pH感受性蛍光プローブは非常に安定であり、19、20、41試験の実験条件下で光退色しません。このプラットフォームの別の利点は、膜表面を視覚的に観察する能力である。ある種の相互作用は、脂質ミクロドメインの形成を誘発し、および/または光漂白(FRAP)後の蛍光回復を介して直接視覚化および/または試験することができる膜流動性に影響を与え得る42。ここに記載されたアッセイは、蛍光顕微鏡を超える高価な機器を必要としない。最後に、最も重要なことに、リガンド/レセプター標識の非存在下で膜相互作用を評価することにより、PIP-on-a-chipアッセイが従来のアッセイよりも好ましい方法となる。PIP-on-a-chipアッセイは強力な技術であるが、末梢膜タンパク質は、カチオン性およびアニオン性残基の全体的な組成および結合部位内/その周りのそれらの分布において一定の問題を生じる。いくつかのタンパク質は多くの塩基性残基からなるPIP結合部位を有するが、他のタンパク質は少数しかない。-比は異なってくるであろうし、結合時の局所pHの変化の大きさも変わるであろう。相互作用の化学量論およびPIP-結合が他の脂質との相互作用によって安定化されるかどうかは、場合をさらに複雑にする。したがって、タンパク質のpI、特に大きなタンパク質のpIは、期待される蛍光変化の唯一の指標ではない可能性がある。いくつかのタンパク質-IPP相互作用は大きな蛍光変化をもたらすが、残りは小さな蛍光変化をもたらし得る。高めるために少なくとも2つの処置を取ることができる:1)二重層上のより大きなPIPレベルを使用してタンパク質の数を増加させる。SRB-POPEのレベルを増加させます。現在のプラットフォームは末梢膜タンパク質の研究に多くの利点を提供するが、膜貫通タンパク質の研究にはいくつかの課題がある。nmである)に、膜貫通タンパク質、ガラス支持体相互作用は、タンパク質の変性を促進することができる機能の損失につながる、そして固定化34により、43、44、45。関与していても、これらの課題を克服するために、ポリマークッションを提供するためのガラス支持体の表面改質またはリポポリームを含む様々なアプローチが開発されている二重層内のRテザー(例えば、PEG化脂質)がSLB-ガラス支持距離34、46、47、48を増加させます。再現性を保証するには、きれいなカバースリップと新鮮なSUVを使用することをお勧めします。2個のヘッド群リン酸PIをプロトン化し、破裂効率49、50を増加させるためにガラスで静電反発力を低下させるために重要です。アニオン性lを含まないSUVipidsは、pH調整を必要としません。SUVは、酸素プラズマ処理および結合の直後にチャネルに注入されるべきであり、一方、ガラスカバースリップ表面は、SLB形成に必要な親水性である。SLBの品質に加えて、塵埃粒子も別の問題です。作業エリアは定期的に清掃してほこりを除去する必要があります。PIP-on-a-chipアッセイを計画する際に考慮すべき別のパラメータは、タンパク質貯蔵バッファーである。)は、蛍光および/またはSLBの完全性に影響し得る。従って、その効果を試験するために貯蔵緩衝液を滴定する必要がある。効果が観察された場合、蛍光のドリフトを防ぐためにタンパク質を滴定する前に、SLBも保存緩衝液条件に平衡化しなければならない。HEPES、pH7.0)と同じ緩衝成分をも含有するべきである。結論として、本発明者らは、pH調節アッセイがタンパク質-PIP相互作用を調べるために首尾よく使用できることを実証した。PIPに重点を置いていましたが、このプラットフォームは、ホスファチジルセリンなどの他の生理学的に関連する脂質を含むより複雑な膜システムとの相互作用を試験するために使用することができます他の28、39、42、51の間でNE、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、コレステロール、。細胞タンパク質以外にも、このアッセイプラットフォームは、ヒト病原体を研究する人々にとって有益であり得る。52、53、54、55、56と特異的にいくつかと相互作用することが示されています。したがって、PIP-on-a-chipアッセイは、タンパク質-PIP相互作用の小分子阻害剤を発見し、特徴付ける手段を提供することができる。librarian.Disclosures著者は何も開示することはない。AcknowledgmentsDSおよびCECは、一部、助成金AI053531(NIAID、NIH)によって支持された。SSおよびPSCは、補助金N00014-14-1-0792(ONR)によってサポートされていました。gdpr@jove.com.。