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性が低下すると細胞の半分が栄養外胚葉を形成し、一方、oct4の誘導発現が増加すると主にESCが生じることを示した。実験では、破砕の段階での全能割球を培養するとき、ならびに生殖段階および胚発生の後期段階で、ESCを系統に変換することはできない。マウスのESCは、通常、第(胚盤胞の単層)及び第七段階(初期卵筒胚盤胞の二層)に相当する3.5~4.5日妊娠、に割り当てます。明らかに、着床前の期間においてのみ、マウスの胚はESCに変換することができる細胞集団を含む。その結果、ESC系統の単離は、胚発生の特定の段階でのみ可能である。全能性は、胚性膜および胎盤からの生きた胚の開発のための機会の面で接合体であり、破砕割球の間に生じます。胚芽細胞の全効力の喪失は、後期胚盤葉破砕がそれらの位置に依存する後期桑実胚段階で始まる。初期のモラブロマイシンは全能性を保持する。それらの位置の変化を伴う実験的操作、例えば、それらの位置の逆転は完全な胚の発生を妨げないからである。系統内のESC放出の効率は、胚盤胞期の状態に影響されることが判明した。妊娠3.5日で卵巣を摘出し、プロゲステロンで処置したマウスの生殖管、休眠の7日間のシミュレーション後の胚盤胞の使用は、胚性幹細胞のラインのさらなる成功の分離に貢献しています。そのような条件下で、内部細胞塊を形成する割球の数が増加すると考えられる。細胞周期が伸長し、ほとんどの割球がG0期に入る可能性もある。6と事実上不可能を使用して得ることが著しく困難です。明らかに、初期胚は、多能性ESC系統の発達に影響を与えるいくつかの遺伝的特徴を有する。/カルシウムマウスがまだ割り当てられていました。胚盤胞からESK系統を得るための実績のある標準的な技術は、初期胚の実験技術に関する実験マニュアルに記載されている。実験的ESK系は、4.5日齢のマウス胚の単離された胚盤葉(一次外胚葉)をかなり複雑な顕微手術技術および改変された培養条件で培養することによっても得ることができる。ESC系統の形成頻度は、胚盤胞の内部細胞塊を用いた作業よりもはるかに高かったので、この手順の複雑さは正当である。各クローンを単離するためのESC株は細胞のマイクロウェル、栽培40-60凝集に移し、それを再び分散されます。この手順を複数回繰り返しは、全能性と高いテロメラーゼ活性を保持する貫通路50-100プラスチックに付着最大増殖速度normokariotipnyh細胞と不死化ESK線を得ることができます。培地中のエンドトキシン濃度のトレースが未熟生殖細胞の大量死を引き起こしました。培養中の線形成長とESCのタイムリーな分散の注意深い制御との両方の娘細胞は、二倍体核型および総効力を維持し、多能性と細胞周期を無制限に行うことができる残っている、対称分裂することが可能です。ヒトESCのクリーンな集団の選択は、緑色蛍光タンパク質(GFP)の合成をコードする遺伝子を含む組換えDNA分子のゲノムへのトランスフェクションの後に行うことができる。分化の開始とともに、選択的培地上で純粋で安定した多能性細胞株の選択を可能にするこの遺伝子の発現レベルが低下する一方、GFP発現は、その増殖を支持する条件下でESCの増殖とともに増加する。GFPをESCで選択して培養すると、選択作物の条件において、分化細胞の強力な抗増殖効果がなくなるため、コロニーの頻度が大幅に増加する。体外受精手順の後に残る着床前胚(ステップ80-120細胞)の単離のそれらの方法によって行におけるヒト胚性幹細胞の翻訳。機械的に、中Delbekko針に分散させ、この合成により産生さ「過剰」胚をすることができません。単離された細胞embryoblastモノクローナル抗体の選択的蛍光標識を用いて細胞を標識した後。Embryoblastはコラゲナーゼディスパーゼの混合物を用いて単一細胞に分散させました。20%ウシ胎児血清)特別な培地中で増殖させました。したがって幹細胞および前駆細胞の生存および増殖は、IL-6、LIFおよびSCFへの暴露によって維持されます。この環境では、サスペンションのhESCが付着していない細胞osharennyhクローンは穏やか複数のピペッティングにより解離されるように成長します。5日〜7日に中断した文化に新しいクローンが出現します。ESCの最大増殖速度は、10〜15個の細胞の段階でのクローンの反復解離によって達成される。各クローンは、マイクロセルに移し、40〜50個の細胞の凝集体まで成長させました。cmディッシュあたり5から10000000個の細胞の密度に培養物の容積を増加させる、通路に多数回繰り返されます。ヒトESCの分化は、接着受容体の細胞骨格および発現の発達を示し、基板への細胞付着を有する(培地、添加および血清LIFの除去の変化で)開始しました。ヒトESCの無制限の増殖が正常な核型を維持することが重要です。ヒトESC系統を単離する第2の方法は、初代性細胞の使用に基づいている。実験的研究により、12.5日齢のマウス胚の生殖器斑からEu細胞株を得ることができることが示されている。これらの場合、前駆細胞株の形成の頻度は、以前の胚を用いた実験よりも有意に低かった。同時に、13.5日の妊娠期間のマウス胚の生殖腺からの初代性細胞は、一般に線に変換することができない。ヒト多能性EG細胞の最初の安定株は、生殖器の原基5-9週齢の胚から単離された初代gonocytesに由来するものでした。単離された細胞は、胎仔血清を含むDMEM培地中で不活性化されたマウス胚線維芽細胞の基質上で培養されたメルカプトエタノール、フォルスコリン、ならびに組換えヒト成長因子(FGF及びLIF)を添加しました。7〜12日後、ヒトEG細胞に対応する形態学的特徴および分子マーカーに従って、多細胞コロニーが培養液に出現した。凝集後、これらの細胞は胚様体を形成し、3つ全ての胚葉の派生物に特徴的な特殊細胞が現れた。10〜20継代にわたって、EG細胞株は正常な核型を保持し、多能性を失わなかった。LIF、膜結合型および可溶性Steel因子ならびにTGF-bの併用効果は、初代生殖細胞の発生のためのプログラムを変更することも示されている。有糸分裂の分裂を止め、卵形成または精子形成に分化し始める代わりに、初代性細胞は増殖し続ける。いくつかのさらなる有糸分裂サイクルの後、それらは、胚盤葉細胞と同様になり、生殖細胞の前駆体の性質を失って、多能性胚性幹EG細胞に形質転換される。したがって、1998年に、初代性細胞の不死化株が、ヒト胎児剖検組織の性的基盤から最初に単離された。ヒト初代生殖細胞の胚は、開発の第3週で卵黄嚢に表示され、4-5th週間に、これらの細胞は、それらが主dormantnyeのgonocytesの集団を形成性的結節の面積、中に移行します。不活性状態では、初代生殖細胞は誕生まで芽に残る。一次胚細胞株は、定量的および定性的な増加細胞収率コラゲナーゼタイプIV-V、ヒアルロニダーゼおよびDNアーゼの混合物で処理された即席ファブリック取得胎児性器結節5-9週齢の胚から抽出しました。胎生生殖結節の組織における一次生殖細胞は、セルトリ間質(間葉系)細胞に取り囲まれている。セルトリ細胞の機能的な目的は、抗アポトーシス因子(Fasリガンド)、マイトジェン、および身体による免疫攻撃から性的幹細胞を保護する免疫抑制剤の製造です。生殖器結節の間質微小環境は、生殖体の成熟において重要な役割を果たす。単離された初代生殖細胞は、最初の3つの継代の胎児線維芽細胞からなるフィーダー間質層上の培養物中に植え付けられる。マイトジェンの最も有効な組み合わせは、LIF、FGFおよびフォルスコリン(cAMPの形成のための刺激剤)からなる複合体である。vitroでの増殖始原生殖細胞は、基板に球状、非接着細胞の形成を伴う培養クローンにおける主要再生gonocytesの存在下で、胎児血清の添加を必要とします。ESCの成功配分がうまく形成された内部細胞塊を用いて培養した胚盤胞は、(幹細胞場合に最も可能性が高い予備的な結論を作りましたNat。この観点から、ラインを作成するためのESCの最良のソースは、内部細胞塊の割り当ては慎重に栄養外胚葉を削除する必要がありますそれらの開発の人間の胚盤胞5日目、です。30-35細胞のこの段階で成る単離された内部細胞塊を培養ヒトES細胞におけるコロニー形成のための決定的な条件である基板マウス胚性線維芽細胞上で培養されなければなりません。興味深いのは、ESCの表現型特徴の種間比較分析である。それは人間のESCコロニーがあることが判明しました。ヒトESCでは、核プラズマ比の指標はマウスESKよりも低い。サルの胚性幹細胞は、不均一な縁を有するより平らな細胞コロニーを形成する。ESC霊長類の初期のクローンでは、単一の細胞が容易に見られる。ヒトES細胞を増殖性動物のすべての種は、MHCクラスIおよびIIを発現しません。1-60及びGCTM-2に対する陽性応答を与えます。ヒトES細胞での発現は、動物のOCT4遺伝子のすべての種類は、ヒトおよびマウスのESCにおける表現型の違いにもかかわらず、明らかに多能性(ペルー、2001)を維持する責任遺伝子の同じセットによって活性化され、ことを示唆しています。胚性ラット、ブタ、ウサギ、霊長類、および牛由来ESCラインは、同様の形態学的特徴を持っている、あなたは異種移植の問題で新鮮な表情を取ることを可能にする胚発生プログラムの実施のためのマーカーの分子同定とほぼ同一の分子メカニズムの同様のセット。インビボでの正常胚とは異なり、ヒトES細胞のインビトロ増殖が胚層の形成を伴わないと器官ことなく、すなわちホメオNohgenovの背景を、ブロックに進みます。セグメンテーション遺伝子は、タブ体節核のセグメンテーション、卵黄嚢の形成、尿膜provisoryおよび他の器官および組織のような期間の胚形成を再現することは不可能で培養ヒトES細胞では機能しないからです。培養ESCは、特殊細胞の350本の制限株の形成の初期に凍結された。したがって、クローン子会社前駆細胞と中央局在のPGCは、共通の前駆体からしかしながらのみモデルの異なる組織領域を一の段階で形成されている開発中の胚由来の特殊化した細胞とは異なるが、あります。構造の大部分をシミュレートするプロセスを実行する能力を保持します。そのような懸濁凝集体は、単純かつ複雑な胚様体と適宜称された。混合されたときに同時に初期遺伝子外胚葉(OCT3、FGF-5、節)、内胚葉(GATA-4)、中胚葉(ブラキュリ)、心原性中胚葉(PKH-2,5)、神経管(msx3で表さ胚様体の様々な細胞に分化)および造血(elkf)。vitroで胚葉細胞の形成を標的化するためのサイトカインおよび成長因子の種々の組み合わせを使用して。他の娘細胞は、前駆細胞の生成を生じるながらhESCのクローン増殖は、中心クローンにおけるESCの一方のみが非限定的な再生能力を保持する、非対称細胞分裂の証拠であり、分化は既に来ています。したがって、胚様体の周辺におけるクローンの増殖率は、中央よりも高い。成長クローンの周辺細胞は、自発的な無秩序な分化を受け、アポトーシスの機序によって遊走または死滅する。増殖率は、遊走およびアポトーシス細胞死の割合を超えた場合、これらのイベントは、クローンの運命を決定し、クローンのサイズが増加し続け、安定化は等しいアポトーシスおよび新しいセル速度、回帰の形成速度で起こります。前駆細胞は対称的に分裂する、すなわち、両方の娘細胞は成熟した特殊化細胞株にさらに分化する。/前駆細胞の比率は様々であるが、常にESCの量は前駆細胞集団のわずか1%に過ぎない。したがって、注意深いピペッティングとタイムリーなクローンの分離のみが、培養中のESCの数を増加させる可能性があります。ESCの最大収量を得るためには、最も効果的なのは、10〜12個の細胞の段階でクローンの解離であった。胚様体における細胞の方向および分化の程度は、それらの位置に依存する。頭頂そこから一次胚葉細胞に分化を受けます。胚様体の内部細胞はoct4遺伝子を発現し、48時間培養すると多分化能を保持する。培養の形態学的再編成が上皮単層において起こり、そして一次外胚葉の発達を制御する遺伝子の発現が始まる。その後、3つの胚芽シートのすべての派生物である様々な細胞型の出現を伴う完全な無秩序な細胞分化のプロセスを開始する。胚様体の細胞の自発的分化の過程において、卵黄嚢の断片(嚢胞)の形態の内胚葉マーカーを有する凝集体が最初に現れる。増殖する毛細血管の血管芽細胞および内皮細胞がこれらの構造に現れる。胚様体の内部の細胞の自発的分化の最終段階では、ニューロン、グリア要素、心筋細胞、マクロファージ及び赤血球を含む種々の分化細胞を、開発しています。特定の近似(胚組織を形成するシートの空間反転を考慮して)インビトロでの胚様体を介して形態形成のプロセスを探索し、胚細胞分化初期の分子メカニズムを分析し、これらのプロセスの実装における特定の遺伝子の役割を確立することができます。したがって、クローン内には、ESC、初期前駆細胞および分化前駆細胞集団など、異なる遺伝的発生プログラムが発見された細胞がある。フィーダー層を持たず、LIFを培地に添加しないで垂下する滴または質量培養の方法によるESCの培養は必然的に胚様体の形成を導く。胚様体の外層および内層の細胞の形態は異なる。外側の層は、大きなプロセスセルからなる。環境に面するそれらの表面は、多数の微絨毛で覆われている。細胞の外層は、Reichert膜に似ている内部基底膜から分離され、胚様体の内層の細胞は円筒状の上皮である。形態学的には、内層は、多くの分裂細胞を含むが、未分化ESCコロニーをより彷彿とさせる。vitroで、それは肝細胞の数百万人の形成が可能であるが、あなたは、このような副鼻腔、Disseとクッパー細胞のスペースなどの構造的および機能的要素を含む、肝臓の任意のセグメントを取得することはできません。ESCの多能性は、臍帯と胎盤は栄養膜を得ている一方で、胚の組織や器官を形成するために、胚発生に独占的に実現すると考えられています。機能的単位で仮と決定的な臓器の細胞と実質アセンブリの数を予め組み合わせたmRNAバルクNohteyaov地形行列、によって開発プログラムを実現provisory。同時に、ESCは、彼らのポテンシャルの実現の分子メカニズムは完全に自身が受容体認識とtranssignalizatsiiシステムの両方の閉塞に起因する他の細胞との相互作用の可能性を奪わ開発やESCO事業者の遺伝的プログラムから解離するのみ細胞型です。出産を終える段階的な展開の胚発生プログラムで十分な活性化のESCの結果が完全に形成され、細胞の十億で構成される生物の子宮外生活への準備ができています。したがって、現代の薬理ゲノミクスで別々疾患分子デバイス、および疾患細胞のプログラミングを検討しました。分化、増殖および器官のプログラムだけでなく、臓器や組織の再生の名前を矯正を目的とした新薬の大多数のアクション。他の臓器に移植された幹/前駆細胞の挙動を制御することが可能となります。基本的に、全能性プログラムは、他の卵母細胞のゲノムレベルで、受精卵と割球を立ち上げているが、これらの細胞はexperientalと実用的な医療の必要性のために必要な量のクローンを作成し、継代することはまだ不可能です。したがって、ESCは、原腸形成中の特殊な細胞株の胚とコードの三次元線形制限マップを含む遺伝情報のユニークな源です。それらのゲノムは、分化した体細胞の遺伝的装置とは対照的に、多能性を維持しているという事実に、回生ESCの事実上無限の可能性。ESCの遺伝情報に根ざした休眠状態の一つの症状は、いわゆる最小表現型です。特殊な細胞株および細胞の分化の制限の原因でハイバネーション遺伝子を背景に、わずか約30その製品周囲の微小環境との通信セルを提供する500個の遺伝子を活性化します。最後決定極めて低い受容体のmRNAの量、Gタンパク質、セカンドメッセンジャー、転写酵素で体細胞とESCのエネルギー代謝を調節する主要な機能ゲノムボックスの一般性は、発現および抑制を補因子ことを示しSAGE法の方法を使用してすなわち、細胞への調節シグナルの膜貫通トランスフェクションの系全体である。これは、トランスユニット化遺伝子の欠如または非常に低い発現に起因する。核ユニットのmessendzhernyh要素および信号伝送システムを転写酵素。同時に、全能性ゲノムのヒトES細胞を提供するkoingibitorovタンパク質のサイレンサーの合成に関与する遺伝子の発現と同様に、遺伝子発現を遮断しました。3つ全ての胚葉の細胞について遺伝的マーカーが見出された。GATA-4遺伝子発現における。生殖層は、発生中の胚における前駆細胞の移動の地形分析のために、それが容易になります。マーカーである組織プラスミノーゲン活性化因子、α-フェトプロテイン、ケラチン8、ケラチン19、の遺伝子発現の減少の間に開始することが特に見出されます。ESCのほとんどの不在で、それにもかかわらず、それらを識別するために使用できるいくつかの受容体分子を発現します。抗原がヒトでESCのマーカーであり、霊長類が一般的であったことは注目に値します。ほとんどの場合、抗原に対する抗体を標識した標識ヒトES細胞のために使用されるSSEA-3、SSEA-4(シアル酸と複合糖GL7を表すユニークな脂質抗原)、ならびに高分子糖タンパク質TRA-1-81、TRA-1-60をmembrannosvyazannym。ヒトES細胞は、特異的胚抗原SSEA-1および内因性アルカリホスファターゼ、ならびに特異的な転写因子であるOct4を発現します。4遺伝子発現の発現を活性化及び未熟細胞においてDNA畳語を非限定的に責任ボクシング安定します。重要な細胞内マーカータンパク質は、クロマチンサイレンサーのタンパク質に関連のOct3、Oct4の、のTcfとグルーチョ、です。初期段階で投与した場合、ステージESCの多能性能力の研究を開始しました。これは、桑実胚および胚盤胞のPGCにおける全ての体組織でさえ配偶子において検出におけるドナーのPGC子孫キメラ胚を形成することができることが示されました。このように、発生生物学において有意プロセスブックマーク一次組織および器官、それらの分化および胚器官を研究する可能性を増加させ、インビボおよびインビトロでの実験的研究の間ESCスクリプト「ブリッジ」を使用。vivoでESKは、初期胚の細胞塊に統合することが確立され、およびその誘導体は、すべての臓器や組織で発見されています。始原生殖細胞は、キメラ生殖細胞、完全な卵と精子を形成するの子孫の生殖系列にコロニーを形成します。単一のPGCは、OCT4遺伝子の発現とアルカリ性ホスファターゼ、高いテロメラーゼ活性、ならびに特異的胚抗原の発現を含む分子マーカーを有する細胞のコロニーと遺伝的に同一で作成することができます。層四割球をレシピエント及びドナーのPGCの外側に配置されている生物学的な構造を作成することによって、ヒトES細胞のキメラ化桑実胚の技術を用いて、胚発生のメカニズムを研究するために投与されます。したがって、栄養膜は、移植および胎盤形成を可能子孫四割球の受信者、および一次体および前駆配偶子の生存生殖細胞系から形成される内部細胞塊、として作用するドナーのPGCから形成されました。vitroでの操作が多能性を保持したときに、またあるそのキメラ胚のヒトES細胞始原生殖細胞の形成に関与する能力を保持しながら。遺伝的に改変されたPGCの唯一の子孫は、すべての一次および8細胞胚での細胞の凝集または共培養によって得られた織物キメラ胚を形成する細菌コロニーを形成することが示されています。緑色蛍光タンパク質の遺伝子でトランスフェクトされたマウスのESC桑実胚に移植した場合、細胞の蛍光子孫は、発達中の胚(島田、1999)の全ての検討組織で見出されました。桑実胚におけるESCの移植が可能なマウスを作成することができ、本体は子孫が治療クローニングのさまざまなオプションのための機会を切り開くESCを、寄付したのみで構成されています。このような方法論的なアプローチが正常に発生生物学の問題を研究するために適用されている、特に、それはX染色体またはヒトES細胞のエピジェネティックな不安定性の不活性化の遺伝的メカニズムを分析することができます。ESCの初期胚への移植は、遺伝子治療実験と同様に、農業におけるバイオテクノロジーにも使用されている。遺伝的に改変されたESCの移植物は、変異遺伝子の標的細胞を試験するために使用される。インビトロ培養ESCは、ノックアウトマウスを作製するためにバイオテクノロジーで使用される。この目的のために、相同組換えにより、ESCの研究遺伝子(ノックアウト)から除去し、選択培地は、この遺伝子を欠く細胞を分泌します。ノックアウトESCを胚盤胞に注入するか、または桑実胚の割球と凝集させる。このようにして得られたキメラ初期胚をレシピエント雌と配偶子、この遺伝子のnullizigotnymiと個人間で選択された新生児マウスに移植されています。この技術によれば、実験生物学および実験医学において広く使用されている多くの系統のノックアウトマウスが作製される。これらの生物学的モデルでは、胚発生における特定の遺伝子の値だけでなく、疾患およびヒトにおける病態のメカニズムにおける役割を調べました。遺伝子治療の新しい方法の前臨床試験段階において、ノックアウト動物の系統が使用される。変異遺伝子のESK正常な対立遺伝子における遺伝子トランスフェクションを使用して効果的に突然変異を修正し、管理、造血系に入射します。ESCのへの外来遺伝子の導入が急速にラインホモ接合トランスジェニック実験動物を作成することができます。技術的組換え遺伝子の欠失が、確実に、まだ比較的ESCマウスを働いたことに留意すべきです。マウスのESCを使用して二重ノックアウトは、染色体7(コピーゲノム領域19分間ヒト染色体)上の遺伝子の機能的役割領域クラスタ、および第11染色体の近位部分(ヒト5D染色体コピー)をインストールしESKマウスはヒトにおけるそれらの類似体の機能を評価することができた。カードESC奇形癌における遺伝子の最初の式を構成し、胚盤胞のマウスは、ESKのtranssignalizatsii遺伝子で圧倒的な抑制を確認しました。通常の着床前マウス胚の変異ESCの組み合わせ60-80と20-30細胞は、私たちは原腸形成や器官形成における未知の遺伝子の役割を決定することができます体がドナーとレシピエント細胞から構成されているブックマークしたキメラ胚の発生につながります。制限成熟における遺伝子の機能マップは、マウス胚に副腎や生殖器の原基における遺伝子SF-1タブの役割の拡大詳細、重量-1遺伝子を開発します赤血球形成およびリンパ球形成の原型。ベクトルリコンビナーゼを使用してヒトES細胞における遺伝子の母方と父方の対立遺伝子のオフ監督は、初期胚と技術が深刻な遺伝性疾患の開発を担当し、新たな変異遺伝子の発見に貢献したマウスのESCにおける人間の未知の遺伝子のターゲティング中に様々な遺伝子の機能を解明するのに役立っ。T及びBリンパ球のクローンのブックマーク(レーピン、2001)。ヒトES細胞における遺伝子の二重削除が実行可能な種間雑種胚を得る可能性与えられた胚層、セグメンテーションとホメオシスとESC移植の遺伝子の機能的役割の研究へのアクセスをオープンしました。単一8細胞胚におけるドナーのPGCの移植の改善された方法を用いてレシピエント胚の多くの臓器の細胞レベルでそのキメラ証明。セルもやしが胚盤胞にヒト造血幹細胞の投与後にヒト組織レシピエントマウスの臓器で発見されていることに注意してください。それは、多能性ヒトES細胞を循環血液体の形成中にそのマウス胚で発見されました。彼らの生物学的機能は、将来の胎児の免疫系の組織であることも可能です。運動失調、teleangektaziyuデュシェンヌ型筋ジストロフィー、シャットダウンATM遺伝子(制御信号合成キナーゼクロマチン)のマウスでダブルノックアウトモデルジストロフィン遺伝子:ESCとインビトロでヒト遺伝病の適切なモデルを再現しました。この場合、原因DNA修復の欠陥に子供の致命的な遺伝性疾患は、増殖細胞の死による胸腺の退縮を伴う小脳、中プルキンエ細胞の変性を開発しています。taziiは、ヒトにおけるものに対応します。PGCおよびノックアウトマウスを使用して、運動失調、teleangektaziiが著しく関連疾患を治療するための新規な方法の前臨床試験のための実験薬の可能性を増加させた実験モデル、炭水化物および脂質代謝の障害に関連するいくつかの遺伝ホモ接合性のヒト疾患、アミノ酸の異化、銅およびビリルビンの除去を開発しました権利。[20]幹細胞ハイブリッドの使用ヒトES細胞から体細胞を融合することにより得られたハイブリッド細胞は、幹細胞の多能性および分化細胞の染色体の再プログラミングを研究するための適切かつ有望なモデルです。Tsitogibridy成体動物の分化細胞とESCの合併によって得られた、異なる「年齢」のゲノムとの間の関係を研究する機会を提供する:相同染色体が分化の様々な段階の細胞に由来する独特の状況を開発し、成熟の度合いを変化させ、同じ核、のどこにいる彼らは簡単にできますtransdeystvuyuschimiは調節シグナルを共有しています。胚関連ゲノムから衝撃transdeystvuyuschih信号に応答してdividual開発、また、ハイブリッド細胞に別個の染色体レベルでのゲノムの相互作用を研究することを可能にする親の染色体の分離が起こる、すなわち、潜在的多能性の維持に特定の染色体の一部を識別し、又は逆に、差別化の出力。異なる「開発の歴史」のゲノムの相互作用を研究するための最初の実験モデルとしてtsitogibridy使用teratokartsinomnyh多能性と分化した体細胞をマージしました。場合によっては、そのようなハイブリッド細胞は、多能性を十分に高いレベルで保持した。体細胞ハイブリッド細胞は、3つ全ての胚シートの誘導体を含有する真の奇形腫の発生を誘導し、懸濁培養においてインビトロ胚様体が形成された。このタイプの種間の細胞質内でも、奇形癌細胞との体細胞パートナーがリンパ球または胸腺細胞を有する場合には、胚性抗原が注目された。奇形癌細胞と線維芽細胞との融合によって形成された細胞ハイブリッドは、表現型に従って線維芽細胞に対応することは注目に値する。重要なのは、インteratokartsinomno体細胞ハイブリッド細胞は、個々の遺伝子または不活性X染色体体パートナーの再活性化によって特徴付けられる分化細胞の徴候ゲノム再プログラミングを、出現していることが確立事実です。このように、型tsitogibridahのteratokartsinomno-体細胞の研究の結果は、ハイブリッド細胞は、しばしばゲノムの多能性および再プログラミングを保持し、身体的パートナーの兆候があることを示しています。実験では、マウスのESCの成体動物で脾細胞を融合することによって、胚種内雑種細胞を得るために親の染色体の特性ようtsitogibridov、分離分析を研究し、多能性ハイブリッドゲノムを評価しました。体細胞との融合奇形癌細胞によって産生さ間雑種細胞については、一般的に四倍体または近四倍体核型を有する染色体の低い分離によって特徴付け。初代性細胞とリンパ球との融合により、同様の染色体組成が細胞ハイブリッドで観察された。同時に、マウスのリンパ球細胞teratokartsinomnyhミンクの合併の結果として得られる種間雑種細胞は、染色体の強烈な分離体細胞パートナーがありました。各マウス染色体を確実ハイブリッド細胞における相同染色体の任意の対の間を識別できるように、数百のマーカーを発見することにより雑種における親の染色体の分離の研究における質的に新しいステージは、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して、マイクロサテライト分析法の開発の後に来ました。Cは、形態学的にハイブリッドクローンのセットを受信することができなかったヒトES細胞に類似していました。全てのクローンは、成長のみアクティブセルgipoksantinfosforiboziltransferazoyで可能である、選択培地上で単離しました。使用して、4つの染色体の3個のハイブリッドクローンokolodiploidnyセットを持っていたことが判明しました。一近四倍体クローンは、二つの四倍体であった一方がハイブリッド細胞の集団、および第二の、より小さなを含有していました。発生したことを示しました。01Aを持っていました。例外は、染色体1であり、I:HM-1細胞を、マーカー本体パートナーの少数のマーカーと一緒にクローンHESS2とHESS3、。これらの結果は、染色体1および体パートナーの不完全な分離を反映し、その30~40%HESS2とHESS3細胞クローンで起こる染色体のトリソミー細胞遺伝学的データと一致していることができます。15、16、18及び19は、両方の親のホモログを提示しました。1:マイクロサテライトマーカーの量比は、これらの相同染色体は、約1対応しました。これは、著者が1つのホモログは、ESCや他のゲノムに由来することを示唆することができました。クローンHESS4のいくつかのサブクローンでは、染色体18と19体細胞パートナーのトークンのみ存在することを観察しました。結果は、染色体体細胞パートナーの分離に加えて、1以上の染色体の多能性ゲノムの両方の同族体の排除があった、すなわち、両方の親の染色体の両面分離があった細胞がHESS4のクローンを作成することを示しています両親のひとり。20日経過後、ハイブリッド細胞の全てのクローンは、クローンにおいて体パートナーのX染色体上のX染色体ESCを置換した、つまり、体パートナーの唯一のX染色体マーカーを含みます。situハイブリダイゼーションデータによって確認される:陽性シグナルが1つの染色体上でのみ検出された。培養初期段階(第15継代まで)では、細胞遺伝学的データによれば、多くの細胞において2つのX染色体が存在したことに留意すべきである。結果的に、選択培地の使用により、ハイブリッド細胞の染色体組成を操作し、ESCゲノムのバックグラウンドに対して体細胞パートナーの単一染色体を有するクローンを選択的に標的化することが可能になる。ゲノムtsitogibridovのユニークな特徴は、シングルコアでの親のゲノムの局在であるため、当然のことながら、分化した細胞のゲノムに密着の条件で多能性胚ゲノムESC-体細胞ハイブリッドの特性を維持する問題を提起します。形態学的には、ESCおよび体細胞の細胞ハイブリッドは、ESCの親系統に似ていた。資格の多能性は、存在する3つの胚葉の誘導体で胚様体の懸濁培養を中に形成することができた全てのクローンは、染色体のセットokolodiploidnymことを示しました。ほとんどのハイブリッド細胞は、初期のマウス胚の特徴であるマーカーであるECMA-7抗原を含み、またアルカリホスファターゼの高い活性を有していた。ハイブリッド細胞の高い多能性特性に関する最も説得力のあるデータが、クローンHESS2のハイブリッド細胞を含む一連の注入キメラを得るための実験で得られた。生化学的マーカーの分析は、ドナーハイブリッド細胞の子孫がほとんどのキメラ組織において見出されたことを示した。その結果、ESCと体細胞分化細胞との融合によって得られるハイブリッド細胞は、胚盤胞腔に挿入されたときにキメラを形成する能力を含む、高レベルで多分化能を保持する。クローンHESS2およびHESS4は、親染色体の組成において著しく異なるが、それらは同様の多能性を有していた。雑種ゲノムの多能性が支配的な特徴として現れると信じることができるが、胚ゲノムのすべての染色体が多分化能を維持する過程に関与しているわけではない可能性がある。この仮定が正しいとすれば、ハイブリドーマゲノムからの多能性パートナーのいくつかの染色体の排除は、それらの多能性状態の変化を伴わないことを期待することができる。この場合、胚ハイブリッド細胞における親染色体の分離の分析は、胚細胞の多分化能制御に関与する染色体の同定に近いアプローチを可能にするであろう。01Aを有するであろうものの交配から得られた50の子孫の中に見出され、X染色体DDマウスを運びます。著者らは、体細胞ゲノムの影響下でのハイブリッド細胞の多能性の低下におけるこの理由を見いだす。別の説明は、常染色体及び性染色体の一部不均衡のためのトリソミーの負の影響かもしれない減数分裂の通路でハイブリッド細胞(XXYは15継代までの細胞で観察されました)。XXYの細胞は減数分裂を通過して配偶子を形成することができないことが知られている。トリソミーはまた、ハイブリッド細胞の増殖活性の低下を引き起こすことができ、その結果、キメラの発生における選択的利点は、レシピエント胚の細胞に属することができる。従って、ハイブリッド細胞の多能性の可能性を適切に評価するためには、正常な二倍体染色体セットを有するハイブリッドクローンを得ることが必要である。O.ら(2001)は最初体細胞ハイブリッド細胞のゲノム中X染色体を再プログラミングの可能性を実証しました。cマウスを、キメラ分析した全ての組織において検出された変異体です。非選択の条件に該当tsitogibridy胚盤胞のキャビティ内のハイブリッド細胞の導入とハイブリッド細胞のゲノム中のX染色体の保存後、そのゲノムの必須の構成要素となっているとY染色体多能性パートナーからそれを区別しないことを意味していることを強調しなければなりません。著者らは、ハイブリッド胚細胞における体細胞性および多能性ゲノムの相互作用の分析結果を要約すると、いくつかのサイトハイブリッドにおいて、多能性はそれ自体が支配的な形質として現れると結論付けている。ハイブリッドゲノムは、分化細胞の個々の染色体を再プログラムすることができるが、体細胞ゲノムが胚ゲノムの多分化能に及ぼす逆効果の可能性を排除するものではない。NM-1の元の親系統よりもずっと頻繁に起こる。一次コロニーの形成においても同様の効果が観察される:胚ハイブリッド細胞の多くの一次コロニーは、選択および増殖中にクローンの大きな損失を伴って形成の初期段階で分化する。したがって、分化細胞のゲノムとの密接な接触にもかかわらず、体細胞とのESCの融合によって作製されたサイトカイブリッドは、胚ゲノムの独特な特性として多分化能を保存する。そのようなハイブリッド細胞では、拡散した細胞に由来する個々の染色体を再プログラムすることが可能である。ハイブリッド細胞における胚性ゲノムの多能性、特にキメラにおける胚経路の形成に関与する能力は、いかに完全には依然として不明である。このためには、正常な核型を有する胚ハイブリッド細胞を得ることが必要である。いずれの場合においても、多能性胚性ハイブリッド細胞は、多能性または親染色体の両側分離は、潜在的にそのような機会を提供するなど、彼女の制御の維持に関与する染色体の遺伝子を同定するための実際のモデルとすることができます。Serovと共著者(2001)が「染色体記憶」と定義しているこの現象の研究はあまり魅力的ではない。ホモログ多能パートナーに対し、このプロセスは始まったばかりである、同族体細胞パートナー一度受け分化:ハイブリッドゲノム中の相同染色体が2つの代替構成をしています。したがって、ハイブリッド細胞の高い多能性を維持することは、その「多能性」構成ホモログESCは、体パートナーから発するtransdeystvuyuschih要因の影響にもかかわらず、ハイブリッドゲノムにおいてかなり安定示します。vitroでの形成とtsitogibridov培養の最初の段階は、それらがインビボでの分化の間に取得されたその状態を維持する可能性を排除するものではありません。vitro培養後ホモログを判別します。このように、胚ハイブリッド細胞は、基本的な多能性胚性ゲノムの性質だけでなく、その選択肢のない唯一の研究のための有望な実験モデルを表します。胚性幹細胞移植の治療効果ESC移植およびその派生物の治療効果を分析する前に、上記の材料を要約する。ESCをインビトロで胚の完全な実装の観点備え起因自律的かつ独立したhESCから体内で起こる間葉系幹細胞の非存在下にあるため、この場合の欠陥は不十分です。プログラムが全面的に実施されている唯一の細胞であるESCの独自の生物学的潜在性は、遺伝子の機能に関する研究に応用されています。ESKを使用すると、三の胚葉の開発のためのコード、初期および後期遺伝子の発現を活性化する第一の信号の組合せをデコード行わ。vitroでのESCのゲノム多能性を維持することが、それらを自動的臓器や組織損傷を受けた細胞の損失を補償することができるの修復再生のためのユニークなツールになります。理想的な仮想的な実施形態では、効果的な形態学的として、レシピエントの体内に統合...「...レシピエント生物におけるドナーのPGCの移植に有利な条件の下でできる新しいtkani'7の建設で実現されているコンパクトにパッケージ化されたプログラムを転送している」と仮定することができます機能性と機能性の両方を備えています。ESCの単分化法の開発に続いて、単一の特殊クローンからインビトロで得られた細胞の機能的活性のインビボ研究が開始された。増殖するESOクローンは、再生プラスチック医薬品に使用されるレシピエントの組織損傷ゾーンに実際に積極的に統合可能な遊走前駆細胞の集団を生成する。ニューロンの移植は、実験的ヘミパーキンソン症候群における臨床症状を減少させることが確立されている。ドナー神経幹細胞の局所移植は、脊髄および脳の外傷または挫傷によって引き起こされる運動障害の程度を低下させる。脱髄疾患における幹細胞移植の最初の肯定的結果を受けた。ESCの再生塑性潜在力は、実用的な医療において細胞移植を使用するための無限の可能性を開くようである。異所性領域に移植する場合、必然的に腫瘍に変化する。免疫不全マウスの奇形腫におけるESCの皮下注射が形成される場合。ESK懸濁液を同系マウスの精巣の莢膜の下に移植すると、奇形腫も形成され、異なる組織からなり、その細胞は3つの胚葉すべてに由来する。このような奇形腫においては、器官形成の減少過程は極めてまれである。いくつかの研究は、ESCOの早期派生物の実験的な病理を有する動物への移植の肯定的結果に関する情報を提供する。多発性硬化症(レーピン、2001)の治療における機能障害の補正の最初の臨床試験で開発されています。vitroでの技術neyronogenezaのESCの出現、代わりの胚性神経組織の培養物から得たニューロスフェアの誘導体を、開発した胚の脳組織の移植技術を使用して。そのような移植懸濁液ははるかに均質であり、コミットされたニューロンおよび神経膠前駆体を含有する。mlの用量でのレチノイン酸との定期的な培養培地に加え(奇形腫)有糸分裂後のニューロンの80%の上に形成されNTERA-2ヒト-kartsinomy。ニューロン集団の完全な均質性は残党teratokartsinomnyhと未熟細胞を取り除くことができ、成熟したニューロンのラベルされた免疫表現マーカーをフローソーティングすることにより達成されます。実験動物などの神経細胞の脳の異なる領域における移植後存続するだけでなく、地域のニューラルネットワークに埋め込まれていないだけです。多糖類の疾患堆積の効果としてヒト病態の臨床症状を減少させます。中枢神経系の変性疾患における再生プロセスを最適化するために、ESKからのミエリン産生希突起膠細胞の調製技術が開発されている。第1段階は、伝統的に、移植に必要な細胞数の倍数でESCの増殖を伴う。集団への細胞の指向性分化が行われる。いくつかの見通しは、胸腺の成熟に遺伝的欠陥に起因する免疫不全を補正するための方法を開発するために使用デリバティブESCのために開かれています。違反組換え機構V(D)J遺伝子座TCR、Tリンパ球の機能の損失につながる、胸腺動物中のPGCの移植早期誘導体の責任免疫クローンの正常集団の成熟を回復します細胞性免疫。vitroヒトES細胞に予め形成されました。幹細胞移植の迅速な導入は、ヒト胚性幹細胞の限られた数の安定した系統およびそれらの標準化の必要性によって正当化される。成体幹細胞と同様に標準化されたESC系統の純度を高めるために、DNAの短いタンデムリピートの分子遺伝学的解析に基づく線選択法が提案されている。小さな染色体再編成および遺伝子突然変異の存在についてESC系統を試験することも必要であり、細胞培養条件下でそれらが発生する可能性が十分に高い。インビトロでのそれらの複製は、胚または最終組織の幹細胞に内在しない新しい特性の出現を導き得るので、あらゆるタイプのESCおよび多能性幹細胞の特性の強制試験に関する論文が進められている。サイトカイン培地中での長期間の培養は、細胞分裂を無制限に行う能力を獲得することによって細胞周期の調節の方法における同様の変化が起こるので、ESK系を腫瘍細胞に近づけることが許容される。いくつかの著者は、腫瘍の発生の可能性に基づいて、胚性幹細胞の初期誘導体のヒト移植を無謀と考えている。彼らの意見では、ESCのコミットされた子孫、すなわち分化した細胞の祖先の系統を使用する方がはるかに安全です。正しい方向に分化する安定したヒト細胞株を得るための信頼できる技術はまだ開発されていない。したがって、文献には、ヒト胚性幹細胞誘導体の移植の陽性治療効果に関するデータがますます多くなっている。これらの作品の多くは改訂と批判の対象となっている。一部の研究者は、初期の臨床試験の結果は本質的に暫定的であり、幹細胞が疾患の臨床経過に有益な効果をもたらすことを示唆していると考えている。したがって、細胞移植の長期間の結果に関するデータを取得する必要があります。議論として、臨床的神経移植の発達段階が示されている。実際、文献に、最初はパーキンソン病における胚の脳移植片の高効率化の出版によって支配が、その後、患者の脳に移植胚または胎児の神経組織の治療効果を否定したレポートを表示されるようになりました。NTERA-2奇形癌の誘導体を、培養で増殖未熟細胞は、ストレージ100万細胞塊に供しました。このようにして得られた細胞の一部は、細胞表現型および不純物の特性を決定するために、ならびにウイルスおよび細菌による汚染の可能性を試験するために使用しました。培養培地からLIF及びサイトカインおよび成長因子の組み合わせで神経芽細胞へのhESCの有向分化のための条件を作成した間質細胞および胎児のフィーダー層を除去しました。フローケージソーター上の未成熟奇形癌細胞から神経芽細胞を精製した。移植細胞の神経芽細胞の表現型の第二の精製および特徴付け後(10-12万円)特別なシリンジおよびmicrocannulas定位及びCTの制御下を用いて懸濁液を患者の脳(出血性脳卒中後の第七の月)の基底核に注入しました。ストロークゾーンにおける神経細胞の移植の効果をスクリーニングOdnogodovoy移植後には有害と不要な効果がないことを明らかにしました。患者の半分は、移植後6ヶ月から12ヶ月の間に運動機能の改善を経験した。係るポジトロン放出断層撮影は18%に達し、一部の患者では、蛍光標識した2-デオキシグルコースの平均吸収の増加は正の臨床変化は、細胞の移植後の血液供給ストロークゾーンの増加を伴いました。パーキンソニズム患者の神経移植の臨床的有効性について独立して研究した。第1群の患者にドーパミンを産生する胚神経組織を移植し、第2群の患者には誤操作を施した。この結果は、ドーパミン産生胚ニューロンがレシピエントの脳内で生存したにもかかわらず、そのような神経移植の臨床的有効性がゼロであることを示している。患者の15%で胎児の神経組織の移植後2年間は、プラセボ群の患者には存在しない持続的な運動障害、開発後(幹細胞:健康米国の科学の進歩と今後の研究の方向性ナット研を、...)。これらの患者における疾患のさらなる発達の観察が続く。一部の著者は、患者グループ、彼らの状態を評価するための客観的な方法の不適切な選択肢の選択に異なるアプローチで臨床的有効性の神経移植データの評価に関する矛盾した文献を属性と、最も重要なのは、胎児の神経組織の織物は、異なるサイズで生産された脳のさまざまな部分で、開発の異なる用語手術の移植および方法論的特徴を含む。実験的な身体gemiparkinsonizmomラットの脳の線条体部位に多能性胚性幹細胞の移植を指示しようとESCの増殖およびドーパミン作動性ニューロンへの分化を伴うことに留意すべきです。移植後のESCは、アポモルヒネ試験で挙動および運動非対称性の異常の補正を観察されたように、新たに形成されたニューロンは効果的に神経ネットワークに組み込まれているものとしなければなりません。同時に、脳腫瘍に移植されたESKの形質転換のためにいくつかの動物が死亡した。Press、幹細胞および将来の研究方向性、Nat。この観点から、含まによる移植初期胚に開発した奇形腫、と精巣スラリーのPGCに移植することにより得られた実験テラトーマの比較組織学的分析はまた、本ESCが示されたことは重要であるESKかかわらず、それらの起源又は相互作用のそれらの細胞または他の周囲の細胞によって、それらの腫瘍形成能を実現する。それが発生する可能性があり、腫瘍のESCからのような奇形腫は、3つのすべての胚葉(.Rega、2001)の誘導体からなる、クローン起源を持っていることを証明しました。免疫不全マウスに移植した場合には、正常な核型および分化した体細胞の様々なタイプのからなる形成された奇形腫でのPGCクローニングことは注目に値します。これらの実験データは、奇形のクローン起源の完全な証拠である。コンポーネントのソースであることを示唆しています。法外でない場合は、これらの研究の実用的な細胞移植の結果がある中で、その後、接種ESCまたは成人免疫不全マウスの異なる組織における始原生殖細胞から潜在的な危険の警告サインは、必然的に移植された幹細胞から腫瘍の発生の原因となります。部分的差別によっては確かにESCのと前駆クローン専用回線です。興味深いことに、ESCを奇形癌細胞の隣の骨格筋に移植すると、ニューロンが形成されることが最も多い。投与したPGCにメイスの卵や胚盤胞は、腫瘍細胞を形成することなく、生殖細胞での完全な統合を伴います。この場合、ESCは性的基盤を含む事実上すべての臓器および組織に組み込まれる。このようなアロフェニクス動物は、奇形癌129の細胞を8〜100細胞の段階で初期胚に導入することによって最初に得られた。allofennyhマウスの集団では、それはあなたが実験でも、種間の細胞キメラを作成することができます。小腸allofennogo胚の割合が高い、初期胚の時に小さいです。:成体生物の組織受け入れキメラは、レシピエントgistogematicalkie障壁の免疫系への曝露から保護します。生成ドナー始原生殖細胞と胚盤胞形成キメラ原基生殖器へのESCの移植は発生しません。特別な条件を作成およびクローニングのために使用することができるESCの多能性:8-16セルマウス胚、tsitokalazinomが遮断前記細胞の有糸分裂をESC移植マウスは、胚ドナーのPGCの開発と正常胚発生に寄与する。したがって、別のは、次に遺伝的に同一のドナーのPGC体細胞核のラインを割り当てられた胚盤胞から内部細胞塊を作成するために、除核卵母細胞への体細胞核移植に基づく同種ESC治療的クローニングの移植です。Munsie、2000)。)のためのラインにそれらを通過します。そのようなESCにおける相同組換えにより、1つの対立遺伝子の突然変異が修正された。注射したマウスにおいて増殖した後、その、トランスフェクトされた細胞を調製した回収。第2シリーズでは、四倍体割球を遺伝子組み換えESCと凝集させ、それらの雌レシピエントに移植した。生まれた免疫担当マウスは、突然変異マウスrag2〜/〜に移植するための骨髄ドナーとして役立った。3-4週間、通常の成熟骨髄性とリンパ系細胞の全てのマウスにおいて、免疫グロブリンを産生することができることが見出された:両方のシリーズでは、結果が陽性でした。したがって、体細胞の卵母細胞の核への移植だけでなく、tsitogenoterapiiためのhESC株を生成するだけでなく、使用することができます。細胞移植のこの方向では、生命倫理上の問題以外にも限界があります。体細胞の核を移植する場合でも、唯一の百分の15から25は、胚盤胞期に発達「受精卵を」操作のに対し、正常なヒトの卵は、アクセスできないオブジェクトのまま。多能性クローンESCの単一系統を得るためにどれだけの胚盤胞が必要であるかは決定されていない。治療クローニング方法論の複雑さに関連する高いレベルの財務費用に留意すべきである。^細胞周期相と組み合わされる低メチル化。文化の中でのPGCのクローン成長は、彼らが停止線の増殖で生物のいずれかの特殊な細胞に分化し、適切な規制の信号を加算妨げるものではありません。インビトロ体細胞におけるラインにおけるhESCの制限分化はNohteyaovをバイパスし、間充織の参加なしで実現され、器官形成および胚の形成なしです。インビボでのESCの異所的投与は必然的に奇形癌の形成につながる。胚の組織とその安定したキメラ化団体との統合を伴う胚盤胞または初期胚へのESC移植。実用的な医学の他の多くの分野のメンバーの利益の交点です。重要な実験結果は、成長因子と細胞分化プロセスを制御するための展望を開くそれらの特性の変化の方向と幹細胞を再プログラミングの可能性を証明します。医療現場で広く導入移植誘導体ESCは、疾患の実験モデルでのPGCをより詳細にヒト幹細胞の性質およびさらなる実験を調査する必要があります。生命倫理の問題と同種細胞移植の拒絶反応の問題は、地域の成体幹細胞のゲノムの観測された可塑性を解決することができます。初期情報を単離し、徹底的に肝小葉の中に取り入れた新しい肝細胞が存在しているうち自家造血細胞を、特徴肝臓を移植する際に、今検討し、批判されていることです。胸腺における神経幹細胞の移植はドナーの骨髄細胞および赤血球生成を持続ドナーT-およびBリンパ球の新芽の形成され、骨髄中の脳の神経幹細胞を移植する造血胚の形成につながるというデータを発表。その結果、成人の臓器で容量にESCのゲノム再プログラミングが可能な多能性幹細胞を保存することができます。新たな交差点の必然性を事前に定めている。ESCの発見は、生きている細胞と物質と物質と人格との間の線がどこにあるかに関する厳しい議論の再開に強力な刺激を与えた。同時に、医学におけるESCの使用に関する普遍的な規範、規則、法律は存在しません。法律上の各州は、この問題を単独で解決します。そのために、世界中の医師は、主に非胚性幹細胞と成体生物の幹細胞埋蔵量の使用を通じて、このような議論を超えて再生医療用医薬品の開発を続けています。TER-SVは発生から単離された、および奇形腫から、ektopichno源は細胞または胚組織を移植しました。多能性であり、したがってterato-得られた安定なマウス系統(胚)-kartsinomnyhいくつかのセルのうち、他のものは、ただ1つの特定の型の細胞に分化に供し、そしていくつかは細胞分化の一般的に不可能でした。時、フォーカスが-kartsinomnyhインビトロで遺伝的に改変さterato-(胚)を作成することが可能と戻りterato-(胚に)-kartsinomnyh現像胚組織におけるそれらの導入後に正常な表現型への細胞、ならびに作業を示した研究でしたヒトの遺伝病理学の生物学的モデリングのために突然変異体マウスが得られた。Terato-線(胚)を単離するために、細胞懸濁培養-kartsinomnyh空調に使用されています。細胞-kartsinomnye培養terato-(胚)において、ESCのように、胚様体を形成するために成長し、胚線維芽細胞または馴化培地中の懸濁培養のフィーダー層上で多能性を維持解離結合線に変換することを必要とします。大きい、球状癌線は、アルカリホスファターゼ、フォーム凝集体の高い活性を有し、多方向分化が可能です。胚盤胞に導入された場合誘導体terato-(胚)-kartsinomnyh細胞に見出される様々な器官及び組織において、キメラ胚の形成をもたらす、桑実胚と凝集されています。このようなキメラ胚の大半は、子宮内で死亡し、臓器にキメラを生き残った新生児外来細胞をめったに低密度で検出されません。悪性腫脹および腺腫膵臓の他のタイプの)急激に増加、及び腫瘍性変性の発症率は、多くの場合でも子宮キメラ胚において起こります。癌腫細胞は、ほとんど自然に悪性新生物特性を獲得する。おける癌原遺伝子の活性化に起因すると考えられている。SV-TER)に由来SST3、奇形腫をembriokartsinomnoyあります。癌腫細胞株の誘導体は、実質的に初代のゴン球の形成に関与しない。明らかに、これは、細胞が異数性または染色体異常として観察された最もterato-(胚)-kartsinomnyh線に共通染色体異常の高頻度で接続されています。いくつかの安定terato-線-kartsinomnyhヒト細胞は、実験室条件下で調製した(胚)は、多能性、高い増殖活性及び増殖中の培養に分化する能力を特徴とします。terato-ライン(胚)は、神経細胞分化のメカニズムを研究するために使用ホロノミックNTERA-2ヒト細胞-kartsi-。移植後、新生児ラットの前脳の脳室下域におけるこの行のセルとその移行がneyronogenez観察されました。著者によれば、疾患の臨床的改善につながる、脳卒中を有する患者に、-kartsinomnoy線NTERA-2細胞(胚)を培養することによって得られた神経terato-を移植する試みがなされてきました。脳卒中患者に移植された細胞(胚)terato-この場合悪性-kartsinomnoy線NTERA-2で言及されています。最初の系統を受け取り、それらを胚盤胞の内部細胞塊から単離した。V)の発生に注意を引いたことリロイスティーブンスに属します。vが専門体ラインの多様に分化し得る細胞の1%未満を含有することが見出され、それ自体(組成腹水、製品は、成熟細胞又は組織の培養物に添加しました)。確認した:成体マウス組織における着床前胚細胞embryoblast懸濁液が奇形を形成し、レシピエント動物に腹腔内投与は、ニューロン、心筋細胞および他の体kletkiに分化した後、そこから純粋な細胞株を分離3つ全ての胚葉の誘導体。vivo移植ESK(embryoblastから得られた栄養膜ではない)での実験ではもやしドナー組織を検出する器官におけるキメラ動物(非腫瘍形成)の出産を終えました。性細胞株でもキメラ現象が認められた。機能的特徴から単離されました。胚盤胞へのhESCの投与後に生まれたキメラにおいて、allofenny臓器形態形成は、肝臓、肺および腎臓の交互のドナーとレシピエントモザイク構造的および機能的単位を特徴とします。多くの場合、レシピエント細胞とドナー細胞とを同時に含む肝臓の腸陰窩又は小葉の形成が観察された。形態形成の実現は、レシピエントが属する種の遺伝子プログラムに従って常に行われ、キメラリズムは細胞レベルのみに限定された。(胎児線維芽細胞)上の細胞分化なしのhESCの増殖が、LIFを選択的に幹細胞および前駆細胞の唯一の生存を提供する選択的栄養培地での結合の存在下で起こることがわかりました。ジェームズ・トムソンによって1998年にこれらの技術の助けを借りて胚盤胞の人の内部細胞塊から胚性幹細胞の不死化5行を割り当てられました。その同じ年、ジョン・ゲルハルトは四から五週間のヒト胚の性的パフから不滅ESCラインを単離する方法を開発しました。そのユニークな特性のために、わずか2年後の胚性幹細胞と決定的な組織が再生医療や遺伝子治療の実際に使用され始めている幹細胞。知っておくことが重要です!局所幹細胞のうち、間葉系幹細胞(MSC)は特別な場所を占め、その誘導体は人体のすべての臓器および組織の間質基質を構成する。Enterを押します。