使用直前にブロッキング試薬で1000倍希釈して使用します。蒸留水25μLを加え37°C30分溶解。調製後は凍結保存します。蒸留水25μLを加え37°C30分溶解。調製後は凍結保存します。4)調製済みDNP試薬は4週間保存ですが、2週間以上保存した場合には8000Gにて5分間遠心し上清を使用してください。6)Lot.P089より調製方法が変更になっております。なるように希釈済みブロッキング試薬にて希釈してください。9)Lot.P089より調製方法が変更になっております。なるように希釈済みブロッキング試薬にて希釈してください。※操作方法等は予告なく改訂される場合があります。ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。【測定手順】1次抗体反応は、「4°C一晩」または「37°C2時間」のどちらでも可能です。ご都合に合わせて実施条件を設定してください。前処理したサンプル、スタンダード、コントロール、各200μLをウェルに分注します。プレートをシールして、4°C一晩または37°C2時間反応させます。300μL/ウェルにて5回洗浄します。インキュベートします。300μL/ウェルにて5回洗浄します。ビオチン標識-抗DNP抗体を200μL分注し、37°Cにて1時間インキュベートします。300μL/ウェルにて5回洗浄します。HRP標識-ストレプトアビジン」を200μL分注し、室温にて1時間インキュベートします。300μL/ウェルにて5回洗浄します。「発色液」を200μL/ウェル分注し、室温にて4〜7分反応させます。各ウェルでの反応時間が一律になるように、反応を停止させます。「反応停止液」を100μL/ウェル分注し、反応を停止させます。450nmの吸光度を測定します。検量線を作成して、サンプル中のカルボニル化タンパク質の濃度を算出します。縦軸に吸光度(450nm)をプロットし、適切な近似関数を用いて作成します。※ロットにより多少異なる場合があります。【サンプルの調製】サンプル中の蛋白濃度によってサンプルの調整方法が異なります。手順Bに従ってトリクロロ酢酸(TCA)による濃縮を行う必要があります。調製手順も異なりますのでご注意ください。ヒト、マウス、ラット由来のヘパリン血漿やEDTA血漿が適用可能です。血漿サンプルは予め遠心処理をして不溶物等を除去しておいてください。(※ウサギ由来サンプルは測定できません。必要な数の1.5mLエッペンチューブを用意します。各エッペンチューブに「希釈済みDNP試薬」を200μL分注します。サンプルまたは標準物質またはコントロールを5μL添加し、室温にて45分間インキュベートします。このとき反応時間が全てのサンプルで正確に45分になるようにしてください。「EIAバッファー」と混合することで行います。同数の1.5mLエッペンチューブを用意し「EIAバッファー」1mLを分注しておきます。5μLを取出し「EIAバッファー」とよく混合します。ELISAに適用します。サンプル中のタンパク質濃度を測定します。サンプルを調製します。35g/L以下の場合には、下記の方法にてサンプルを調製します。5μLに対し、「EIAバッファー」45μLを添加し10倍希釈しておきます。(分注液量は、各サンプルの蛋白濃度に応じて調整します)。蒸留水を添加して、各サンプルの液量が同じになるように調整します。TCA水溶液を添加、混合し、氷上にて10分静置します。10000回転にて3分間遠心し、上清を捨てます。上清を捨てる際にペレットを乱さないようご注意ください。ボルテックスでよく攪拌します。「希釈済みDNP試薬」15μLとよく混合します。室温にて45分反応させます。DNP試薬との反応時間が一律になるようにご注意ください。新しいエッペンチューブを用意し、「EIAバッファー」1mLを分注しておきます。コントロール反応液を5μL取り出し、「EIAバッファー」1mLと混合します。ELISAに適用します。Zealand本製品は「医薬用外劇物」です。ご注文の際に「譲受書」をお送りください。「譲受書」のフォームは、こちらをご覧ください。※表示価格に消費税は含まれておりません。ご請求時には消費税が別途加算されます。予告なく変更される場合があります。操作方法につきましては、ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。【その他のカルボニル化蛋白測定キット】カルボニル化蛋白の測定には下記の製品も利用可能です。用途に応じてお選びください。含まれるカルボニル化蛋白を測定します。サンプル必要量4μL。ヒト血清/血漿に含まれるカルボニル化蛋白を測定します。蛋白濃度の測定は不要です。タンパク質過酸化物(AOPP)測定キット※表示価格に消費税は含まれておりません。ご請求時には消費税が別途加算されます。予告なく変更される場合があります。操作方法につきましては、ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。弊社の提供する試薬、受託分析サービス等は全て研究用です。研究以外の用途(臨床検査/診断/医療行為等)には使用できません。