Rev.131017(本製品は研究用試薬です。)【還元型グルタチオンを維持する重要な抗酸化酵素】グルタチオンは細胞内における主要な抗酸化物質であり、その殆どが還元型で存在しています。生体内における抗酸化防御に重要な役割を果たしていると考えられています。関連が指摘されています。糖尿病、痛風等においてGR活性が高値を示すほか、悪性腫瘍において血漿GR活性が高値を示すことが報告されてます。赤血球中のGR活性が上昇すること、摂取中断によりGR活性が低下することが観察されています。本製品は組織ホモジネート、細胞懸濁液中のグルタチオンペルオキシダーゼの活性を測定するキットです。可変式マイクロピペット(20〜1000μL)、マルチチャネルピペット、340nmの吸光度変化を測定できるマイクロプレートリーダー又は分光光度計(温度制御できるものが望ましい)。全血を、氷冷した蒸留水にて5倍希釈し(例:全血50μL+蒸留水200μL)、氷上にて5分間静置して溶血させます。サンプルは測定直前まで氷冷しておきます。当日測定しない場合には-30°C以下にて凍結保存します。測定直前に遠心して上清を回収、アッセイバッファーにてヘモグロビン濃度が5mg/mLとなるように希釈します。NaCl)にて2〜3回洗浄して、遠心により赤血球ペレットを得ます。赤血球に対し2〜4倍容量の、氷冷した蒸留水を加え、氷上にて5分間静置して完全に溶血させます。サンプルは測定直前まで氷冷しておきます。当日測定しない場合には-30°C以下にて凍結保存します。測定直前に遠心して上清を回収、アッセイバッファーにてヘモグロビン濃度が5mg/mLとなるように希釈します。灌流により組織中より赤血球を取り除いておきます。pH7.0〜7.6)を添加してホモジナイズします。不溶物を遠心により除去し、測定まで氷冷保存します。当日中に測定しない場合には-30°C以下にて凍結保存します。測定直前にアッセイバッファーにて1:40希釈(41倍希釈)します。組織によりGR活性は大きく異なります。サンプルに合わせて希釈率を調整してください。肝臓/腎臓では高レベル、赤血球/心臓/肺/水晶体では中レベル、骨格筋では低レベル、血漿では検出されないことが知られています。検出されることがあります。溶血が起きないようにご注意ください。※操作方法等は予告なく改訂される場合があります。ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。サンプルおよびキャリブレーター試薬を調製します。サンプル/キャリブレーターを150μL/well分注します。各ウェルにGSSG試薬を50μL添加、混合し1分間静置します。各ウェルにNADPH試薬を50μL添加、混合し1分間静置します。340nmにおける吸光度を3分間計測します(30秒間隔以下)。GR活性を算出します。※GR活性は温度の影響を受けやすいので、測定時の気温を記録しておくことをお奨めします。1000)を算出します。INTERCEPT)を作成します。-mRateの算出には、吸光度に(-1000)を掛けていることにご注意ください。下記の計算式を用いてサンプルの-mRate測定値からGR活性を算出します。DILUTIONはサンプル希釈率です。60倍希釈したサンプルの-mRate測定値が21.33である場合、具体的な計算式は下記のようになります。赤血球可溶化液についてGR活性を測定した場合では、ヘモグロビン値で補正することができます。mg/mLの場合には、下記のように補正されます。