AchievementsRAS-MAPキナーゼ経路の活性化は多くの腫瘍で報告されている。活性化を起こす分子機構の一つにBRAF遺伝子変異があるが、BRAFの600番目のアミノ酸がバリンからグルタミン酸に変化する変異(V600E)に対する分子阻害薬ベムラフェニブvemurafenibはメラノーマに対して臨床応用され、約80%という高い奏功率を示す。V600E変異が報告されている。テモダール投与からなる標準治療を施行しても髄液播種や他臓器への転移を来し予後不良な症例があり、新規の治療法が望まれる。本研究の目的は当施設で樹立したBRAFV600E変異膠芽腫細胞株を用いた前臨床試験でベムラフェニブの薬効・薬理を明らかにし将来の臨床展開を目指すものである。V600E変異を有する神経膠芽腫からの細胞株の樹立に成功した。2019年度は、これに加えた臨床検体からの新規細胞株樹立の樹立を行う。vivo実験では細胞株の同所移植モデルおよび他臓器転移モデルの確立には至っていない。浸潤能・浸潤能の変化についてアッセイ系を用いて調べる予定である。遺伝子発現の変化はBRAF阻害剤に対する耐性の獲得を念頭に調べる。Invivo実験ではテモゾロミド投与群を対照としてベムラフェニブを移植モデルに投与し、生存期間を指標に薬効を評価する。治療に伴う腫瘍組織変化についても評価し薬効の機作について考察する。V600E変異を有する神経膠芽腫からの細胞株の樹立に成功した。これに加えた臨床検体からの新規細胞株樹立の樹立には至っていないためである。主なターゲットとしてマイクロアレイを行なう。これにより今後実験に使用していく細胞の遺伝子発現プロファイルを明らかにしておく。ACNUなど中枢神経悪性腫瘍に使用される薬剤の増殖抑制効果を比較検討する。BRAF阻害剤と他薬剤の併用による相加・相乗効果の有無についても調べる。BRAF阻害剤添加群に関しては薬剤耐性獲得を念頭にRAS-MAPK系を中心に遺伝子発現の変化をウエスタンブロッティング、RTPCR、DNAマイクロアレイで調べる。vivo実験系:臨床検体から樹立した細胞株を免疫不全マウスの脳に定位的脳手術の手法を用いて移植する。他臓器転移モデルに関しては細胞株を尾静脈から静注したモデルの使用を考慮する。マウス同所移植モデルおよび他臓器転移モデルにBRAF阻害剤、テモゾロミドを投与し治療実験を行う。生存期間を指標として治療効果を判定する。治療に伴う変化を摘出腫瘍を用いて病理学および分子生物学的に行う。BRAF阻害剤の治療効果増強を目指したMEK阻害剤併用やbevacizumab併用実験についても考慮する。