Blog平衡化中性フェノール、トリスフェノールとも呼ばれます。フェノール(wikipedia)は水彩絵具のような臭いのする有機化合物です。以下の画像のように無色の結晶です。分子生物学の実験では、核酸の抽出などに用いられます。過去には希釈して使う事で消臭剤や消毒薬として大々的に使われていました。現在では人体への毒性が認められ、安全性の高いエタノール等が代わりに用いられています。(フェノールの歴史背景についてはこちらのサイトがわかりやすいです。)そうした背景からも、フェノールは劇物として分類され毒性と腐食性を持っています。試薬の調整の際には必ず手袋を着用し、所属する研究室等の取り決めにしたがって使用してください。皮膚についた場合は薬傷(火傷の一種)を引き起こすので、早急に大量の水で流してください。今回はDNAの抽出に必要な平衡化中性フェノールの作製方法を示します。フェノール自体は酸性です。酸性の条件下だとDNAがフェノールの有機層に分配するため、これらを防ぐために前段階として中性フェノールにしないといけません。フェノールは吸水性のためバッファーで飽和させておく必要があります。mM*EDTAは有機層にも水層の両方にとけ込みますので、それを加味しての量になります。Tris-HClの作製方法を参考に作ってください。Mなら1/10量です。未開封のフェノールの瓶をそのまま50°Cの湯浴に入れて溶かす。溶けたら常温まで戻す。Tris-HClを500ml加える。フタを閉めて5分から10分間激しくシェイクする。二層に分離するまで放置。上層を除去し終わった後、フェノール層(下層)をpH試験紙の上に一滴落とす。pH7.8以上になっていれば次の手順へ進む。pH7.8以下のときは手順8→9を繰り返す。フタのまわりはパラフィルムで覆っておく。平衡化した日付を明記した上で4°Cにて保存。(およそ一ヶ月が目安)上記のプロトコールと異なり、EDTAと一緒に2-メルカプトエタノールを加える方もいます。EDTAと同様に1.2mL加えましょう。逆にどちらも加えないMethodもあります。EDTAはDnaseの活性を抑えるために、メルカプトエタノールは安定剤として入っていると考えられます。購入する会社によってビンをそのまま使うことが難しい可能性もあるかもしれません。その際には臨機応変にしていただけるといいと思います。遮光はするようにしましょう。フェノールを溶かす際には65°C前後が基本です。割れることがないよう念のため50°Cにしております。溶けにくい場合などは65°Cに変更してみてください。三角フラスコ等にうつしてスターラーを使用してもいいかもしれません(ただし、時間がかかります)。freeのフェノール等を作製したい場合は全て専用のものを使用です。-20°Cで保存すると3ヶ月持つそうです。これは作製してから時間が経つと酸化がすすみDNAの抽出効率が落ちてくるのではないでしょうか。人によっては4°C保存で長期間使っている方もいらっしゃるそうです。瓶のまま-20°C保存するのは危険なので、シェイクして分離する前にチューブなどに分注して保存が良いと思います。この際、遮光のためアルミホイルで覆うことを忘れないようにしてください。保存にあたってはガラスビンまたはポリプロピレンといった耐性のある容器の使用をしてください。以前紹介したライフサイエンス新着論文レビューの姉妹サイトができました。ライフサイエンス領域融合レビューです。各分野の一線にいらっしゃる研究者による、レビュー記事になっております。領域融合レビューは著者の研究を体系的にまとめてくれているレビューです。切片の固定などによく使われる固定液です。いわゆる化学固定に用いられます。時間のある時に紹介します。記事を読むオンラインで読める教科書!?あたらしい皮膚科学オンラインで読める皮膚科学の教科書です。オンラインにて全編のPDFをダウンロードできるようになっています。記事を読むtwitter始めましたtwitterを始めました。過去の記事をランダムに発信(毎日1本)しています。生物系の研究者には便利な画像集の紹介です。生命科学系データベースアーカイブに収録されてある生物アイコンを紹介します。実に200種類を超える生物のアイコンがサイズごとに手に入れることができます。LifeScienceProject(LSP)のサイト開設から実に6年が過ぎました。一昔前に比べると、...記事を読むフェノール・クロロホルムの調整フェノール・クロロホルムの作り方です。phenol、chloroform、isoamylalcoholが入っており、PCIとも呼ばれます。クロロパン(chloropane)とも言うそうです。フェノール・クロロホルムは核酸の抽出や精製に用いられます。フェノールクロロホルム抽出とかフェノクロ精製などと言われます。中性フェノール抽出をした後に、フェノクロで処理を行います。本エントリーではフェノール・クロロホルム溶液の作製方法を紹介します。「人体のふしぎ」シリーズまとめ秋田大学のyoutubeチャネルには「人体のふしぎ」という動画シリーズがあります。肝臓など)で紹介をしております。今回はこの秋田大学の人体のふしぎのシリーズをこちらの記事でまとめさせていただきました。この中で、一つでも気になるワードがあれば、是非、下の動画を再生してみてください。記事を読むimageJで単位を合わせて面積を測るimageJを用いて画像の面積を測る方法を紹介します。スケールを合わせた場合はどうなるかまで一連の流れを紹介します。Viewer蛍光波長のスペクトルをプロットできます。それぞれのProbeのFluorophoreとスペクトル適合性をcheckできるそうです。