Mix融解曲線解析によるマルチプレックスPCR解析などに最適。2×濃度のマスターミックス試薬です。本試薬は、ROX(別添)とプライマー以外の成分があらかじめ混合されています。そのため、反応液調製を簡便化できるとともに、サンプル間の蛍光強度のばらつきを最小限に抑えられ、再現性の高い結果を得ることができます。Iを用いるインターカレーションアッセイにおいて最大限に発揮させることを可能としました。polymeraseを用いる従来品では困難であったGCリッチなターゲット、塩基に偏りがあるような配列やプロモーター近傍の2次構造をとりやすいようなターゲットにおいても、定量的な増幅が認められます。シリーズなどの通常のPCR用に設計したプライマーをそのままご使用頂けます。長鎖ターゲットでも増幅できるためプライマーの選択幅を格段に広げることができます。2kbまでのさまざまなターゲット長を選択できるため、幅広い融解曲線解析が可能です。プライマーダイマーの発生領域(短鎖領域)を外して増幅領域を選べるため、エンドポイントアッセイでの多型解析、マルチプレックスPCR解析などに有利です。植物ライセート、マウステールアルカリ熱抽出液、血液などのクルードサンプルを用いて直接検出することができます。GreenIアッセイを応用することで、煩雑だった多型解析やSNP解析を簡便化することができます。)●高い特異性プライマーダイマーなどの非特異反応を抑えることで、低コピー域までの幅広い定量が可能です。RTシリーズ」を併用することで安定した検出を得ることができます。Modeにも対応)のほか、ガラスキャピラリーを用いる高速サイクラーにも対応しています。●GCリッチなターゲットGC含量が70%を超えるターゲットに対し、各リアルタイムPCR試薬による反応性の比較を行いました。RNA由来のcDNAを用い、cDNAの5倍希釈(5段階)について、反応を実施しました。その結果、弊社従来品では、増幅困難であったGC-richなターゲットに対しても、定量的な増幅が認められました。反応特異性が高く、プライマーダイマーが生じにくいため、低コピーまでの幅広い定量可能域を得ることができました。使用)●GC含量に偏りがあるターゲットヒトゲノムをテンプレートとして、配列中の赤字で示した部分をPrimer配列として使用し、解析を行いました。その結果、本品では定量的な増幅が認められ、2次構造をとりやすいターゲットにおいても有効であることが確認できました。FXシリーズやKOD-Plus-シリーズで増幅可能なプライマーを用い、約2kbのターゲットの増幅を実施しました。DNAポリメラーゼを用いる従来品では増幅困難な約2kbのターゲットでも本品では定量的な増幅が認められました。StepOnePlusTM使用)●増幅長が異なるターゲットの解析ヒトゲノムDNAを鋳型にβ-アクチン遺伝子上の増幅長が異なるターゲットの増幅、及び融解曲線解析を実施しました。その結果、60bp~約1kbまでの増幅産物が得られ、74~87°Cの幅広い温度域で今回増幅した増幅産物の識別が可能でした。そのため、増幅長を変え融解温度に差異が生じるようにプライマーを設計することでワンチューブで複数のターゲットの検出が可能となります。この融解曲線の差異はGC含量に左右されますが、増幅産物のTm値を計算することで予測可能です。増幅長が異なるターゲットを用いた解析(ABI7500使用)3.クルードサンプル(マウステール)の検出マウステールアルカリ熱抽出液を用いワンチューブでジェノタイピング解析を実施しました。Tm値に差異が生じるように設計しました。knock-inに対しては、増幅長が長いため、伸長時間を30秒と短くすることで増幅できないようにしています。ヘテロ検出におけるピーク比のバランスをとるために、WT特異的プライマー:knock-in特異的プライマー=1:3として検出の結果、すべてのタイプで増幅が認められジェノタイピングを実施することができました。Biosystems社製機器など、ウェル間の蛍光強度および分注誤差補正のためにパッシブリファレンスを用いる機器での反応の際に添加してください。補正を行わない機器では添加する必要はありません。アニーリング温度は、プライマーの50~68°Cの範囲に設定してください。※伸長時間は、標的配列が500bp以下の場合は30秒で十分に反応が進行しますが、一部の機器では、安定した蛍光測定に30秒より長い時間を必要とする場合があります。増幅曲線のがたつきや、ウェル間の変動が大きい場合には、長めの時間(45~60秒)を設定してください。LLC.よりUS7772383のライセンスを受け、販売しております。Inc.の登録商標です。Inc.の登録商標です。ワンポイントアドバイス●保存について凍結融解の繰り返しは、10回程度では品質に影響がないことが確認されています。冷蔵保存することができます。長期間使用しない場合、-20°Cで再度凍結保存してください。持込について一般的な逆転写反応用試薬などを用いて合成したcDNA液を、精製せずに滅菌水などで適宜希釈して、そのままリアルタイムPCR反応液に添加してご使用いただくことができます。添加量は反応液量の10%を上限の目安としてください。FSQ-301]を用いる場合は、反応溶液を20%まで持ち込みことが可能です。毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。消防法に基づく危険物です。御購入時に申込書の提出が必要な製品です。(カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。