研究概要1.胃がん検体を新たに100例以上収集するとともに、全患者について生活習慣に関するアンケート調査をおこなった。メチル化頻度を5種類の遺伝子について解析し、エストロジェン受容体遺伝子では、70例中40例(57.1%)で陽性だった。染色体3p21は胃がんなどで染色体欠失が多い領域であり、我々は、3p21領域に存在するカルシウムチャンネル遺伝子CACNA2D3(以下、A2D3)に着目した。RT-PCRの結果、ヒト正常胃粘膜上皮ではA2D3は発現していたが、胃がん細胞株7例中3例で発現陰性であり、5Aza-dC処理後に発現は回復した。MSP解析ではメチル化と遺伝子発現はほぼ一致し、遺伝子発現の消失にはメチル化が関与していることが示唆された。胃がん組織におけるA2D3のメチル化頻度は、27.1%(70例中19例)であった。組織型別では未分化型がんでのメチル化頻度は、分化型がんに比べて有意に高かった。以上からA2D3異常は未分化型胃がんに関与していることが示唆され、更にA2D3は機能的に細胞増殖にも関わっている可能性が推測された。familyに属する転写因子SOX2は発生・分化に関与しており、正常胃では発現しているが、小腸と大腸では発現していない。胃がん細胞株9例におけるSOX2発現をRT-PCR法で調べた結果、6例での発現は陰性または弱かった。SOX2の強制発現を行った結果、増殖が抑制されるとともにアポトーシスによる細胞死が認められた。A、及びGastrinの発現上昇も見られた。以上より、SOX2は胃由来細胞においてがん抑制的機能を持つことと、胃の分化マーカーの発現をコントロールしていることが示された。腸特異的に発現している消化酵素スクラーゼ遺伝子のプロモーターにマウスSOX2遺伝子を繋いで導入したトランスジェニックマウスを作成し、腸でのSOX2の発現を検出した。