存在する生理活性物質が生体に悪影響を及ぼすことは周知の事実である。細菌現存量を評価し対策を講じる必要がある。現在の細菌学の基盤技術として成り立っている。環境中に生息する細菌の殆どは通常の培養法では検出が困難であることがわかってきた。形成せず、これらは細菌が存在しないものとして考えられてきたことになる。Technology(PAT)として国際的にも注目を集めている。透析治療においては、細菌の現存量をより正確に知る必要があり、リスク管理の面からもリアルタイムに結果を評価できることが望ましい。「生理活性をもつ細菌」として計測する方法である。蛍光染色剤にて細菌を染色し、蛍光顕微鏡下で直接計測する。蛍光波長の異なる蛍光染色剤を組み合わせることによって二重染色も可能である。全菌数は核酸と特異的に結合する試薬である4',6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)を用いて計測できる。DAPIは紫外線によって励起され生きている菌と死んでいる菌の双方が青色に蛍光発色する。用いることにより細菌に大量に存在するエステラーゼを指標として生菌を計測できる。なり細胞内に蓄積される。これにより、エステラーゼ活性を有する細菌として検出できる。増殖能力を有する細菌の計測にはマイクロコロニー法が有効である。細菌が確認されるまでおよそ一週間を要し、1個の細菌が10万個近くにまで増殖するのを待つ必要があった。マイクロコロニー法では、目視可能となるまで増殖できなかった細菌も含め12〜48時間以内に増殖能力を有する細菌の検出が可能である。Fig.1は培養法・非培養法を示している。Fig.2にように寒天培地に試料をいれ細菌の有無をcolonyとして捉える手法は培養法である。この手法では細菌に増殖能力があることで「生理活性をもつ細菌」として検出する最も一般的な手法である。非培養法である蛍光染色法を用いると、培養を行わずして細菌を検出することができる。この場合は細菌の特徴を蛍光染色試薬にて標識し蛍光顕微鏡下で直接計数することになる。Fig.3は大腸菌をDAPIにより蛍光染色し、蛍光顕微鏡で覗いた画像である。これらの画像を数十視野計測し、メンブレンフィルターの全面積に換算して細菌数を計測する。units)ではなく、個(cells)となる。細菌の特徴を試薬により染め分けることが可能であり、細菌のさまざまな情報を知ることができる。)加えて、細菌の計測作業には技術と熟練を要すことからこれらの作業を自動化した装置も開発されている(Fig.4)。細菌の迅速検出と動態解析に取り組んでいる。これらの手法が手軽に行えるよう自動化された装置の評価にも取り組んでいる。