教授は、PCRクローニングを効率的に行うための新しいベクターを開発し、成果を発表しました。年4月23日付で掲載されました。現代の生命科学分野の研究で使われる技術です。PCR)は、特定の遺伝子を増幅する遺伝子工学技術の基本であり、生命科学の研究を進めるために必要な技術です。一般に、PCRにより増幅した遺伝子はベクターと呼ばれるDNAに組み込み、様々な研究に用いられます。PCRクローニングを効率的に行うための3種類のクローニングベクターを新たに開発しました。PCRにより増幅した遺伝子の組み込みには、大きく分けてTA-クローニング、平滑末端クローニングという2つの方法があります。遺伝子を増幅したDNAポリメラーゼの性質により増幅遺伝子が突出端の断片を生じる場合と、平滑末端の断片を生じる場合に対応するため、これら2つの方法が使われます。通常、これらの遺伝子をベクターに組み込む際には、その形状に合わせて、適切なクローニングベクターを選択し、組み込む必要があります(図1)。今回作成された3種類のクローニングベクターのうち2つは、この2種類の遺伝子断片を効率よくクローニングできるTA-クローニング用ベクター(pCRT)と平滑末端クローニング用ベクター(pCRZero)です(図2)。IISと呼ばれる制限酵素を用いることで簡単にTA-クローニング用ベクターを調製できます。IIS制限酵素の他に、指示された制限酵素を加えて処理することで、目的遺伝子のクローニング効率を上げる工夫もなされています。平滑末端用のクローニングベクターには大腸菌致死遺伝子を利用しているため、クローニングの過程で行うスクリーニング作業を簡素化できます。これらに加えて、3つめのクローニングベクターとして、TA-クローニング、平滑末端クローニングという形状の異なる遺伝子断片のクローニングにひとつのベクターで対応可能なベクター(pCRZeroT)も開発しました(図2)。これらの3種類のベクターを作成するとともに、今回開発されたクローニングベクターを用いて、PCRクローニングを簡便に行うためのプロトコールも開発しました。通常、遺伝子クローニングでは、ベクターと呼ばれる環状DNAのままではPCR増幅遺伝子断片を組み込むことはできません。増幅した遺伝子を組み込む場合には、環状DNAベクターの特異的な箇所を制限酵素により切断し、あらかじめ直鎖化しておく必要があります。今回開発したpCRZero、pCRZeroTでは、これらの環状DNAを事前に直鎖化することなく、環状DNAベクターとPCR増幅した遺伝子を混合し、環状DNAベクターの切断反応とPCR遺伝子断片との結合反応を同時に行うことにより、PCRクローニングできます。これは、3つのベクターのうちpCRZero、pCRZeroTでは大腸菌致死遺伝子を利用し、遺伝子断片が組み込まれていない空ベクターをもつ大腸菌は生育できないためです。120276(pCRZeroT)として寄託され、世界中の研究者が自由に入手できる体制を整えました。−統合オミックス解析による展開−」、および発酵研究所(一般研究助成)「微生物のもつシームレスクローニング活性を利用した新規シームレスDNAクローニングシステムの開発」の支援を受けました。