少なくとも15ヌクレオチドにわたって互いに相補的である2本の別個のRNA鎖を含む経口投与用の低分子干渉リボ核酸(siRNA)であって、ここで各鎖は49ヌクレオチド以下であり、そしてここでその鎖の少なくとも1本は少なくとも一つの化学的修飾を含有するsiRNAを提供すること。少なくとも15ヌクレオチドにわたって互いに相補的である2本の別個のRNA鎖を含む経口投与用の低分子干渉リボ核酸(siRNA)であって、ここで各鎖は49ヌクレオチド以下であり、そしてここでその鎖の少なくとも1本は少なくとも一つの化学的修飾を含有するsiRNAは、血管形成障害を処置するために使用することができること見いだした。背景RNA干渉は当初植物において転写後遺伝子サイレンシング(PTGS)として見出された、二本鎖RNA(dsRNA)が引き金となる高度に保存されたメカニズムであり、そしてdsRNAに相同な遺伝子の転写を下方調節できる1。dsRNAは最初にダイサーにより低分子干渉RNA(siRNA)と称される21−23ヌクレオチドの短い二重鎖にプロセシングされる2。それはRNA誘起サイレンシング複合体(RISC)に組み込まれているので、RISCの構成成分であるアルゴノート2により標的mRNAを相同性の領域の中央で切断することにより遺伝子サイレンシングを媒介することができる3。al(2001)4では、合成siRNAの直接導入によりショウジョウバエのみならず哺乳動物細胞においてもRNA干渉遺伝子サイレンシングが媒介されることが実証された。それ以来siRNA媒介遺伝子サイレンシングは標的同定および標的バリデーション研究の双方で、強力でそして広く用いられる分子生物学的手段になってきている。動物実験での遺伝子サイレンシングのためのsiRNAの使用は限られた量の動物モデルでしか記載されていない。未修飾siRNAは眼において局所的に5、中枢神経系において髄腔内または小脳内に6、および呼吸器系ウイルスの阻止のために鼻内に7送達された。この研究法により、主に肝臓への急速な送達が可能になる8。未修飾siRNAの全身投与に関しては非常に限られた数の研究しか報告されていない。マウスモデルに静脈内投与し、そして腫瘍成長阻害およびゲムシタビンに対する化学増感を観察した。alはアポリポタンパク質Bを内在的にサイレンシングするための高度に化学的に修飾されたsiRNAの全身使用を報告した。siRNAの高用量の50mg/kgでの腹腔内投与によりApoBタンパク質レベルおよびリポタンパク質濃度が低下した10。これらの実例にもかかわらず、全身送達時のsiRNAのインビボ使用は、このテクノロジーを標的バリデーションまたは治療適用に広く適用できるようにするために、改良を必要とする。実際、未修飾siRNAは、主に血流で豊富なヌクレアーゼによる酵素消化に供される。siRNAの薬理学的特性を改善するために、いくつかのグループはこれらの試薬の化学的修飾を調査した。記載された研究法はその中でも非常に様々で、そして系統的な研究は依然実施されていないが、結果の概要により化学的修飾に対するsiRNAの寛容性を決定することが可能になる。Acid)(LNA)16のようないくつかの化学が調査されている。これらの研究により、修飾に関する寛容性は化学依存性のみならず、位置依存性でもあることが強調された。本発明は改善された薬理学的特性を有する最小限に修飾されたsiRNAを提供する。最小限に修飾されたsiRNAは、3’エキソヌクレアーゼ消化を防御するために各鎖の3’末端で修飾された19塩基対二本鎖RNAであり:21ヌクレオチドsiRNAの3’−ジデオキシヌクレオチドオーバーハングが一般的な3’−ヒドロキシプロピルホスホジエステル部分により置き換えられており、そして各鎖の3’末端で最初に塩基対形成している2個のヌクレオチドの修飾が血清安定性をさらに強化する。成体マウスに腹腔内または経口適用した場合、修飾されたsiRNAは成長因子誘起の血管形成モデルにおいてより高度な効力を表し、それは血清安定性の増大に相関する。一つの態様では、本発明は経口投与用の低分子干渉リボ核酸(siRNA)を提供し、該siRNAは少なくとも15ヌクレオチドにわたって互いに相補的である2本の別個のRNA鎖を含み、ここで各鎖は49ヌクレオチド以下であり、そしてここでその鎖の少なくとも1本は少なくとも一つの化学的修飾を含有する。一つの実施態様では、siRNAは少なくとも1個の修飾されたヌクレオチドを含む。別の実施態様では、siRNAは少なくとも1個の3’末端キャップを含む。別の実施態様では、該修飾されたヌクレオチドは2’アルコキシリボヌクレオチド、2’アルコキシアルコキシリボヌクレオチド、ロックされた核酸リボヌクレオチド(LNA)、2’−フルオロリボヌクレオチド、モルホリノヌクレオチドの中から選択される。別の実施態様では、該修飾されたヌクレオチドはホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミダート、ボラノホスホノエートおよびアミド結合の中から選択される修飾されたヌクレオシド内結合を有するヌクレオチドの中から選択される。別の実施態様では、該2本のRNA鎖は互いに完全に相補的である。別の実施態様では、該siRNAは5’末端または3’末端の少なくとも一つに1から6ヌクレオチドオーバーハングを含む。別の実施態様では、siRNAは少なくとも1個の3’キャップを含有し、それは3’炭素を介して3’末端に抱合された化学的部分であり、かつ式I:【化1】[式I](式中、XはOまたはSであり、R1およびR2は独立してOH、NH2、SH、アルキル、アリール、アルキル−アリール、アリール−アルキルであり、ここでアルキル、アリール、アルキル−アリール、アリール−アルキルをさらなるヘテロ原子および官能基、好ましくはN、OもしくはSの群から選択されるヘテロ原子またはOH、NH2、SH、カルボン酸もしくはエステルの群から選択される官能基により置換することができ;またはR1およびR2は式Y−Zのものでよく、ここでYはO、N、Sであり、そしてZはH、アルキル、アリール、アルキル−アリール、アリール−アルキルであり、ここでアルキル、アリール、アルキル−アリール、アリール−アルキルをさらなるヘテロ原子、好ましくはN、OもしくはSの群から選択されるヘテロ原子により置換することができる)の化合物の中から選択される。別の実施態様では、siRNAは少なくとも15ヌクレオチドにわたってVEGFR−1、VEGFR−2、VEGFR3、Tie2、bFGFR、IL8RA、IL8RB、FasまたはIGF2RのmRNAまたはプレmRNAに相補的である少なくとも1本の鎖を含有する。別の実施態様では、siRNAは配列番号:1−900から選択される配列を含む少なくとも1本の鎖を含有する。別の実施態様では、siRNAは配列番号:901−930からなる群から選ばれる。別の実施態様では、siRNAは標準的な胃酸アッセイにおいて、同一ヌクレオチド配列を有する未修飾siRNAよりも大きな安定性を有する。別の実施態様では、siRNAは標準的な胃酸アッセイにおいて、30分暴露後に50%以上である安定性を有する。別の実施態様では、siRNAは標準的な血清アッセイにおいて未修飾siRNAよりも大きな安定性を有する。別の実施態様では、siRNAは標準的な血清アッセイにおいて30分暴露後に50%以上である安定性を有する。別の実施態様では、siRNAは標準的な腸洗浄液アッセイにおいて未修飾siRNAよりも大きな安定性を有する。別の実施態様では、siRNAは同一ヌクレオチド配列の未修飾siRNAと比較して経口バイオアベイラビリティーが強化されている。一つの態様では、本発明は一つまたはそれより多い前記の特性を有するsiRNAを含む医薬組成物を提供する。別の態様では、本発明は医薬品として使用するための任意の一つまたはそれより多い前記の特性を有するsiRNAを提供する。別の態様では、本発明は血管形成障害の処置用医薬品の製造における任意の一つまたはそれより多い前記の特性を有するsiRNAの使用を提供する。別の態様では、本発明はインビトロで血管形成過程を阻害するための任意の一つまたはそれより多い前記の特性を有するsiRNAの使用を提供する。pGl3−siRNA(マウス血清中の野生型siRNA)の代謝分解;a−c)マウス血清中0分、30分および180分インキュベートした後の未修飾siRNAのイオン交換−HPLC分析;37°Cで30分インキュベートした後のイオン交換HPLCにおける主要なピークを単離し、そしてLC−MSに再注入した、d)検出された分子量およびその割り当ての表;e)ESI−MSスペクトル。pGl3−siRNA(マウス血清中の野生型siRNA)の代謝分解;a−c)マウス血清中0分、30分および180分インキュベートした後の未修飾siRNAのイオン交換−HPLC分析;37°Cで30分インキュベートした後のイオン交換HPLCにおける主要なピークを単離し、そしてLC−MSに再注入した、d)検出された分子量およびその割り当ての表;e)ESI−MSスペクトル。pGl3−siRNA(マウス血清中の野生型siRNA)の代謝分解;a−c)マウス血清中0分、30分および180分インキュベートした後の未修飾siRNAのイオン交換−HPLC分析;37°Cで30分インキュベートした後のイオン交換HPLCにおける主要なピークを単離し、そしてLC−MSに再注入した、d)検出された分子量およびその割り当ての表;e)ESI−MSスペクトル。pGl3−siRNA(マウス血清中の野生型siRNA)の代謝分解;a−c)マウス血清中0分、30分および180分インキュベートした後の未修飾siRNAのイオン交換−HPLC分析;37°Cで30分インキュベートした後のイオン交換HPLCにおける主要なピークを単離し、そしてLC−MSに再注入した、d)検出された分子量およびその割り当ての表;e)ESI−MSスペクトル。pGl3−siRNA(マウス血清中の野生型siRNA)の代謝分解;a−c)マウス血清中0分、30分および180分インキュベートした後の未修飾siRNAのイオン交換−HPLC分析;37°Cで30分インキュベートした後のイオン交換HPLCにおける主要なピークを単離し、そしてLC−MSに再注入した、d)検出された分子量およびその割り当ての表;e)ESI−MSスペクトル。【図3】図3:マウス胃酸中三つの異なる型式でのsiRNAの安定性。試料をマウス胃酸中37°Cで2μMの濃度でインキュベートした。親化合物のバンドを定量することにより親化合物の消失を2−6時間にわたって追跡した。【図4】図4:腸洗浄液中四つの異なる型式でのsiRNAの安定性。試料を肝ミクロソーム中37°Cで5μMの濃度でインキュベートした。【図5】図5:肝ミクロソーム中四つの異なる型式でのsiRNAの安定性。試料をラット腸洗浄液からの腸液中37°Cで2μMの濃度でインキュベートした。(左から右に)レーン1:ds【図6】図6:マウス血清中四つの異なる型式でのsiRNAの安定性。試料をマウス血清中37°Cで2μMの濃度でインキュベートした。親化合物のバンドを定量することにより親化合物の消失を6時間にわたって追跡した。cellulo)での特徴付け。siRNAを3濃度(1、5、10nM)でMS1細胞にトランスフェクトした。FACSによりVEGFR2細胞表面レベルを測定することによりサイレンシング効力を評価した。siRNAのインビボ試験。siRNAの結果を示す。siRNAのプールを毎日3日間腹腔内に与えた。siRNAのインビボ試験。siRNAの結果を示す。siRNAのプールを毎日3日間腹腔内に与えた。siRNAのインビボ試験。siRNAでのi.p.処置が腫瘍発達を有意に低下させることを示す。siRNAの20μg/マウスのi.p.注射が有意な腫瘍成長の阻害を招くことを示す。siRNAのインビボ試験。siRNAでのi.p.処置が腫瘍発達を有意に低下させることを示す。siRNAの20μg/マウスのi.p.注射が有意な腫瘍成長の阻害を招くことを示す。siRNAのインビボ試験。siRNAを20μg/マウス/日を毎日3日間経口的に与えた。siRNAのインビボ試験。siRNAを毎日腹腔内(1および0.2μg/マウス/日)または経口的に(20および5μg/マウス/日)3日間経口与えた。図11a:切除組織の重量;図11b:Tie2タンパク質ノックダウン。siRNAのインビボ試験。siRNAを毎日腹腔内(1および0.2μg/マウス/日)または経口的に(20および5μg/マウス/日)3日間経口与えた。図11a:切除組織の重量;図11b:Tie2タンパク質ノックダウン。本発明は哺乳動物における血管形成障害を処置するための組成物および方法に関する。本発明は哺乳動物への経口投与時に血管形成障害を処置するために使用することができる低分子干渉RNA(「siRNA」)に関する。血管形成は以下の標的/遺伝子を含む血管内皮細胞を標的とする:VEGFR−1(GenBank受入番号AF06365);VEGFR−2(GenBank受入番号AF063658);VEGFR−3(GenBank受入番号(NM_002020);Tie2(TEK)(GenBank受入番号NM_000459);bFGFR(GenBank受入番号M60485);IL8RA(GenBank受入番号L19591);IL8RB(GenBank受入番号L19593);Fas(GenBank受入番号X89101);IGF2R(GenBank受入番号NM_000876)。本発明によるsiRNA分子はRNA干渉(「RNAi」)を媒介する。「RNAi」なる用語は当分野において周知であり、そして一般的に標的遺伝子に相補的である領域を有するsiRNAによる、細胞における一つまたはそれより多い標的遺伝子の阻害を意味すると理解される。26:199−213(2002)参照)。本発明によるsiRNAの遺伝子発現に及ぼす影響は、本発明によるRNA分子で処理されていない細胞と比較した場合、典型的には少なくとも10%、33%、50%、90%、95%または99%まで阻害される標的遺伝子の発現に至る。本発明による「siRNA」または「低分子干渉リボ核酸」は以下の態様を含む当分野において公知の意味を有する。siRNAは生理学的条件下で相補的領域に沿ってハイブリダイズする2本の鎖のリボヌクレオチドからなる。鎖は別個であるが、特定の実施態様では、分子リンカーにより結合し得る。個々のリボヌクレオチドは未修飾天然発生リボヌクレオチド、未修飾天然発生デオキシリボヌクレオチドでよいか、またはそれらは本明細書の他の部分で記載されるような化学的に修飾された、もしくは合成性でよい。本発明によるsiRNA分子は標的遺伝子のmRNAの領域と実質的に同一である二本鎖領域を含む。標的遺伝子の対応する配列に対して100%同一性を有する領域が適当である。この状態は「完全に相補的」と称される。その領域はまた、標的化されるmRNAの領域の長さに依存して、標的遺伝子の対応する領域と比較して1、2または3個の誤対合を含有してもよく、そしてそのようなものは完全に相補的ではないかもしれない。一つの実施態様では、本発明のRNA分子は1個の所定の遺伝子を特異的に標的化する。望ましいmRNAのみを標的化するために、siRNA試薬は標的mRNAに対して100%相同性、および細胞または生物に存在する全てのその他の遺伝子に対して少なくとも2個の誤対合したヌクレオチドを有し得る。具体的な標的配列の発現を有効に阻害するために、十分な配列同一性を有するsiRNAを分析および同定するための方法が当分野において公知である。Group)によりヌクレオチド配列間の差異パーセントを計算することができる。【0021】RNAi試薬の有効性に影響を及ぼす別の因子は標的遺伝子の標的領域である。RNAi試薬による阻害に有効な標的遺伝子の領域を実験方法により決定することができる。適当なmRNA標的領域はコード化領域であろう。5’−UTR、3’−UTRおよびスプライスジャンクションのような未翻訳領域もまた適当である。20:6877−6888(2001)に記載されるようなトランスフェクションアッセイをこの目的のために実施することができる。当分野では当業者に周知である多くのその他の適当なアッセイおよび方法が存在する。本発明にしたがって、標的に相補的なsiRNAの領域の長さは10から100ヌクレオチド、12から25ヌクレオチド、14から22ヌクレオチドまたは15、16、17もしくは18ヌクレオチドでよい。対応する標的領域に対する誤対合が存在する場合、相補的領域の長さは一般的に幾分長くなることが要求される。siRNAはオーバーハングした末端(標的に対して相補的であってもなくてもよい)、または標的配列にではなくそれ自体に相補的なさらなるヌクレオチドを担持し得るので、siRNAの各別個の鎖の全体の長さは10から100ヌクレオチド、15から49ヌクレオチド、17から30ヌクレオチドまたは19から25ヌクレオチドでよい。「各鎖が49ヌクレオチド以下である」なる語句は、全ての修飾または未修飾ヌクレオチドを含むが、鎖の3’または5’末端に付加され得る任意の化学的部分を含まない、鎖の連続したヌクレオチドの全数を意味する。鎖に挿入された短い化学的部分は計数されないが、2本の別個の鎖を結合するために設計された化学的リンカーは連続したヌクレオチドを創成するとは考えられない。「5’末端または3’末端の少なくとも一つにおける1から6ヌクレオチドオーバーハング」なる語句は生理学的条件下で2本の別個の鎖から形成される相補的siRNAの構造を指す。末端ヌクレオチドがsiRNAの二本鎖領域の一部である場合、siRNAはブラント末端と考えられる。一つまたはそれより多いヌクレオチドが末端で対形成されない場合、オーバーハングが創成される。オーバーハングの長さはオーバーハングするヌクレオチドの数により測定される。オーバーハングするヌクレオチドはいずれかの鎖の5’末端または3’末端のいずれかでよい。本発明によるsiRNAは少なくとも1本の鎖に少なくとも1個の修飾されたヌクレオチドを含むことにより、インビボで経口送達に適当な高い安定性を付与する。故に本発明によるsiRNAは少なくとも1個の修飾されたまたは非天然リボヌクレオチドを含有する。多くの公知の化学的修飾についての冗長な記載は公開PCT特許出願第WO200370918号に示され、そして本明細書で繰り返さない。経口送達のための適当な修飾をさらに具体的に本明細書の実施例および記載にて示す。78:486−504(1995))すなわちアルコキシアルコキシ基)または塩基部分(すなわち代替ヌクレオチド鎖の別の具体的な塩基と対形成する能力を維持する非天然または修飾された塩基)が含まれる。その他の修飾には、限定するものではないがリン酸エステル基の置換(隣接するリボヌクレオチドを例えばホスホロチオエート、キラルホスホロチオエートまたはホスホロジチオエートと連結させる)を含むいわゆる「バックボーン」修飾が含まれる。最後に、時に本明細書では3’キャップまたは5’キャップと称される末端修飾が重要である。表1にて説明されるようにキャップは、siRNAに安定性を付与することが見出されている「T−T」のようなさらなるヌクレオチドの単純な付加からなってよい。キャップは当業者に公知である錯体化学からなってよい。以下の実施例で用いられる一つの実施態様では、3’キャップは3’炭素を介して3’末端に抱合された化学的部分であり、かつ式I:【化2】[式I](式中、XはOまたはSであり、R1およびR2は独立してOH、NH2、SH、アルキル、アリール、アルキル−アリール、アリール−アルキルであり、ここでアルキル、アリール、アルキル−アリール、アリール−アルキルをさらなるヘテロ原子および官能基、好ましくはN、OもしくはSの群から選択されるヘテロ原子またはOH、NH2、SH、カルボン酸もしくはエステルの群から選択される官能基により置換することができ;またはR1およびR2は式Y−Zのものでよく、ここでYはO、N、Sであり、そしてZはH、アルキル、アリール、アルキル−アリール、アリール−アルキルであり、ここでアルキル、アリール、アルキル−アリール、アリール−アルキルをさらなるヘテロ原子、好ましくはN、OもしくはSの群から選択されるヘテロ原子により置換することができる)の化合物の中から選択される。糖部分での修飾の実例には2’アルコキシリボヌクレオチド、2’アルコキシアルコキシリボヌクレオチド、ロックされた核酸リボヌクレオチド(LNA)、2’−フルオロリボヌクレオチド、モルホリノヌクレオチドが挙げられる。ヌクレオシド内結合を修飾することもできる。ヌクレオシド内結合の実例にはホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミダートおよびアミド結合が挙げられる。R1およびR2は一緒に1から24個のC原子、1から12個のC原子、2から10個のC原子、1から8個または2から6個のC原子を含み得る。別の実施態様では、R1およびR2は独立してOH、低級アルキル、低級アリール、低級アルキル−アリール、低級アリール−アルキルであり、ここで低級アルキル、低級アリール、低級アルキル−アリール、低級アリール−アルキルを前記で定義されるようなさらなるヘテロ原子および官能基により置換することができる。別の実施態様では、R1およびR2は双方ともOHではない。有機ラジカルまたは化合物に関連する「低級」なる用語は7個以下の炭素原子、好ましくは1−4個の炭素原子を含む分岐しているかまたは分岐していなくてよい化合物またはラジカルを意味する。低級アルキルは、例えばメチル、エチル、n−プロピル、イソプロピル、n−ブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、n−ペンチルおよび分岐したペンチル、n−ヘキシルおよび分岐したヘキシルを表す。アルコキシの実例にはO−Met、O−Eth、O−prop、O−but、O−pent、O−hexが挙げられる。少なくとも1個の修飾されたまたは非天然リボヌクレオチドを含有するsiRNAを含むsiRNAの合成のための方法は周知であり、そして当業者に容易に利用可能である。種々の合成化学が公開PCT特許出願第WO2005021749号および第WO200370918号(双方共に出典明示により本明細書の一部とする)に示されている。反応を溶液中または好ましくは固相でポリマーに支持された試薬を使用することにより実施でき、続いてRNAiを媒介することができるsiRNA分子が形成される条件下で合成されたRNA鎖を組み合わせる。本発明は経口送達に適当である少なくとも1個の修飾されたヌクレオチドを含有するするsiRNAを提供する。機能的な表現ではこれは、siRNAは経口投与時に適当な薬物動態および体内分布を有し、関連する標的組織への送達を達成するであろうということを意味する。欠如、および薬物様の挙動が必要とされる。本明細書の別の部分で開示される標準的な胃酸アッセイおよび標準的な血清アッセイに基づいてsiRNAのこれらの様相の多くを予想することができる。別の態様では、本発明は、RNAiにより少なくとも1個の標的遺伝子を阻害することができる本発明によるsiRNAを細胞に導入することを含む標的遺伝子の阻害のための方法を提供する。各々別の標的領域に特異的である1を超える種のsiRNAを同時にまたは逐次的に細胞に導入することができる。本発明は任意の型の標的遺伝子またはヌクレオチド配列に限定されるものではない。ウイルス遺伝子または発癌遺伝子でよい。血管形成の部位に蓄積され得ることを強調しているので、血管形成遺伝子は本発明に特に重要である。30(1):369−371(2002)およびオンラインhttp://angiodb.snu.ac.kr/に列挙される。重要な遺伝子は詳細に分析されており、そして本明細書の別の部分に示されている。別の態様では、本発明はまた細胞における標的遺伝子の発現を阻害するための試薬を含むキットを提供し、ここで該キットは本発明によるdsRNAを含む。キットはインビトロまたはインビボで本発明によるdsRNAの導入を実施して、試料または対象を試験するのに必要な少なくとも一つの試薬を含む。好ましい実施態様では、かかるキットはまたキットの構成成分が使用される手順を詳記する説明書をも含む。/または血管形成の生理学的および病理学的過程を伴う疾患の処置のための医薬組成物における本発明の修飾されたsiRNAの使用を意味する。血管形成の阻害を必要とする疾患、症状および障害を処置するために有用である。本明細書で使用される際には、「処置」とは、疾患、障害もしくは症状の過程を阻害もしくは低減させるため、疾患、障害もしくは症状の病徴を阻害もしくは低減させるため、または疾患、障害もしくは症状の発症もしくはさらなる発達を予防的に防御するために取る行動を意味する。「処置する」とはその認識動詞である。本発明の治療薬の有効用量は疾患状態を処置するために必要とされるその用量である。医学の分野において当業者に認識されるその他の因子に依存する。一般的に効力に依存して0.1mg/kgと100mg/kg体重/日の間の量のsiRNAが投与される。吸入もしくはスプレーにより、または直腸に従来の無毒性の薬学的に許容される担体、アジュバントおよび/またはベヒクルを含有する投薬単位処方で投与できる。(例えば静脈内)、筋肉内、腹腔内もしくはくも膜下腔内注射、または注入技術等を含む。加えて、本発明の核酸分子および薬学的に許容される担体を含む医薬用処方が提供される。一つまたはそれより多い本発明の核酸分子は、一つまたはそれより多い無毒性の薬学的に許容される担体および/または希釈剤および/またはアジュバント、ならびに所望によりその他の活性成分を伴って存在できる。顆粒、エマルジョン、硬質もしくは軟質カプセル、またはシロップもしくはエリキシルにできる。錠剤は錠剤の製造に適当である無毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合された活性成分を含有する。これらの賦形剤は例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムのような不活性希釈剤;顆粒化および崩壊剤、例えばトウモロコシデンプンまたはアルギン酸;結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム;および滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクでよい。錠剤はコーティングされていなくてよいか、またはそれらを公知の技術によりコーティングすることができる。えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合される硬質ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水もしくは油性溶媒、例えば落花生油、液体パフィンもしくはオリーブ油と混合される軟質ゼラチンカプセルとして提示することもできる。水性懸濁液は水性懸濁液の製造に適当な賦形剤との混合物中に活性成分を含有する。本発明の組成物の経口投与は胃または腸に直接的に、最も重要には患者による嚥下制御投薬形態によるが、またかかる送達のその他の機械的および補助的手段による物質を投与するための全ての標準的な技術を含む。約0.1mgから約140mg/kg体重/日のオーダーの投薬量レベルが前記で指示された症状の処置において有用である(約0.5mgから約7g/対象/日)。単回投薬形態を生成するための担体材料と組み合わすことができる活性成分の量は、処置される宿主および投与の特定の様式に依存して異なる。一般的に投薬単位形態は約1mgから約500mgの間の活性成分を含有する。時間、投与の経路、ならびに排出の速度、薬物の組み合わせおよび治療を行っている特定の疾患の重篤度を含む種々の因子に依存することは理解される。本発明の治療薬の治療効果をその他の薬剤との組み合わせにより強化することができる。典型的にはかかるその他の薬剤には血管形成障害のような類似の疾患の処置に使用されることが知られている薬剤が含まれよう。これに代えて、かかる薬剤を使用して本発明の治療薬により引き起こされる副作用または望ましくない影響を低減させることができる。本発明のsiRNAはまた重要な調査用途をも有する。かかる研究の一つにはインビトロでの血管形成過程への調査が含まれる。「インビトロでの血管形成過程」とは動物全身を用いない血管形成または脈管形成を研究するための任意の過程を意味する。このように血管形成のマーカーまたは指標を使用して血管形成過程の工程を研究するインビトロまたはエキソビボ方法およびアッセイはここに含まれる。表1で同定されるsiRNA鎖配列は以下の標的に対する適当なsiRNA配列として同定されている:VEGFR−1(GenBank受入番号AF06365);VEGFR−2(GenBank受入番号AF063658);VEGFR−3(GenBank受入番号(NM_002020);Tie2(TEK)(GenBank受入番号NM_000459);bFGFR(GenBank受入番号M60485);IL8RA(GenBank受入番号L19591);IL8RB(GenBank受入番号L19593);Fas(GenBank受入番号X89101);IGF2R(GenBank受入番号NM_000876)。本発明によるsiRNAは少なくとも1本のRNA鎖に少なくとも1個の修飾されたヌクレオチドを含み得る。様々な可能性のある修飾されたヌクレオチドを本明細書の別の部分で開示する。以下の実施例は本発明の態様を説明し、そして以下に列挙される請求の範囲に含まれる実施態様を限定することを意図されるものではない。下の結果および考察のセクションは、以下のプロトコールにしたがって行われ、そして以下の材料を用いる実験に言及する。具体的に記載されていない材料およびプロトコールは当業者に日常的に利用可能であると考えられる。標準的な2’−O−TOMホスホアミダイトテクノロジーにより一本鎖siRNA誘導体を合成し、そしてOasis(登録商標)HLB抽出プレート(Waters)により精製した。Hepes、pH7.6)中で混合し、90°Cで3分間熱変性し、そして30°Cで60分間アニーリングした。siRNA二重鎖の100μM原液を−20°Cで保存した。PA−100カラム(Dionex)に負荷し、そして1:10アセトニトリル:バッファー(20mM酢酸ナトリウム、1mM酢酸マグネシウム、pH6.5)溶液中NaClグラジエント(30分で0−0.6M)で分析した。100μl(20μMまたは50μM)を滅菌ウシ胎仔血清(GIBCO)900μlと混合し、37°Cでインキュベートし、そして以前に指示されたように(NaClグラジエントを除く:9分で0M−0.36M/12分で0.36M−0.6M)HPLCにより分離した。分解生成物をNAPカラムで脱塩し、そしてLC−ESI−−MSにより分析した。France)から入手した。CO2を用いて動物を屠殺し、そして次に胃を即座に回収した。Millipores)に負荷した。製造者の推奨にしたがってフィルターユニットを10分間回転させた。マウス胃液に相当するろ液を回収し、等分し、そしてさらなる実験の前に凍結した。siRNA溶液を9倍容量の前記されたような胃酸で希釈し、そして37°Cで0、5、10、15、30、60および120分間インキュベートした。実施例4腸洗浄液中のインキュベーション標準的な腸洗浄液アッセイを準備するために、雄Wistarラットを絶食させ、イソフルランで麻酔した。)を原位置で灌流することにより腸洗浄液を入手した。収集された流出液を遠心し(3000×g、15分、22°C)、そして上澄を1.2μmフィルターに通し、そして−20°Cで保存した。siRNA溶液を9倍容量の腸洗浄液で希釈し、そして37°Cで0、15、30、60、180および360分間インキュベートした。t=0分およびt=60分に凍結することによりインキュベーションをクエンチした。t=0分およびt=60分に凍結することによりインキュベーションをクエンチした。siRNA溶液を9倍容量のネズミ血清(Harlanヌードマウス)で希釈し、そして37°Cで0、15、30、60、180および360分間インキュベートした。実施例8ゲル電気泳動安定性アッセイ振盪およびドライアイス上で衝撃凍結(shock-frozen)の直後にインキュベーション溶液の10μlアリコートを取り、混合物を37°Cでインキュベートし、そしてアリコートを種々の時点で衝撃凍結した。Switzerland)上、120V、8°Cで240分間分離した。ChemiDoc(商標)XRSシステムで写真を撮った。CRL−2279)を成長させた。HiPerfect(QIAGEN)を用いて製造者の手順にしたがって24ウェル型式でMS1細胞をsiRNAでトランスフェクトした(4検体ずつ、siRNA最終濃度は10nMまたは指示されたとおりであった)。実施例10FACS分析トランスフェクトされていない、およびsiRNAトランスフェクトされたMS1細胞をFACSによりVEGFR2レベルに関して分析した。Pharmingen)を添加した。Pharmingen)として使用した。Software(Becton−Dickinson)を用いてFACScaliburでFACS獲得および分析を実施した。France)から入手した。耳のマーキングによりマウスを識別し、そして通常の条件下で群を維持し(ケージあたり動物6匹)、そして毎日観察した。処置群あたり6匹のマウスを使用し、そして動物保護のためのスイス動物保護法を厳密に順守して全ての動物実験を実施した。60:2178−89(2000))。Denmark)で充填した。充填手順の前に溶液を42°Cで維持した。Switzerland)吸入を用いてマウスを麻酔した。皮下移植用に、尾の付け根に皮膚の小切開を作成して移植用外套針の挿入を可能にした。動物の背の小切開を通して無菌条件下でチャンバーを移植した。Adams)により皮膚切開を閉じた。必要とされる用量に依存して、siRNAを「注射用の品質等級」の0.9%生理食塩水で希釈し、次いで動物にi.p.(200μl/用量)または経管によるp.o.(100μl/用量)のいずれかで送達した。チャンバー移植の2から4時間前にマウスに最初の投与を行い;次いで毎日2日間処置した。特記しない場合、移植後3日にマウスを屠殺し、チャンバーを切除し、そして各移植片の周囲に形成された血管新生化された線維性組織を注意深く除去した。いてダネット検定を用いて統計分析を行った。FTY720によるスフィンゴシン−1−リン酸受容体の拮抗作用が血管形成および腫瘍脈管化を阻害する。1))を使用して標準的なまたは修飾されたsiRNAの抗腫瘍活性を評価した。腫瘍細胞(1μl、5×104/μl)を同系雌C57BL/6マウスの両耳の背側耳介に皮内注射した。3.0撮像システム、Zeiss)および具体的に設計されたマクロを用いて実施した。7日から21日まで「注射用の品質等級」の0.9%生理食塩水で希釈したsiRNAを、i.p.(200μl/用量)または経管によるp.o.(100μl/用量)のいずれかでマウスに1日1回投与した。21日にマウスを屠殺し、そして頭部リンパ節転移を重量測定し、そして次に凍結した。これらの結果では、用いる実際のsiRNA配列および化学は表3を参照して決定できる。【0062】マウス血清中野生型siRNAを双方の3’末端から分解するヌクレアーゼによるオリゴヌクレオチド分解は大部分が3’エキソヌクレオチド分解性である。その終端での芳香族または親油性残基の導入によるアンチセンスオリゴヌクレオチドの修飾はそのヌクレオチド分解を遅延させる17。この代謝経路もまたsiRNAに優勢であるかどうかを検証するために、未修飾siRNA(野生型siRNA)をマウス血清中37°Cで3時間までインキュベートした。用いられた未修飾siRNA配列はpGl3−siRNAであった(表3参照)。混合物を強陰イオン交換HPLCで、t=0分、t=30分、t=180分で分析した。図1a、1bおよび1cで示されるように、t=30分でブラント末端化siRNAに相当する明確なピークが観察された。t=3時間までに実質的な分解が観察された。図1dおよび1eはHPLC−ESI−MS分析により同定された代謝物を説明する。この分析により双方の鎖の3’オーバーハングおよび3’末端の最初に塩基対形成するリボヌクレオチドの喪失に相当するいくつかの代謝物の存在が明らかにされる。ガイド鎖の5’末端リボヌクレオチドの消化もまた観察された。図1は血清中の未修飾siRNAの分解経路を示唆する。DNAオーバーハングがもしかすると3’エキソヌクレアーゼにより最初に消化される。LC−MSでは、双方の鎖の最初に塩基対形成する3’リボヌクレオチドおよびまたガイド鎖の最初に5’塩基対形成するリボヌクレオチドの喪失に相当するさらなる代謝物もまた検出された。siRNA)を合成した。これらの化合物を図2で図式的に説明する。最初にsiRNAをマウス胃酸中2時間インキュベートした(図3)。sRNA場合、分解は観察されなかったが、野生型siRNAの分解は30分後に観察された。siRNAの親化合物は60分間観察された(図4)。