過程については依然として未解決の点が多い。そこで、本計画研究では以下の4つの課題に取り組んでいる。課題1:ダイナミクスを解析可能な新規実験系の開発。山口は、時間分解能を持つ改良型ChIP法の開発を行っている。テトラサイクリン誘導発現系でタグ付きの目的タンパク質を誘導する系は、予想どおりカイネティクスが遅く、低い時間分解能しか得られなかったので、代わりに翻訳後段階で目的タンパク質の活性を制御するFKBP/FRB/ラパマイシン系の構築を進めた。課題2:転写サイクルのダイナミクス解析。II転写産物が受ける複数の3'プロセシング経路がいかにして選択されるか、を研究している。転写伸長の初期段階で働くNELFが、3'プロセシングの経路選択に重要な役割を果たしていることを見出した。NELFは転写開始点近傍においてprematureなポリ(A)付加を阻害する働きを持つと考えられる。IIのリン酸化サイクルの解明。CTRとリン酸化依存的に結合する因子を解析している。マウスES細胞でこの因子をノックアウトし、ES細胞の分化に及ぼす影響を解析した。vivo機能を解析した。課題4:普遍的な転写伸長装置が細胞の運命決定に果たす役割の解明。伴うクロマチンルーピング、転写調節因子の結合、ヒストン修飾等の順序を明らかにした。その結果に基づきエンハンサー・プロモーター相互作用による転写サイクル制御の新たな仮説を構築した。交付申請書に記した4つの研究項目をおおむね消化することができた。課題1の改良型ChIP法の開発については、最適な系を求めた探索が続いている状態である。一方で、3'プロセシング経路の選択機構に関しては新たなブレークスルーが得られた。課題1:ダイナミクスを解析可能な新規実験系の開発。上述したように山口は、FKBP/FRB/ラパマイシンを用いた迅速誘導発現系を用いた改良型ChIP法の開発に引き続き取り組む。課題2:転写サイクルのダイナミクス解析。3'プロセシング経路の運命決定機構を引き続き解析する。異なる3’プロセシング経路間の選択機構はほぼ解明することができたので、次の課題として、より一般性の高いmRNA遺伝子で見られるポリ(A)付加のproximal-distal選択機構にを明らかにしたい。IIのリン酸化サイクルの解明。用いて明らかにしていく。IIリサイクリング因子FCP1の機能解析に引き続き取り組む。課題4:普遍的な転写伸長装置が細胞の運命決定に果たす役割の解明。田村は、血球分化におけるクロマチン高次構造と転写サイクルとの関連とその生物学的意義について、FISH法やゲノム編集を用いて詳細に解析を進めることによって、H25年度に浮かび上がった仮説の検証を行なっていく。