よろしければ、学会や論文等で発表された内容をご紹介頂ければ大変ありがたく思います。ご質問・コメントなどお気軽にお送り頂けると助かります。biotech@jaica.comまでお気軽にお知らせください。対象となるマーカーも徐々に増やしていきたいと思います。弊社は責を負いませんので予めご了承ください。先生のご研究をご紹介ください。血清中のMDAも検出可能です。analysis処理をお奨めします。血清サンプルは-70°Cにて凍結保存してください。精度の高いデータを得ることができます。吸光度のバックグラウンドを消去するための解析方法です。700nmまでの吸光度を1nmまたは2nm刻みで計測します。データ解析をすることができます。http://www.nwlss.com/sg/worksheet.php解析方法の詳細、オンライン解析の使用方法につきましては、こちらをご覧ください。本キットは組織ホモジネートにも適用可能です。10%(W/V)ホモジネートをDounce型またはPotter-Elvehjem型のホモジナイザーを使って調製します。遠心上清を回収して氷冷し、直ちにMDAを測定します。ストレスの状況により異なります。組織量を増やして測定してください。灌流した方が良い場合があります(マウス脳への適用では灌流の必要性は無いようです)。・サンプル処理中の脂質酸化を抑制するためにホモジネートにBHT(0.1%程度)を添加することをお奨めします。・サンプルの保存は、組織ブロックの状態で-80°Cにて行ってください。・測定データの補正は、組織の湿重量または、ホモジネート中の蛋白濃度で行うことが可能です。本キットはマウス肝臓にも適用可能です。測定値に影響を与える場合があります。測定できるようになります。ヘモグロビン除去プロトコル上記のプロトコルでは、500μLの反応液が得られます。スケールアップ/スケールダウンを行ってください。ヘモグロビン除去処理に必要な試薬は、下記の方法で調製します。市販1-butanolをそのまま使用します。水酸化ナトリウムを蒸留水に溶解して調製します。市販リン酸を蒸留水にて希釈して調製します。このようなケースでは、下記のような対策が考えられます。ブタノール画分の回収液量が少ない場合、以後の操作についてスケールダウンして実施します。200μLを回収、3.7Mリン酸の添加量も通常量の半分の50μLとします。添加するブタノールの量を500μLより多くします。400μLとし、以後の操作も通常通りのプロトコルとします。注意点:サンプルだけでなく、スタンダードについても必ず同一のプロトコルを適用してください。トリ血清につきましては、吸光スペクトルがMDA測定に正の干渉を与えるケースがあることが観察されております。この場合、限外濾過膜を使用した除蛋白処理で、影響を除去することが可能です。限外濾過の方法につきましては「血清8-OHdGの前処理方法」をご参照ください。tetramethoxypropaneは酸性条件下で速やかに加水分解され、MDAを生成します。キットに同梱されているアッセイバッファーは、組織/血球サンプルの調製に使用します。6で60°Cにて60分間インキュベートとありますが、50°Cはどうですか?A:50°Cでも測定可能ですが、試薬性能を十分に発揮するため、60°Cでの反応をお奨めします。キャリブレーターはピンク色に発色し、濃度が高いキャリブレーターほどピンク色が濃くなります。発色しているかどうか目視にて確認してください。532nmであることを確認してください。TBA試薬を調製する際、蒸留水の温度が低いとTBAが完全に溶けていない場合があります。TBAの溶解が十分でないと、吸光度が低くなる場合があります。TBA試薬の溶解に、アッセイバッファーは使用できませんのでご注意ください。反応液を冷却すると退色のため吸光度が低くなる場合があります。室温にて保管してください。反応終了後のサンプルは比較的安定ですので、吸光度の測定まで室温にて保管します。退色が起きる場合がありますのでご注意ください。マロンジアルデヒド測定のためのサンプルは、-70°Cでの凍結保存にて1年以上安定です。凍結融解は避けてください。相の境界が明瞭で、かつ回収率も高いようです。大きな白色層(エマルジョン)が形成されることがあります。このようなケースでは、飽和NaCl水溶液を1滴加えることで、改善されることがあるようです。加熱調理した食品にはMDAが多く含まれていることが知られています。食品サンプルには夾雑因子が多く含まれており、食品中のMDA測定には、前処理/抽出が必要です。食肉の場合、下記の方法で測定できる可能性があります。BHTを添加し、ホモジネートを調製。示すことが報告されています。睾丸組織を対象に10%ホモジネートを調製して、組織中のMDA濃度を測定。nmol/L)と有意に高値を示します。Wederブタを使った肺移植試験。(18.5±3.0μM)は有意に高値を示します。移植肺の機能延長効果が認められ、移植肺のMDA濃度(13.8±1.6μM)も有意に抑制されることが報告されています。DT.パーキンソン病患者の血漿MDA濃度は健常対照に比べ高値を示します。Zarkovic出産時における酸化ストレス研究例です。正常発育群)67名および妊娠していない健常女性29名を対象に酸化ストレスを評価。(尚、MDA測定にはHPLC法を用いています)。Zhang大気汚染による健康被害のメカニズムには、酸化ストレスが関わっている可能性が示唆されている。本文献では、北京オリンピックの開催期間(前/期間中/後)における呼気濃縮液および尿中マロンジアルデヒドを測定。有用であることを示唆している。A:抽出液中にSODが存在すれば測定できる可能性があります。ないかご注意ください。サンプル40μL、ヘマトキシリン試薬40μLのように試薬とサンプル量を4倍にすることで測定できます。ベット容量1mLの場合、テスト数は30前後になることにご注意ください。調整後は当日中に測定してください。SODの影響を取り除く場合には、灌流により血液を除去しておきます。Heparinを含む生理食塩水。1容量に対し9容量のPBS(pH7.4)を添加して破砕機を使ってホモジネートを調製。4°C)をSOD測定キットに適用。測定することで、夾雑物質の影響を回避することができます。ことで改善される場合があります。SODの多くは細胞内に分布しており、血清中のSOD活性は検出限界以下となる場合があります。血清サンプルは-70°Cにて凍結保存してください。保存条件により、稀にアッセイバッファーに結晶の析出が見られることがあります。この場合には、アッセイバッファーを軽く温めて完全に溶解してから使用してください。SOD活性につきましては、受託検査も実施可能です。対象は血清、血漿、組織です。tissue)への適用例です。ng/mL)との結果が得られています。示すことが報告されています。測定した結果、サンプルの種類による測定値に有意差は見られませんでした。血清サンプルの場合、5回まで凍結融解を繰り返しても、測定値に変化は認められませんでした。TMB基質液が、従来の2液混合タイプから1液タイプに改善され、より使い易くなりました(2008年9月)。このLAMMERキナーゼによるSOD1の制御は酵母からヒトまで進化的に保存されていることが示唆されています。分光光度計のキュベットでも測定可能です。137KB)をご覧ください。本キットには96穴マイクロプレートは含まれておりません。基本的にどのメーカーのものでも適用可能と考えられます。ロットによりサービスでマイクロプレートが同梱されている場合もあります。code.V3204)。1000μLを混合してから使用します。mol/Lとなります。mol/Lの範囲にあれば差し支えありません。本キットは、血清、血漿ともに測定可能ですが、血清よりも血漿の採取をお奨めします。溶血が起きると血清/血漿中のグルタチオン濃度が大きく上昇する可能性があることが挙げられます。保存する場合には、直ちに-20°C以下に凍結することをお奨めします。4°C〜室温で急速にGSHレベルが低下することが報告されています。フレーク状の結晶となっており、取扱いが容易です。5%(Weight/Weight)水溶液を調製します。調製後は保存できませんので、必ず使用当日に溶解してください。分光光度計のキュベットでも測定可能です。あります(1mU/mL)。ベットの容積によりテスト数、サンプル液量が変わりますのでご注意ください。1分間で1.0μmoleのGSHをGSSGに酸化する量として定義しています。GPx標品の測定にも用いられています。酵素活性は温度およびpHの影響を受けます。温度1°Cの違いで5%程度の誤差が生じます。pH8.8における酵素活性はpH7.0で測定した値の約10倍の値を示します。グルタチオンペルオキシダーゼ(GPx)標品はSIGMA-Aldrich社より入手可能です。本キットは下記の夾雑物質の影響を受ける場合があります。0.1mM以上の濃度のcysteine、β-mercaptoethanol、dithiothreitolなどの還元剤。サンプルの340nmにおける吸収は1.2を超えないようにしてください。・過剰なGSSG:サンプルに過剰のGSSGが含まれるとGPx活性が高めに検出されます。GSSGは透析により除去可能です。・NADPHを消費する酵素:サンプル中にNADPHを消費する酵素が含まれると、GPx活性が高めに検出されます。X-100といったpolyethoxy系非イオン性界面活性剤は本キットに影響を与える場合があります。-70°Cでの凍結保存をお奨めします。溶解後のNADPH試薬の有効期限は72時間です。溶解後は凍結保存できませんのでご注意ください。1バイアルを分けて溶解することはできません。1本のNADPH試薬を1本のNADPH溶解液全量を使って溶解してください。0.001)を示すことが報告されています。Farinaメチル水銀による神経毒性において、グルタチオンペルオキシダーゼが重要な標的分子であることが示唆されています。検出されないようです。測定の際には、溶血によって赤血球GRの影響が出る可能性がありますので、ご注意ください。知られており、この不活化はEDTAの添加により防ぐことができます。硫酸アンモニウム(≧100mM)はGR活性を阻害します。高濃度のヘモグロビン(≧1mg/mL)は340nmにおける吸収を示すため、測定に影響を与える場合があります。X-100(0.1%)は本キットに影響しません。本キットにおけるGR活性の定義は、25°C、pH7.6において1分間に1μモルのGSSGを分解するGR活性を1unitとします。GR活性は温度の影響を受けます。35°Cでは172%の活性を示します。NADPHの分子吸光係数から酵素活性を算出する際にはご注意ください。補正係数δは次の式で求めることができます。1.578Tは温度(単位:°C)です。mU/mLの場合、下記のように補正できます。分光光度計の機種によっては、高濃度のヘモグロビンが測定を妨害する(吸光度がレンジ外になる)場合があります。そのような場合には、反応液中のヘモグロビン濃度が1mg/mL以下となるよう、調整することをお奨めします。血漿採取時の抗凝固剤はEDTAまたはヘパリンが使用できます。凍結融解の繰り返しは避けてください。再構成後のスタンダードは不安定なため冷蔵保存できません。凍結融解は1回のみ可能です。(SOD2)に特異的です。ラットSOD2やマウスSOD2との交差反応性がないことが確認されています。弊社が取り扱っておりますニトロチロシン測定キットには、下記の2種類があります。(本製品)ここではニトロチロシン測定キットに関する技術情報をご紹介しております。メーカーが異なっていることから、検出特性(測定値、相関性など)が異なる場合がありますのでご留意ください。こちらをご参照ください。-70°C凍結保存では非常に安定であるとされています。6ヶ月、-80°C保存で1年間安定とされています。本キットは組織サンプルに適用できる場合があります。ELISAに適用します。冷蔵24時間で10〜15%活性が低下するとされています。凍結保存についても注意が必要です。40%の失活が起きるとされています。細胞の種類によりカタラーゼの発現量は異なるため、予め予備実験等で確認されることをお奨めします。ありますので、サンプルの希釈にはサンプル希釈バッファーをご使用ください。希釈したサンプルは室温にて15分静置してから、測定してください。PBSも使用可能です。