Extension(加藤和彦)mRNAの転写開始点を決定したり、転写活性の定量を行うために用いられる。遺伝子内に由来するプローブをRIで標識し相補的RNAとハイブリダイズさせた後、逆転写酵素で伸長させる。プライマー(合成オリゴヌクレオチド)の5’末端標識プライマーは合成オリゴヌクレオチド(20~30mer)を用いることがほとんどである。二本鎖DNAを用いることもできるが、DNA-DNAリアニーリングの問題がありハイブリダイゼーションの条件設定が難しいようである。DWで沈殿を溶解する。一部をとり、チェレンコフ光を測定し5×105cpm位(条件検討を行い、できるだけ少量)を用いる。RNAよりもpoly(A)+RNAを用いたほうが、感度が高くきれいな結果が得られるようである。primerの量、ハイブリの温度、時間等は条件検討をおこなう必要がある。数μg40~60°C、数時間アニーリングさせる。逆転写反応アニーリングしたものを希釈して以下のようにする。100unit/mlあるいはアニーリング後、一度エタ沈し逆転写酵素に添付のbufferで溶解する。dNTPと酵素を加える。電気泳動6%ポリアクリルアミドゲル(一般的なシークエンス用のゲル)で泳動する。この時、伸長産物のレーンの隣に同じプライマーを用いて行ったシークエンスのサンプルも同時に泳動しておき、泳動後バンドを比較し解析をおこなう。