Achievements本研究は、鉄過剰時に増加する血清フェリチンが、肝臓の肝細胞膜表面のトランスフェリン受容体との結合を介して、鉄代謝調節因子ヘプシジンの発現を調節する可能性に着目し解明を目指すものであり、未だ不明な部分が多い生体鉄感知機構を解明し、さらにその経路を調節する薬剤開発の基盤を得ることを目的としている。その結果、正常肝細胞の性質を強く残すHepG2細胞株において、ヒト脾臓由来フェリチン添加時にコントロールと比較してHAMP遺伝子発現上昇を認めている。13条第6項の規定に基づき実施を申請、受理されている)。293細胞にlipofection法にて遺伝子導入を行い、安定細胞株樹立を行った。現在H-subunit強制発現HEK293細胞が樹立でき、L-subunit強制発現HEK293細胞はselection過程にある。生体内では肝臓や脾臓などの網内系を中心に鉄を貯蔵するためフェリチン発現はこれらの細胞での発現が主体と考えられ、強制発現させたフェリチンsubunitsが効率よく細胞外の培養上清中に放出されない可能性を想起するに至り、ヒト肝癌細胞由来株に対してもヒトフェリチン発現ベクターの遺伝子導入を行い安定細胞株を得る作業を開始している。planned.Reason平成27年度は、ヒトフェリチンH-およびL-subunitをコードするcDNAをクローニングし全塩基配列を確認、続いて哺乳類細胞での発現ベクターへの組み換え、さらに遺伝子導入への必要量の増幅も完了させた。作成したベクターをHEK293細胞に遺伝子導入し安定細胞を得る一方で、ヒト肝細胞由来細胞株での安定発現株も必要となりうると判断し同時に開始している。PCRでの検討を先行させ結果を得てきている。本研究過程では、培養上清やマウス血清中でトランスフェリンと結合できなくなった非トランスフェリン結合鉄(NTBI)が出現してくる可能性があり、それもmonitoringしていく必要が生じうる。