2018はじめに細胞が分裂を繰り返した後、分裂限界を迎えて細胞分裂を不可逆的に停止する現象は、細胞老化と呼ばれ、またそのような状態になった細胞は、老化細胞と呼ばれます。細胞老化は、テロメアの短縮や蓄積されたDNA損傷等によるゲノムの不安定化によって引き起こされ、分裂を停止することにより、細胞が癌化することを抑制すると考えられています。Phenotype)と呼ばれる現象により、炎症性サイトカイン、増殖因子、マトリックスメタロプロテアーゼなどを分泌し、周辺の細胞の癌化を誘発することが最近の研究で分かってきました。このように細胞老化は、腫瘍形成、さらには個体老化との関連も含め、近年、非常に注目を集めるようになりました。CellPathfinderにて解析を行った評価例をご紹介します。#655896)に播種し、一昼夜培養。(老化細胞マーカー)を染色。3.同時にHoechst33342にて核染色。4.HBSSにて洗浄しCQ1で撮像。撮像条件は、10倍対物レンズ、405nm(Hoechst33342)、488nm(SPiDER-β-gal)の2波長、各ウェル8視野。5.CellPathfinderにて画像解析。緑:SPiDER-βGal)(C)、(D)はそれぞれ(A)、(B)の解析結果。405nm画像を用いて核領域を、488nm画像を用いて細胞質領域を認識し、細胞質領域において一定以上の平均輝度値を持つ細胞をSA-β-gal陽性細胞(老化細胞)とした(赤輪郭)。(E)全核数に対する老化細胞数の割合(%)。継代回数0回の細胞(青)に比べて継代回数13回の細胞(オレンジ)では、SA-β-gal陽性細胞が約6倍に増加している。(F)各細胞質におけるSA-β-galの総輝度値のヒストグラム。ジ)では、高い総輝度値を持つ細胞が増加している。実験手順1.継代回数1回、及び10回のWI-38細胞を96ウェルプレートに播種し、一昼夜培養。-SPiDER-βGalのプロトコールに従い、SA-β-gal(老化細胞マーカー)を染色。Fluor647標識二次抗体を用いてγH2AX(DNA損傷マーカー)を染色。5.同時にDAPIを用いて核染色。撮像条件は、10倍対物レンズ、405nm(DAPI)、488nm(SPiDER-β-gal)、640nm(γH2AX)の3波長、各ウェル6視野。7.CellPathfinderにて画像解析。ピンク:γH2AX)(C)、(D)はそれぞれ(A)、(B)の解析結果。405nm画像を用いて核領域(青輪郭)を、640nm画像を用いて核内のドット(黄色)を、488nm画像を用いて細胞質領域を認識し、細胞質領域において一定以上の平均輝度値を持つ細胞をSA-β-gal陽性細胞とした(オレンジ輪郭)。(E)継代回数10回の細胞の40倍対物レンズ画像。核内でのγH2AXの局在が明確に見られる。(F)全核数に対する老化細胞数の割合(%)。(G)核面積に占めるγH2AX面積の割合(Ratio_γH2AX/NucArea)のヒストグラム。1回(左)に比べて継代回数10回(右)では、Ratio_γH2AX/NucAreaの値が高いSA-β-gal陽性細胞が増加。ともに、細胞老化の評価が簡便かつ迅速に実施可能であることが示されました。解析ソフトウェアCellPathfinderなら自動で定量解析を行うため、目視による従来法(X-gal法)に比べて高い定量性、再現性が得られます。CQ1なら、共焦点イメージングの利点を活かし、高倍率の対物レンズを用いた詳細な観察も可能です。公式アカウントライフサイエンスに関する最新情報を定期的に配信しています。フォローをお願いいたします。List関連製品&ソリューションハイコンテント解析ソフトウェア直感的で使いやすいインターフェースで、大量の画像データを多角的に解析・グラフ表示にまで導いてくれます。独自の機械学習機能は解析対象の認識力を格段に向上、3D培養系やライブセルイメージング等、より複雑で難易度の高い解析にも対応、HCAの強力なツールとなります。可能な、ハイコンテント画像解析ソフトウエア「CellPathfinder」をラインアップに追加。医薬品市場における新薬開発のスピードアップやiPS細胞やES細胞など最先端の生物学・医学の基礎研究の効率向上に貢献します。簡単な操作で細胞を高精細に3D画像取得し、数値解析できるイメージサイトメーターです。タイムラプス測定機能とインキュベーターの追加により、4D測定が可能になりました。効率を上げるハイスループットハイコンテントアナリシスシステムです。最先端のライフサイエンス研究のニーズに応え、常に進化を続けています。Corporationトップ。