5~10秒の高温短時間の変性条件をお勧めします。5秒に設定してください。95°C以上の設定では、酵素の失活による反応性低下が起こり、増幅産物が得られない場合があります。アニーリング条件についてアニーリング条件により増幅効率と増幅の特異性が変化します。プライマーのTm値に対し低すぎるアニーリング温度を設定すると、ミスプライミングに起因する非特異的増幅産物やスメアが増加し、目的増幅産物が減少する場合があります。プライマーのTm値に対し高すぎるアニーリング温度を設定すると、プライミング効率が低下し目的増幅産物が減少します。PCRを行うことにより増幅の効率や特異性をより改善できる場合があります。Taqシリーズの場合、アニーリング時間は30秒をお勧めします。プライミング効率に優れるPrimeSTARシリーズの場合は、5~15秒の短いアニーリング時間に設定することが重要です。アニーリング時間が長すぎるとミスプライミングに起因する非特異的増幅産物やスメアが現れる場合があります。PCRをお勧めします。PCRをお勧めします。Polymeraseの正確性を上回ります。R045A)は究極の正確性を示し、pUC119全長をPCR増幅した産物をクローニング後、配列解析を行った結果、370,656塩基中変異はわずか4塩基でした(エラー率0.00108%)。VIEW55号参照)。以下の順番で酵素を選択してください。R060A/B)が有効です。GC含量が70%を超えるGCリッチな領域に対しても、優れた反応性を示し、よりバックグラウンドの少ない特異性の高い増幅が可能です。R050A/B)が有効です。RR02AG/BG)が適している場合があります。IIの順でお試しください。Iを用いた場合、長い領域の増幅が可能です。IIは増幅サイズには限界がありますが、複雑で強固な高次構造を持つ鋳型をターゲットとする場合に有効です。R050A/B)の使用をお勧めします。kbの増幅を確認しています。RR002A/B)をお勧めします。RR350A/B)がお勧めです。R045A/B)は伸長時間を5秒/kb、アニーリング時間を5秒に設定することができ、世界最高レベルの反応速度を実現できます。R050A/B)は高速PCRプロトコールにより10秒~20秒/kbに伸長時間を設定できるため、長鎖の増幅においても極めて短時間でPCR増幅が可能です。RR350A/B)は反応効率に優れ、10秒/kbの伸長時間の設定で確実にPCR増幅ができます。R050A/B)が有効です。R060A/B)をお試しください。局所的にATリッチ領域が存在し全体のAT含量が60%を超えるため他のPCR酵素で増幅できないターゲットを増幅した実績があります。R050A/B)をお勧めします。添付のバッファーを用いた標準的な反応において、PrimeSTARシリーズの中で最もATリッチな鋳型に強い酵素です。バイサルファイト処理したDNAなどウラシルを含む鋳型は使用できません。DNA)をご使用ください。調節できるため、これまで増幅できなかったターゲットに関しても良好な増幅を行うことができます。R100A/B)をご使用ください。Gflexが最適です。R060A/B)はGCリッチ、ATリッチを問わず広範なターゲットを効率よく増幅します。R076A/B)は血液サンプルなどからのダイレクトPCRも可能です。R050A/B)をお勧めします。R050A/B)を2倍量使用することによりさらに反応性が改善される場合があります。これらの酵素で増幅産物が得られない場合は鋳型DNAの純度を上げる必要があります。RR350A/B)がお勧めです。EmeraldAmpシリーズは高性能タイプで、GCリッチ、ATリッチ等にかかわらず、広範な鎖長のターゲットを特別なPCR条件設定を行うことなく増幅可能です。RR350A/B)は高速PCRに対応しており、迅速なPCR判定が可能です。RR350A/B)がお勧めです。R076A/B)は、イノシンを含むプライマーが使用可能です。Taqなど)を用いる場合、イノシンが含まれるプライマーを使用すると反応性が著しく低下しますのでご注意ください。これらのPCR酵素で混合プライマーが必要な増幅には、degeneratedプライマーを使用してください。Ver.2をお勧めします。プライマー設定や反応条件の至適化といった煩雑な作業を必要とせず、最小限の検討でマルチプレックスPCRを行うように調製されたキットです。酵素の種類に応じて以下のようにクローニングを行ってください。Polymeraseは非常に強い3'→5'exonuclease活性を有するので、増幅産物のほとんどが平滑末端となります。6027)を用いて、平滑末端ベクターにクローニングしてください。6019)を用いれば、Tベクターにクローニングすることもできます。RR350A/B)、およびMightyAmpによる増幅産物のほとんどは、3'末端にdAのオーバーハングを有しますので、Tベクターへのクローニングが可能です。6028)をご利用ください。6027)を用いて平滑末端ベクターにクローニングすることもできます。増幅産物が全く得られない。含量を適切にしてください。merより短いプライマーの場合、シャトルPCR(2ステップPCR)では増幅が難しい場合があります。ForwardとReverseのプライマーのTm値が5°C以上異なる場合、うまく増幅しない場合があります。低い方のプライマーのTm値を基準としてアニーリング温度を設定し直すことで改善できる場合があります。純度の低い鋳型や阻害物質を含む鋳型は増幅が難しい場合があります。R076A/B)などのPCR阻害物質に強い酵素を用いると改善される場合があります。反応液量を適切に設定してください。μl以下の少ない反応液量では増幅が起こりにくい場合があります。適切な鋳型量に変更してください。ng以下にして再度お試しください。伸長時間を1分/kb以上に設定してお試しください。プライマー濃度を上げることで改善する場合があります。鋳型量が多い場合には伸長時間を変更してください。ngを超える場合、伸長時間は30~60秒/kbを目安として設定してください。プライマー濃度を上げることで改善する場合があります。kb)を増幅する場合は伸長時間を短く10秒(~30秒)に設定してください。通常の設定は10秒/kbですが、ヒトゲノムDNA等の複雑な鋳型の場合には伸長時間を30秒/kb程度に設定してお試しください。強力なホットスタート抗体を使用しているので、必ず98°C、2分の初期変性を行ってください。通常の設定は30秒/kbですが、クルードサンプルからの増幅や、増幅産物が得られない場合には伸長時間を1分/kbに設定してお試しください。プライマー濃度を上げることで改善する場合があります。変性温度は必ず94°Cに設定してください。95°C以上の設定では酵素の失活による反応性低下が起こり、増幅産物が得られない場合があります。非特異的増幅やスメアが見られる。高いプライマーを使用してください。適切か、伸長時間の設定が長すぎないかを確認してください。アニーリング温度を2°Cずつ上げてお試しください。2ステップPCRが有効な場合もあります。R045A/B)の場合3ステップPCRのアニーリング時間の設定を確認してください。特異的な増幅を行うためにはアニーリング時間を短く設定する(5秒あるいは15秒/kb)ことが非常に重要です。kb以下の増幅を行う場合、プライマーをTm値が55°Cを超えるように設計し、アニーリング温度を60°Cに設定して反応してください。プライマーのTm値が55°C以下の場合は、伸長時間を5秒~10秒/kbまで短縮してお試しください。Versionに変更することで、著しく改善する場合があります。伸長時間を必要以上に長く設定するとスメアが生じる場合があります。10~20秒/kbを目安に設定してください。増幅量が少ない場合には、5サイクル程度増やしてお試しください。伸長時間を必要以上に長く設定するとスメアが生じる場合があります。kb以下の場合)、10~20秒/kbまで短縮してお試しください。