Explorerでは正しく表示されません。Chrome等をご利用ください。提供ヒトビメンチンタンパク質のリン酸化パターンの検出Auto2Dを用いてヒト悪性脳腫瘍タンパク質を2次元電気泳動した後、抗ビメンチン抗体を用いて検出した結果。​結果ヒト悪性脳腫瘍由来ビメンチンタンパク質のN末端切断シフトおよびリン酸化シフトを同時に検出できた。提供リン酸化プロテオーム解析によるmTORシグナル伝達因子の検出mTOR阻害剤であるラパマイシン、もしくは作用機序の異なるmTOR阻害剤Aの添加、非添加の培養細胞を使用し、Auto2Dを用いてリン酸化プロテオーム解析を行った結果。結果ラパマイシン処理で変化したリン酸化シフトを数多く検出できた。リン酸化シフトを同時に検出できた。提供ヒト正常細胞と不死化(癌化)細胞のタンパク質の比較解析Auto2Dを用いて蛍光試薬Aで標識したヒト正常繊維芽細胞と蛍光試薬Bで標識した不死化(癌化)細胞のタンパク質を2次元電気泳動した結果。不死化(癌化)に伴い変化するスポット群を検出できた。タンパク質のアイソフォームの解析Auto2Dを用いてマウス海馬細胞質タンパク質をpH4-5.5のカスタムIEFチップで2次元電気泳動した結果。タンパク質のアイソフォームを含むスポット群を検出できた。13-acetate)で処理した40μgの細胞由来タンパク質を、Auto2Dを用いて2次元展開、PVDF膜転写した後、下記6種類の抗体を混合した抗体ミックスを用いて2D-ウェスタンブロッティングを行った結果。下記6種類の標的タンパクの抗体を用いた結果、各タンパク質のリン酸化を同時に検出できた。提供Auto2Dを用いた2次元電気泳動によりcIEFに比べ高感度かつ高解像度で分離できた。​Auto2Dによる抗体医薬品の分離データ等電点及びSDS-PAGEともに非還元条件下でAuto2Dを用いて、抗体医薬の2次元電気泳動分離を行った。抗体医薬C,抗体医薬Bおよび抗体医薬T共に高い解像度で蛋白質を分離する事ができた。等電点およびSDS-PAGEと共に非還元条件で2次元電気泳動を行なった結果である。赤矢印は抗体医薬の目的成分H2L2ホモヘテロダイマーと推測され、それ以外のスポットは、目的成分由来のタンパク質スポットであると思われる。抗体医薬Cを用いて最近よく用いられているcIEF電気泳動分離と、等電点及びSDS-PAGEともに非還元条件下でAuto2Dを用いた2次元電気泳動分離をそれぞれ行った。結果Auto2Dを用いた抗体医薬Cの検出結果は、目的成分において9本のピークが得られ、cIEF分析を用いた抗体医薬Cの検出結果8本に対し優位性を示した。抗体医薬CをAuto2Dを用いて分離した2-DEゲル画像とcIEFとのパターンの比較cIEFでは抗体医薬を等電点で分離することにより、目的成分が8本のピークとして検出されたのに対して、Auto2Dでは目的成分が9個のスポットとして検出された。56kDa)を抽出し、評価サンプルとして使用した。Fr1,Fr2,Fr3の混合物について、SDS-PAGEおよびAuto2Dによる2次元電気泳動を用いて分離を行い、得られた泳動結果とタンパク質の均一性評価の考察を行った。結果SDS-PAGEの検出結果の差はほとんど見られず、特にFr1とNPは同様な結果となったことから、精製状態の判断は困難となった(図A)。Fr1とNPそれぞれの泳動パターンが異なる事がわかった(図B、図C)。Fr1とTAA(NP)それぞれ異なる分子量および等電点を持つタンパク質を示していることから、Fr1とTAA(NP)のタンパク質が不均一性を示している事がわかる。図Bに示されるように確認できるスポット数が少ないFr1の方が、より均一性が高いタンパク質であり、Fr1がより良好な検証が得られることが示唆された。Auto2Dを用いた2次元電気泳動は純度だけでなく均一性を評価できるという点で、SDS-PAGEよりもタンパク質の品質評価として優れ、なおかつ、その泳動パターンからタンパク質を結晶化させたときの品質が推測できる有用な分析法になる事が示唆された。強いスポットとして、精製TAA(Fr1)では単一のスポット(図B赤矢印)しか検出されなかったのに対して、粗精製TAA(NP)では、Fr1で検出されたスポットに加えて、等電点がシフトしたと予想される2つのスポットの検出が確認された(図C赤矢印)。クラスターを形成しない分解能のより高い結晶が得られるTAA(Fr1)のほうがクラスターを形成しやすく、分解能のより低い結晶しか得られないTAA(NP)よりも均一性が高いタンパク質であることが示された。これらの結果より、2次元電気泳動法は、純度だけでなく均一性を評価できるという点で、SDS-PAGEよりもタンパク質の品質の評価法として優れていることが分かる。お客様サポートMore。