本研究は、腫瘍抗原ペプチドを含む可溶性HLA-A2及びA24テトラマー(4量体)分子の作製とそれを用いた抗悪性黒色腫T細胞の染色とソーティングを目的とした。1.HLA-A2/gp100_<(209-217)>、HLA-A2/MART-1_<(27-35)>、及びHLA-A24/EBV-Pテトラマー分子を作製した。A(ビオチン化酵素)で処理し、ゲル濾過続いてイオン交換クロマトで精製後、ビオチン化HLA/抗原ペプチド複合体(単量体)を得た。その単量体4分子をフィコエリスリン(PE)標識ストレプトアビジン1分子で結合させ、可溶性HLA/抗原ペプチドテトラマー(4量体)を作製した。2.PE標識HLA-A2/gp100_<(209-217)>及びHLA-A2/MART-1_<(27-35)>テトラマーとFITC標識抗CD8抗体を用い、各抗原ペプチドを認識する培養腫瘍浸潤T細胞(TIL1520及びTIL1235)を染色しFACSで解析した。その結果各テトラマーの用量及びTILの細胞数に依存して2重染色細胞(CD8^+T細胞中抗原特異的T細胞)を最大で90%以上認めたが、抗原特異性の異なるTIL1370では染色を認めず、抗原特異的T細胞を特異的かつ定量的に測定できた。同様にPE標識HLA-A24/EBV-Pテトラマーを用いEBV-Pで刺激したHLA-A24の健常人PBMCを染色した結果、EBV-P抗原特異的T細胞を測定できた。特異的に認識するT細胞の解析及び選択的増殖が可能となった。