blotting法で確認したところ、肝癌細胞株同様にTAZ優位(TAZ>YAP)の発現パターンを8株中7株で呈していた。AsPC-1細胞株ではYAP=TAZ程度の発現状態であった。PK59を用いることとした。15ng/mLで添加し、Smadシグナルの活性化をphospho-Smad3で確認し添加量をTGF-β15ng/mLに設定した。引き続き、TGF-β添加によるYAP/TAZ発現変化ならびにYAPもしくはTAZ発現抑制状態でのTGF-βシグナルの活性化について検討を進める。delayed.Reason2016年4月の熊本地震による実験施設および多くの試薬が被害を被ったため、予定していた実験の再スケジューリングを要した。pathwayのクロストークに関する検討がまだ終了しておらずやや遅れていると判断する。assayを用いてcontrolと比較検討する。TAZに関しても同様に検討を行う。具多的な方法としては、・YAP/TAZの膵癌細胞株への強制発現の方法は、YAP/TAZのcDNAをサブクローニングした後に、GATEWAYシステム(invitrogen)を用いて発現ベクターを作成する。申請者らはこれまでの研究においてすでにベクターを作成し保有しており、作成したプラスミドは、大腸菌へ導入し、増幅させる。プラスミドを抽出・精製を行った後に、Lipofectamineを用いて、細胞へ導入する。発現抑制系では、YAP/TAZ高発現株へYAP/TAZのsiRNA(invitrogen)を行い、細胞内Smadシグナルの低下を確認する。genesの発現変化をcontrol群と比較検討する。