図8では、SLBおよびマイクロチャネルの品質を決定する視覚的手掛かりを提供するために、一連のマイクロチャネル画像が提示されている。">図1:タンパク質-IPP相互作用を研究するためのPIP-on-a-chipマイクロ流体デバイス。)マイクロ流体デバイスは、8個のマイクロチャネルを有し、8個のマイクロチャネルおよび8個のマイクロ流体チャネルを有する。色付きの溶液を流し、この画像でチャネルを可視化した。装置の幅(x)は2.0cm、高さ(y)は0.5cm、長さ(z)は3.0cmです。)マイクロチャネルの床はガラスであるが、壁および天井はポリジメチルシロキサン(PDMS)で構成される。各マイクロチャネルの幅は100μm、高さは40μm、長さは1cmです。隣接する2つのマイクロチャネル間の間隔は40μmである。支持された脂質二重層(SLB)がガラス表面の上に形成される。この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。-3-ホスホコリン(POPC)からなる群から選択される。)脂質小胞のタイプ:SUV、大単層小胞(LUV)、巨大単層小胞(GUV)、および多重小胞(MLV)。SUVはSLBの準備に最も適しています34。)動的光散乱(DLS)に基づいて、小胞後脂質押出(0.1μmフィルターを通して)のサイズを確認した。53.9nmの流体力学的半径(Rh)は、m小胞のサイズ分布の約100nmである。2含有SUVからの測定値を表す。この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。図3:ガラス支持体上のSLB形成。)所望の脂質組成のベシクルを調製し、マイクロチャネルに流す。ベシクルはガラス表面に吸着して変形する。臨界表面被覆率が達成されると、ベシクルは自発的に破裂してSLBを形成する。参考文献35、36から適応。)10X対物レンズ下のデバイス内のSLBが示されています。nm)が使用されます。">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。図4:典型的なSLB結合実験のフローチャート。パターニングされたPDMSブロックおよび洗浄されたカバースリップは、酸素プラズマで処理されて、両表面を親水性にし、次いで組み立てられる。SUVは、マイクロチャネルを流れてSLBを形成する。余分な小胞を除去し、ランニング緩衝溶液を流すことによってSLBを実験条件に平衡化する。次に、タンパク質希釈液をマイクロチャネルに流す。最後に、蛍光強度データを分析し、正規化し、タンパク質濃度の関数としてプロットする。)vaルーこの図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。図5:pH変調に基づくセンシングの原理。2内で6.7のpKaを有する高pHでクエンチします。)この研究で用いたPHドメインは等電点(pI)が8.4であるため、実験的pH(7.0)ではタンパク質は正に荷電している。-イオンを引きつける。SRB-POPE、その蛍光のプロトン化状態をシフトする変調されPHドメイン濃度依存的にクエンチされる。この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。図6:pH調節によってモニタリングされたPLC-δ1PH-膜結合。)示された濃度でPHドメインを添加する前後のマイクロチャネルの図。2含有SLBに対する親和性の比較。SLBについては結合が観察されなかった。0.0396)との間の親和性を比較した。2結合実験のために、マイクロチャネルを横切るラインスキャンからの蛍光強度をピクセル単位の距離の関数としてプロットする。詳細は、ステップ8.4の式を参照してください。">この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。)ブランク(タンパク質なし)およびタンパク質チャネルのタンパク質滴定ラインスキャンデータの前(黒色)および後(赤色)。蛍光強度データはピクセル単位の距離の関数として示される。網掛け領域は、計算のためにデータを抽出するために使用された領域を表します。ベースライン蛍光強度データは、各チャネルの直前および直後に抽出される。)ブランクおよびタンパク質チャネルについて、タンパク質滴定前後のデータを抽出する。平均は、ベースラインおよびチャネル蛍光データ内で取られる。ベースライン減算の後、蛍光データはブランクチャネルに対して正規化される。詳細は、ステップ8.3の式を参照してください。blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。)高品質のSLBおよびマイクロチャネルを示す画像。)融合マイクロチャネル。)マイクロチャネル内に閉じ込められた粉塵粒子。)マイクロチャネル内に閉じ込められた気泡。この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。">ここをクリックしてファイルをダウンロードしてください。librarian.Discussion各PIP変異体は、低濃度ではあるが、それらは独特の物理的組成およびオルガネラ膜1の機能的特異性の確立に寄与する特定の細胞小器官の細胞質表面に存在します。PIPの最も重要な用途の一つは、特定の細胞内局在および/または活性化6,7を必要とするタンパク質の多数のための特定のドッキングプラットフォームとしてあります。インビトロでタンパク質-PIP相互作用を研究する能力が重要である。天然長の脂肪アシル鎖の正常な提示と、流体脂質二重層との関連でタンパク質-PIP相互作用を考慮することを可能にする。このアッセイは、組み合わせてpHシステムを検出システムとして使用し、SLBをマイクロ流体プラットフォームにセットされたモデル膜システムとして使用することは、他の膜結合技術と比較して独特の利点を提供する。SLB表面積)の両方について、容積要件が低いために材料を節約する。