Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min。将NC膜放入塑料袋中,加入二抗溶液2.8ml。Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min,三次。(11)将膜放入显色液中,室温轻轻摇动,10min。(12)待条带出现后,立刻用水洗膜,然后转入PBS中,观察记录。NP-40、teiton-100电极液:1M磷酸(阳极液)、1M氢氧化钠(阴极液)固定液:100g三氯乙酸、10g磺基水杨酸溶于500ml,定容为1000ml染色液:0.35g考马斯亮蓝R-150溶于300ml脱色液中,加热到60-70°C,加入0.3g硫酸铜。在纸片上加样,盖上盖子,横功率25W电泳,约10min后,暂停电泳,取下纸片,继续电泳约30min,待电流达4mA以下,停止电泳。它的含量2%-3%较合适,能形成较好的pH梯度。ml的TE或水中,分装成小体积,4°C或-20°C保存。缓冲液溶解,后面还需去离子。高压灭菌,4°C保存。2037°C保温1—2小时。保温结束后,分别加入0.5M(pH8.0)EDTA(使终浓度达到10mM)。2037°C保温1—2小时。pH7.2)EDTA(使终浓度达到10mM)。