content当サイトは、ブラウザのJavaScript設定を有効にしてご覧ください。分解のための印をつけられた細胞構成成分が二重膜によって隔てられ、オートファゴソームと呼ばれるユニークな小胞が形成されます1。オートファゴソーム小胞は、リソソームと融合し、リソソーム加水分解酵素による分解のためにその内容物を輸送します。マイトファジーは、オートファジーによるミトコンドリアの選択的分解です3。このプロセスでは、しばしば細胞の損傷やストレスを受けて変性したミトコンドリアが除去されます。最近では、オートファジーはパーキンソン病などの神経変性疾患と関連付けられています。パーキンソン病の発症機序の一部は、オートファジーの調節異常および変性ミトコンドリアの正常な再生サイクルの崩壊の結果として、神経細胞の細胞死を伴います。機能喪失など、本疾病に関係しているいくつかの遺伝子の変異により、損傷したミトコンドリアおよびタンパク質凝集物の蓄積が引き起こされ、細胞の変性が促進されます。オートファジーの調節異常は、様々な神経変性疾患およびガンに関与していることが実証されてきているため、このプロセスの様々なステージを標的にした新規治療薬の発見は、薬物療法のための有望で新しいアプローチとして姿を現しています。Nanoシステムの効率を評価しました。アッセイ開発のためのモデルとして、PC12ヒト神経芽細胞腫株を使用しました。cells/wellで384ウェルプレートに播種し、48時間培養しました。オートファジーに対する影響を評価するために、細胞を様々な化合物で24~48時間処理しました。Nanoシステムを使用して取得しました。1ウェル当たり1画像を20倍の倍率で取得し、さらに統計的に良好な結果を確保するために、1ウェル当たり2~4画像を40倍の倍率で取得しました。ソフトウェアのGranularityアプリケーションモジュールを使用して解析しました。核マーカーを使用して細胞をセグメント化する一方、粒度アルゴリズムにより細胞質中のオートファゴソーム、リソソーム、ミトコンドリアといった小さな対象物を検出し、特性を解析しました。解析結果として「顆粒」(細胞内オブジェクト)の総数および総面積を求めました。μM)処理した細胞の解析結果を図1に示します。オートファジーの既知の誘導剤であるクロロキン、ベラパミルおよびアミオダロンに対する濃度応答を調べ、EC50値を評価しました。Kitにより染色したPC12神経芽細胞腫細胞の画像。Nanoシステムにより20倍の倍率で撮影。オートファジー粒子(緑色)、細胞核(青色)。OrangeおよびHoechstにより染色したPC12神経芽細胞腫細胞の画像。Nanoシステムにより40倍の倍率で撮影。オートファジー粒子(緑色)、ミトコンドリア(赤色)、核(青色)。CellReporterXpressソフトウェアのGranularityアプリケーションモジュール使用後に、オートファジー粒子および核について示した解析マスク。核(緑色)、オートファゴソーム(白色)。counts)を指標として比較した。クロロキン(赤色)、ベラパミル(緑色)、アミオダロン(青色)。NanoシステムおよびCellReporterXpressソフトウェアの信頼性が示されました。これにより、薬品開発初期にオートファジーを標的にした新たな治療薬の同定が可能になります。