Achievements研究実施者が見いだした研究背景事情を踏まえ、神経回路形成期の細胞内に39°Cのホットスポットが点在し、この熱+膜伸展(成長円錐運動により生じる)の相乗作用によりTRPV2が活性化し、神経回路形成を促進させている可能性が高いと考えるに至った。本研究では、この可能性を検証し、生体内のTRPV2活性化がどのように起るのかを解き明かす。研究実施者は既に39°C以上の熱によってTRPV2メカノセンサー感受性の増大が起ることを電気生理学的解析で見いだしていた。分担研究者の岡部が開発した蛍光温度プローブを用いて、再生中の軸索内部に他領域よりも2°C高いホットスポット(=39°C)が局在することを見いだしていた。そこで、本年度は、この39°Cというホットスポット温度がTRPV2を活性化し、発生期の軸索伸長を促すのかを検証した。研究実施者が作製した感覚/運動神経特異的なTRPV2欠損マウス(TRPV2CKOマウス)を用いた。WTとTRPV2CKOマウスの胎仔(妊娠12日目)から培養DRG神経を調製し、これを37°C(生理学的温度)と39°C(ホットスポット温度)で培養した。培養2日目に、その軸索長を定量比較した。その結果、生理的温度である37°C培養時にはWT群とTRPV2CKO群の間に軸索長の有意な差は生じなかった。培養温度を39°Cにし、軸索全体をホットスポット環境以上の高温暴露した場合には、WTと比較し、TRPV2CKO群では軸索長が有意に短くなった。TRPV2CKOマウス由来の培養神経と比較することで、再生中の軸索内部ホットスポット(39°C)がTRPV2を活性化し、軸索再生に有用な生体シグナルとなっていることを検証出来た。planned.Reason研究計画に立案した内容を全て行うことが出来たため。ActivityIRレーザー照射装置を用いて軸索の一部だけを加熱し、TRPV2活性化依存的に軸索再生が促進するのかも調べる。同様に、ニワトリ胚を用いたタイムラプスイメージングを行い、IRレーザー加熱により生体内においても軸索伸長が加速するのかを検証する。