crRNAが相補的でない場合、Cas9が放出され他のPAM部位を検索します(7)。DNA内の標的ゲノム鎖切断は非相同末端結合(NHEJ)修復経路により修復されますが、これにより挿入や欠失が導入されエラーを生じます。このCRISPR-Cas9メカニズムは、哺乳動物細胞を含む種々のシステムにおけるゲノム工学に適用可能です。(TALEN)により遂行されますが、これらの方法には各々の制限があります。メガヌクレアーゼを使用する場合、ヌクレアーゼとDNA間の部位特異的認識を明瞭に示すことが困難であり(2)、ZNFやTALENでは3塩基未満のDNA配列を設計し、認識することが困難であることが判明しています(2)。部位を標的としたゲノム編集を遂行することができます。CRISPR-Cas9システムは短鎖ヘアピンRNAsに比べて感度が高く、スクリーニング目的ではより高い効果が得られます。CRISPR-Cas9ノックアウトプラスミド20μg包装:最大20回のトランスフェクションが可能3種のgRNAをプール:CRISPR-Cas9ノックアウト(KO)プラスミドは、最大のノックアウト効率が得られるようデザインされた、Cas9ヌクレアーゼと標的特異的20塩基ガイドRNA(gRNA)をコードする3種のプラスミドのプール優れたgRNA配列:gRNA配列はGeCKO(v2)ライブラリー由来であり、Cas9タンパク質を配向してゲノムDNA内に部位特異的2本鎖切断(DSB)を誘発する(11)。本製品はHDRプラスミドと組み合わせて使用することにより、DSBsが導入された細胞のみを選択可能なRFPあるいはPuroをマーカーとしてノックインすることができます。ノックアウトプラスミド):72,000円(検索方法はこちら)ダブルニッカーゼプラスミドCRISPR-Cas9システムを用いたゲノムDNAへのDSB(DNA二本鎖切断)導入は、その効率が非常に高いことが最大の利点です。この効率も数々のオフターゲット作用により濁りを生じ、CRISPR-Cas9編集の特異性を低減する可能性もあります。オフターゲット作用の低減、および標的特異性はダブルニッキング法(ダブルニッカーゼシステム)を利用することで改善することができます。この場合、Cas9(D10A)ニッカーゼ変異体(Cas9n)をそれぞれコードする一対のプラスミド(下図参照)を利用し、標的特異的ガイドRNA(sgRNAs)によってそれぞれの特異的ゲノム部位を標的します(12)。各Cas9n/sgRNA複合体は、ガイドRNAと相補するDNA鎖に1つだけニックを作る(12)。それぞれのガイドRNA(sgRNAs)ペアは約20塩基程度ずれており、標的DNAの反対鎖に位置する標的配列のみを認識します。Cas9n/sgRNA複合体ペアによって作られた2つのニックはDSB(DNA二本鎖切断)を模倣する状態になります(12)。したがって、一対のガイドRNAを利用することで高レベルの効率を維持しつつ、Cas9媒介型遺伝子編集の特異性を改善することができます(12)。本製品はHDRプラスミドと組み合わせて使用することができません。HDRプラスミドはKOプラスミド(野生型ヌクレアーゼ)用にデザインされています。UG¥16,000HDRプラスミドHDRプラスミドは、DSBのための特異的DNA修復テンプレートをご提供する製品です。ノックアウト(KO)プラスミドと同時導入すると、HDRプラスミドはCas9誘導性DNA切断が生ずる部位に細胞選択用ピューロマイシン耐性遺伝子を組み込みます。HDRプラスミドはKOプラスミド(野生型ヌクレアーゼ)用にデザインされており、ダブルニッカーゼプラスミドと組み合わせた使用はできません。vectorCreベクターは、2つのLoxP部位間の部位特異的DNA組換えを触媒するバクテリオファージp1酵素であるCreリコンビナーゼを発現します。(HDR)の際に挿入された選択マーカーを利用して編集されたDNAをもつ細胞を選択することができます。その後、選択細胞にCreベクターをトランスフェクションし、HDRの際に挿入されたピューロマイシン耐性遺伝子といった遺伝物質を切除することができます。(SAM)転写活性化システムです。SAMシステムにより、標的遺伝子を高効率で活性化するための転写因子を強力にリクルートします。転写活性化システムSAM転写活性化システムSAM複合体が標的遺伝子の上流に位置する特異的部位に結合して転写因子を動員し、標的遺伝子の内在性転写を活性化。商品検索方法1.サンタクルズ社のWEBサイトへアクセスし、検索ウィンドウに遺伝子名を入力して検索してください。2.画面をスクロールすると、抗体製品の下にCRISPR-Cas9製品が掲載されています。品名をクリックし、製品ページをご確認ください。データシートおよびプロトコールはこちらよりご覧いただけます。3.品番、品名、数量を指定し、ご利用の代理店様へご注文ください。Plasmidは80,000円でございます。1380-1389.商品は「研究用試薬」です。しては使用しないように、十分ご注意ください。サンタクルズ社」は、下記のカテゴリーに属しています。