ、より具体的にはエチニル、プロパルギル、3-ブチニル、3-ヘキシニル、4-メチル-2-ペンチニル、6-ヘプチニル、7-オクチニル、8-ノニニル、9-デシニル等が挙げられる。飽和脂肪族環、より具体的にはシクロプロパン環、シクロブタン環、シクロペンタン環、シクロヘキサン環、シクロヘプタン環、シクロオクタン環等が挙げられる。【0038】アリール及びそれぞれが隣接する2つの炭素原子と一緒になって形成される芳香環から水素原子を1つ除いた基としては、例えば炭素数6〜14のアリールが挙げられ、より具体的にはフェニル、ナフチル、インデニル、アントリル等が挙げられる。アリールオキシカルボニル、アリールスルホニル及びアロイルのアリール部分は前記アリールと同義である。【0039】アラルキルのアリール部分は前記アリールと同義であり、アルキレン部分は前記低級アルキルから水素原子を1つ除いたものと同義である。アラルキルのアリール部分としては前記に加え、例えばアリールとシクロアルキルとが縮合した縮合環から水素原子を一つ除いた基も挙げられ、具体的にはインダニル、1,2,3,4-テトラヒドロナフチル、6,7,8,9-テトラヒドロ-5H-ベンゾシクロヘプチル等が挙げられる。【0040】フェニレンはフェニルから水素原子を1つ除去したものと同義である。ナフチレンはナフチルから水素原子を1つ除去したものと同義である。挙げられ、より具体的にはフリル、チエニル、ピロリル、ピリジル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリミジニル、トリアジニル、インドリル、キノリル、プリニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、チアジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピリドニル、オキサジアゾリル、ピラジニル等が挙げられる。水素原子を1つ除去したものと同義である。挙げられ、より具体的にはピロリジニル、ピペリジノ、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリノ、モルホリニル、チオモルホリノ、チオモルホリニル、ホモピペリジノ、ホモピペリジル、ホモピペラジニル、テトラヒドロピリジル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロベンゾフラニル、キヌクリジニル、インドリニル、イソインドリニル等が挙げられる。水素原子を1つ除いたものと同義である。硫黄原子を含んでいてもよい)等が挙げられ、より具体的にはピロリル、イミダゾリル、インドリル、インダゾリル、カルバゾリル等が挙げられる。【0043】それぞれが隣接する2つの炭素原子と一緒になって形成される複素環から水素原子と1つ除いた基は、前記複素環基と同義である。おける置換基は後記置換基群Bと同義である)、置換もしくは非置換の芳香族複素環基(テトラゾリルを除く。おける置換基としては、例えば同一または異なって置換数1〜3の低級アルキル、ハロゲン置換低級アルキル、ヒドロキシ置換低級アルキル、低級アルコキシカルボニル等が挙げられる)等が挙げられる]、-C(=NOR28)R29[式中、R28は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル(該置換低級アルキルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる)、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル(該置換低級シクロアルキルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる)、置換もしくは非置換のアリール(該置換アリールにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル等が挙げられる)、置換もしくは非置換のアラルキル(該置換アラルキルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル等が挙げられる)または置換もしくは非置換の芳香族複素環基(テトラゾリルを除く。挙げられる]等が挙げられる〉であってもよい。置換低級アルコキシ、置換低級アルカノイル、置換低級シクロアルキル、置換低級シクロアルキルカルボニル、置換低級アルコキシカルボニル、置換低級アルキルスルホニル、置換低級アルケニル及び置換低級アルキニルにおける置換基は前記の置換基に加え、置換もしくは非置換のアリール(該置換アリールにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級アルコキシ等が挙げられる)であってもよい。ジ(低級アルキル)アミノ及びジ(低級アルキル)アミノカルボニルの2つの低級アルキル部分は同一でも異なっていてもよい。カルボニルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数1〜3の低級アルキル、ハロゲン置換低級アルキル、ヒドロキシ置換低級アルキル、低級アルコキシカルボニル等が挙げられる)等が挙げられる。脂環式複素環上から任意の1つの水素原子を除いてできる2価基における置換基は、前記の置換基に加えオキソであってもよい。ならびに脂環式複素環基はそれぞれ前記と同義であり、ハロゲン置換低級アルキル及びヒドロキシ置換低級アルキルのアルキレン部分は前記低級アルキルから水素原子を1つ除いたものと同義であり、ハロゲン置換低級アルキルのハロゲン部分は前記ハロゲンと同義である。ジ(低級アルキル)アミノの2つの低級アルキル部分は同一でも異なっていてもよい。おける置換基は前記置換基群Bと同義である)、置換もしくは非置換の芳香族複素環基(テトラゾリルを除く。おける置換基は前記置換基群Bと同義である)を表すか、またはR30aとR30bが隣接する窒素原子と一緒になって置換もしくは非置換の複素環基(該隣接する窒素原子と一緒になって形成される置換複素環基における置換基は前記置換基群Bと同義である)を形成する]、-CONR30cR30d(式中、R30c及びR30dはそれぞれ前記R30a及びR30bと同義である)等が挙げられる。ならびに隣接する窒素原子と一緒になって形成される複素環基はそれぞれ前記と同義である。マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。本発明者らは、GPCRであるGPR4の有するシグナル伝達に関する機能を抑制する物質が、X線照射による肺障害の予防及び/または治療に有効であるとの新知見を見出し、本発明を完成するに至った。本発明者らは、構成活性型のGPCRであるGPR4の構成的活性を抑制する物質の探索を行い、GPR4の構成的活性を抑制する物質が、X線照射による肺障害の予防及び/または治療に有効であることを見出した。(ADCC活性)等によりGPR4発現細胞を減少させる物質等が含まれる。上記物質は、これら機能を有する物質であれば、その構造は特に限定されず、公知の構造を有するものでもよい。GPR4としては、例えば配列番号11、13及び17から選ばれるいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質、あるいは配列番号11、13及び17から選ばれるいずれか一つに記載のアミノ酸配列において一つ以上のアミノ酸が欠失、置換または付加したアミノ酸配列を有し、かつ配列番号11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシグナル伝達に関する機能を有する蛋白質等が挙げられる。用いて、例えば配列番号11、13及び17から選ばれるいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするDNAに部位特異的変異を導入することにより、取得することができる。欠失、置換または付加したアミノ酸の数は特に限定されないが、1個〜数10個、好ましくは1〜20個、より好ましくは1〜10個、さらに好ましくは1〜5個である。配列番号11、13及び17から選ばれるいずれか一つに記載のアミノ酸配列において一つ以上のアミノ酸残基が欠失、置換または付加したとは、該アミノ酸配列中の任意かつ1もしくは複数の位置において、1または複数のアミノ酸残基の欠失、置換または付加があることを意味し、欠失、置換または付加が同時に生じてもよく、欠失、置換または付加されるアミノ酸残基については、天然型と非天然型とを問わない。天然型アミノ酸残基としては、L-アラニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-グルタミン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-アルギニン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン及びL-システインの各残基等が挙げられる。以下に、相互に置換可能なアミノ酸残基の好ましい例を示す。同一群に含まれるアミノ酸残基は相互に置換可能である。A群:ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、バリン、ノルバリン、アラニン、2-アミノブタン酸、メチオニン、O-メチルセリン、tert-ブチルグリシン、tert-ブチルアラニン、シクロヘキシルアラニンB群:アスパラギン酸、グルタミン酸、イソアスパラギン酸、イソグルタミン酸、2-アミノアジピン酸、2-アミノスベリン酸C群:アスパラギン、グルタミンD群:リジン、アルギニン、オルニチン、2,4-ジアミノブタン酸、2,3-ジアミノプロピオン酸E群:プロリン、3-ヒドロキシプロリン、4-ヒドロキシプロリンF群:セリン、スレオニン、ホモセリンG群:フェニルアラニン、チロシンまた、配列番号11、13及び17から選ばれるいずれか一つに記載のアミノ酸配列において一つ以上のアミノ酸残基が欠失、置換または付加したアミノ酸配列を有する蛋白質が、配列番号11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシグナル伝達に関する機能を有するには、そのアミノ酸配列と配列番号11記載のアミノ酸配列とが、少なくとも75%以上、通常は80%以上、好ましくは90%以上、さらには95%以上の同一性を有していることが好ましい。(1990)]を用いて決定することができる。403(1990)]。BLASTに基づいたBLASTNによって塩基配列を解析する場合には、パラメーターは例えばscore=100、wordlength=12とする。BLASTに基づいてBLASTXによってアミノ酸配列を解析する場合には、パラメーターは例えばscore=50、wordlength=3とする。(1997)]を参照}。これらの解析方法の具体的な手法は公知である(http://www.ncbi.nlm.nih.gov.参照)。【0056】GPR4自身の発現を阻害または抑制する物質としては、例えば、配列番号12、14及び18から選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列から選ばれる連続した15〜60塩基からなるオリゴヌクレオチドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチド(以下、アンチセンス・オリゴヌクレオチドともいう)、配列番号12、14及び18から選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列を有するDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ配列番号11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質の発現を阻害または抑制するオリゴヌクレオチド、これらのオリゴヌクレオチドの誘導体(以下、オリゴヌクレオチド誘導体という)等が挙げられる。上記アンチセンス・オリゴヌクレオチドとしては、配列番号12、14及び18から選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列から選ばれる連続した15〜60塩基からなるオリゴヌクレオチドの相補的配列を有するアンチセンス・オリゴヌクレオチドであれば特に限定されないが、好ましくは17〜60塩基、より好ましくは20〜60塩基、さらに好ましくは30〜60塩基からなるオリゴヌクレオチドの相補的配列を有するアンチセンス・オリゴヌクレオチドが挙げられる。好ましくは翻訳開始領域にある上記オリゴヌクレオチドの相補的配列を有するアンチセンス・オリゴヌクレオチドが挙げられる。該アンチセンス・オリゴヌクレオチドは、配列番号12、14及び18から選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列またはその断片の塩基配列に関する情報に基づき、常法により、例えばDNA合成機を用いることにより調製することができる。(1996)]に準じて、GPR4自身の発現を阻害または抑制することができる。°C条件下でフィルターを洗浄することにより同定できるDNA等を挙げることができる。(1995)等に記載されている方法に準じて行うことができる。ハイブリダイズするヌクレオチドとしては、例えば上記BLASTやFASTA等を用いて計算したときに12、14及び18から選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列を有するDNAの相補的配列を有するDNAと少なくとも75%以上の相同性を有するDNAが好ましく、より好ましくは80%以上の相同性を有するDNA、さらに好ましくは95%以上の相同性を有するDNAを挙げることができる。ヌクレオチドとしては、DNA、RNA等いずれも用いられるがDNAが好適に用いられる。上記アンチセンス・オリゴヌクレオチドもしくは該アンチセンス・オリゴヌクレオチド誘導体、または配列番号12、14及び18から選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列を有するDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチドもしくは該ヌクレオチド誘導体を単独でまたはレトロウィルスベクター、アデノウィルスベクター、アデノウィルスアソシエーテッドウィルスベクター等の遺伝子治療用ベクターに挿入した後、下記に記載した常法に従って製剤化したものをX線照射による肺障害の予防及び/または治療剤として使用することもできる。塩溶液とグルコース溶液との混合溶液等が挙げられる。常法に従い、これらの基剤に浸透圧調整剤、pH調整剤、ゴマ油、ダイズ油等の植物油またはレシチンもしくは非イオン界面活性剤等の界面活性剤等の助剤を加えて、溶液、懸濁液または分散液として注射剤を調製してもよい。操作により用時溶解用製剤として調製することもできる。該予防及び/または治療剤は、液体の場合はそのままで、固体の場合は、投与直前に、必要により滅菌処理をした上記の基剤に溶解して使用することができる。投与方法としては、例えば患者の治療部位に吸収されるように、局所的に投与する方法を挙げることができる。非ウイルス遺伝子移入法によっても目的とする治療部位にDNAを輸送することができる。]等をあげることができる。【0065】リガンドのGPR4への結合を阻害する物質としては、例えば、GPR4を認識する抗体、GPR4に拮抗作用を有する化合物等をあげることができる。上記抗体としては、GPR4を認識する抗体であればいずれも用いることができるが、GPR4を特異的に認識する抗体が好ましい。該抗体はポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもよい。このような抗体として、例えば、GPR4を認識する中和抗体等をあげることができる。ヒト型キメラ抗体、ヒト化抗体等も本発明における抗体として用いることができる。(ADCC活性)を持つ抗体等をあげることができる。上記抗体は、例えば、以下の方法に準じて調製することができる。(1)ポリクローナル抗体の作製GPR4またはその部分断片ポリペプチドの精製標品、あるいはGPR4の一部のアミノ酸配列を有するペプチドを抗原として用い、動物に投与することによりポリクローナル抗体を作製することができる。投与する動物としては、ウサギ、ヤギ、ラット、マウス、ハムスター等を用いることができる。haemocyanin)や牛チログロブリン等のキャリア蛋白に共有結合させたものを抗原とするのが望ましい。抗原とするペプチドは、ペプチド合成機で合成することができる。回目の投与の後1〜2週間おきに3〜10回行う。(1988)]等で確認する。免疫に用いた抗原に対し、その血清が充分な抗体価を示した非ヒト哺乳動物より血清を取得し、該血清を分離、精製することによりポリクローナル抗体を取得することができる。]、またはDEAE-セファロースカラム、陰イオン交換カラム、プロテインAまたはG-カラムあるいはゲル濾過カラム等を用いるクロマトグラフィー等を、単独でまたは組み合わせて処理する方法が挙げられる。免疫に用いたGPR4またはその部分断片ポリペプチドの精製標品、あるいはGPR4の一部のアミノ酸配列を有するペプチドに対し、その血清が十分な抗体価を示したラットを抗体産生細胞の供給源として供する。該抗体価を示したラットに抗原物質を最終投与した後3〜7日目に、脾臓を摘出する。該脾臓をMEM培地(日水製薬社製)中で細断し、ピンセットでほぐし、1,200rpmで5分間遠心分離した後、上清を捨てる。得られた沈殿画分の脾細胞をトリス−塩化アンモニウム緩衝液(pH7.65)で1〜2分間処理し赤血球を除去した後、MEM培地で3回洗浄し、得られた脾細胞を抗体産生細胞として用いる。骨髄腫細胞としては、マウスまたはラットから取得した株化細胞を使用する。]等を用いることができる。μg/ml)及び牛胎児血清(FCS)(CSL社製、10%)を加えた培地(以下、正常培地という)に、さらに8-アザグアニン(15μg/ml)を加えた培地]で継代するが、細胞融合の3〜4日前に正常培地で培養し、融合には該細胞を2×107個以上用いる。7.2)でよく洗浄し、細胞数が、抗体産生細胞:骨髄腫細胞=5〜10:1になるよう混合し、1,200rpmで5分間遠心分離した後、上清を捨てる。mlになるように調製する。