増幅産物が全く得られない。非特異的増幅やスメアが見られる。以下の点を考慮してプライマーを設計してください。merのプライマーを使用します。PCR条件に適したTm値のプライマーを設計することが大切です。詳細は各製品の取扱説明書をご参照ください。merのプライマーで良い結果が得られる場合があります。Tm値(下記の式*1で計算)が65°C以上になるようにプライマー設計ソフト*2を利用して設計することをお勧めします。GC含量が50~60%となるようにし、プライマーの3’側10塩基のGC含量が高くならないように配慮することで、より特異的な増幅が期待できます。3’末端の塩基はミスプライミングの頻度が高いTを避けることをお勧めします。ForwardプライマーとReverseプライマーがアニーリングしないように設計してください。3’末端で3塩基以上が相補的な配列にならないように注意してください。ForwardプライマーとReverseプライマーのTm値はなるべく揃うように設計してください。プライマー内での二次構造形成を避けるため、自己相補的な配列を含まないよう注意してください。GCリッチなターゲットの場合、Tm値が60°Cを超えるプライマーを推奨します。異なるプライマー対を用いた複数の増幅反応を同一条件で行いたい場合は、使用酵素、PCR条件に合わせてTm値が適切になるよう各プライマーを設計することをお勧めします。プラスミドDNA、逆転写産物など用いる鋳型の種類によって、PCRに適した鋳型量は異なります。R010A/B)の場合には、過剰量の鋳型が増幅を阻害する傾向がありますのでご注意ください。R045A/B)については鋳型の種類や量、質に応じて反応条件を調整することにより柔軟に対応することが可能です。以下に標準的な鋳型推奨量を示します。以下の点を考慮してください。2分のプレヒートが必要です。上記以外のタカラバイオのPCR酵素では活性化のためのプレヒートは必要ありません。過度の加熱処理は酵素失活の原因となります。変性条件について変性条件はサーマルサイクラーの機種とチューブの種類を考慮して設定してください。設定の目安としては94°Cの場合は20~30秒、98°Cの場合は5~10秒です。