〜治療法探索へ新しい戦略への可能性を拓く〜ポイント軟骨を形成する培養細胞を用いて新しいFOPに対する候補薬を選択するハイスループットスクリーニング系注1)を構築した。ハイスループットスクリーニング系等を用いて2つの化合物を見出した。複数の候補物質を提示することで薬剤開発の可能性を高めることが期待できる。(FOP)に対する薬剤のハイスループットスクリーニング系を構築し、それを用いて2つの候補化合物を見出しました。これまでの研究から、FOPの患者さんの細胞では、ACVR1注2)という遺伝子が変異することで過剰に働き、骨化が進みやすくなっていることがわかっていましたが、FOPを治療する薬は未だに存在しません。今回の研究では、まずATDC5というマウスの奇形腫由来の培養細胞に、FOP患者さんに特有の遺伝子変異を持ったACVR1を働かせ、ハイスループットスクリーニング系を立ち上げました。約5,000種類の化合物を用いてスクリーニングを行ったところ、2つのヒット化合物が得られました。これら化合物はFOP患者さん由来のiPS細胞を使った実験でも軟骨形成を抑制し、FOPの病態を再現したマウスでも異所性骨化を抑制する効果が見られました。した結果から、FOPのさらなる解析やドラッグリポジショニングに貢献できると考えられます。Reports」で公開されました。研究の背景FOPは筋肉や腱、靭帯などの組織の中など、本来とは異なる場所に骨ができてしまう病気で、200万人に1人程度の割合で罹患し、日本には80名程度の患者さんがいるといわれている希少難病です。これまでの研究により、FOPは骨形成に関わる因子であるBMP注3)の受容体の一つであるACVR1遺伝子に突然変異が生じることで、ACVR1が過剰に働いてしまうことが原因である事がわかっています。これまでに研究グループは、FOP患者さん由来のiPS細胞(FOP-iPS細胞)の作製に成功しています。iMSC)注4)を経て軟骨へと分化させる方法も確立していました。参考:CiRAプレスリリース2015/03/13さらにこれらの細胞を用いて、本来は別のシグナルを伝えるActivin-Aが、FOP細胞ではBMPシグナルを異常に伝達していることを明らかにしました。FOP-iPS細胞から作製した間葉系間質細胞(FOP-iMSC)をActivin-A発現細胞と共に免疫不全マウスに移植することで、患者さん由来細胞を用いた異所性骨形成モデルの作製にも成功していました。参考:CiRAプレスリリース2015/12/01こうした成果をもとに、患者さん由来のiPS細胞を使ってFOPに対する治療薬候補物質の選別を行うハイスループットスクリーニング系を立ち上げ、免疫抑制剤であるラパマイシンがFOPによる異所性骨の発生を抑えることができることを見出し、2017年8月からはラパマイシンを使った治験もスタートしました。治験について今回はFOP-iPS細胞とは異なるアプローチでハイスループットスクリーニング系を構築し、さらなる候補化合物の探索を試みました。研究結果ハイスループットスクリーニング系の構築FOPの患者さんではACVR1に変異が生じており、本来とは異なる刺激で活性化してしまいBMPのシグナルが働いてしまうことがわかっています。この状況により近い細胞の状態を作るために、軟骨形成をするマウス培養細胞であるATDC5にFOP型の変異を持ったACVR1を発現させました。このATDC5はBMPシグナル等の働きで軟骨分化が亢進するとALP注5)がたくさん産生されるため、このALPの働きを異所性骨化につながる異常な軟骨分化の指標として測定するハイスループットスクリーニング系を構築しました。この系を用いて、4,892種類の化合物の中から、候補化合物を7種類にしぼりこみました。本研究の流れ患者さん由来のiPS細胞を使った実験系による絞り込み次に、FOPの患者さんの細胞から作製したFOP-iPS細胞を用いた実験系で更に絞り込みを行いました。iPS細胞から作製した間葉系間質細胞(FOP-iMSC)にActivin-Aを加えることで軟骨形成が起こりますが、これをより強く抑える物質を探しました。165)を候補として得ました。iPS細胞由来のFOP-iMSCを使って化合物の軟骨分化を抑えるかを評価した。DMH-1は陽性コントロール。青くなっているところが軟骨へと変化した部分で、色が濃いほど軟骨への分化が進んでいる。165は半分程度の効果がある。165)で異所性骨化を防ぐ効果があることがわかりました(Fig.3)。165はmTORシグナル経路を調節する作用があり、直接ではないもののmTORシグナルを阻害していることを明らかにしました。上段はレントゲン撮影像、下段はCT撮影像。(溶媒投与群)のように骨ができてしまう。そこへ2つの化合物をそれぞれ与えると、骨化が抑えられている。165にはFOPで生じる異所性骨化を抑える効果があることがわかりました。今回見出した化合物は医薬品として市販されているものではないため、昨年発表し治験が開始されたラパマイシンのように、すぐに臨床で効果を確認する段階に進められるわけではありません。病気に対する薬を作る際には、どうしても途中で開発中止となってしまう候補物質が出てきます。複数の薬剤を組み合わせることでより高い効果が得られる場合もあります。今回の成果は、別の候補物質を提示することで、薬剤開発の可能性を高めるとともに、FOPが起こる分子メカニズムのさらなる解明につながると期待できます。ハイスループットスクリーニング多数の化合物の中から有効な化合物を見つけるための手段。一度に多種類の化合物について評価を行う。type-1)BMP受容体の一部を構成するタンパク質で、BMPと結合することにより骨形成のシグナルを伝達する。アクチビンAとは、結合はするがシグナルは伝えないことが知られていた。FOPではACVR1遺伝子の変異により、ACVR1タンパク質の206番目のアルギニンがヒスチジンに変化し、アクチビンAとの結合で本来伝えないはずのBMPシグナルを伝えていた。骨形成因子)骨組織や軟骨の分化を誘導、促進するタンパク質。いった間葉系の細胞に分化する能力を持った間質(結合組織)の細胞。Cell)としている。Phosphatase)様々な細胞の表面に存在する酵素の一種であるが、軟骨細胞の分化マーカー(目印)でもある。iPS細胞研究基金お問い合わせ。