content当サイトは、ブラウザのJavaScript設定を有効にしてご覧ください。細胞増殖をモニタリングすることが求められます。透過光(TL)イメージングを用いて細胞をモニタリングする際は、多様な細胞応答を評価するために信頼性が高く効率的な細胞計数方法が必要とされています。Devices)透過光を用いた細胞のセグメント化およびカウントCellReporterXpressソフトウェアでは、透過光画像を用いて対象のセグメント化およびカウントが可能です。本研究では、ラベルフリーな細胞の計数精度を求めることで、透過光画像を用いた細胞解析による細胞増殖や細胞毒性の評価の可能性について検討しました。段階希釈した細胞を透過光でカウントした細胞数の精度を見積もり、細胞核の対比染色を行ってカウントした細胞数と比較しました。CHO細胞およびHeLa細胞を、それぞれ適切な培地を使用して96ウェルプレートに播種しました。細胞密度で播種し、そこから2倍の段階希釈を行いました。播種してから24時間後に細胞をHoechstにより染色して、4%パラホルムアルデヒドで固定し、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で洗いました。倍または4倍の対物レンズで取得しました。枚の10倍画像を取得しました。対物レンズおよび透過光チャンネルを用いて取得した。General」プロトコルを用いて解析した。Fluor対物レンズを用いて取得した。Count」解析プロトコルを用いて、それぞれ処理した。C、Etoposide、Paclitaxel、Doxorubicinを、6桁に及ぶ範囲で濃度を振って加え、72時間処理しました(図3)。General」解析プロトコルを用いて解析しました。細胞増殖および細胞死への影響を、細胞数を測定することにより評価しました。化合物で処理された細胞の数は大幅に減少しました。Modelにより濃度反応曲線を求めました。抗ガン性化合物により処理した細胞は、化合物濃度の上昇に対応して、細胞数が明らかに減少しました(図3)。4種類の細胞毒性化合物の濃度反応曲線HeLa細胞を384ウェルプレートに播種し、細胞毒性化合物により72時間処理した。Fluor対物レンズを用いて取得した。General」解析プロトコルを用いて処理した。すべての化合物について、細胞数は化合物濃度の増加に伴って濃度依存的に減少した。4パラメーターカーブフィッティングによる濃度反応曲線を示す。結論この方法により、透過光画像解析は様々な化合物の抗増殖性および細胞毒性の評価だけでなく、細胞数の正確な測定にも使用できることが示されました。