D4では、ステップ5.4から新しいNGM寒天にピッキングして、F0-1-1-3からF0-3-12-3に2つの親線虫を転送します。F0-1-1-3のマーカーをF0-3-12-3からF1-1-1に変更し、F0の子孫(すなわちF1)を再現開始してから1日目にF0の子孫を表します。D5では、解剖顕微鏡を使用して、線虫が2日間成長したF1-1-1-1からF1-3-12-1寒天に線虫を数えます。F1-1-1-1をF1-3-12-1にして、F2を連続して再現させます。ステップ5.4から新しいNGM寒天にピッキングして、F0-1-1-4からF0-3-12-4寒天に2つの親線虫を転送します。F0-1-1-4のマークをF0-3-12-4からF1-1-1-2に変更し、F0の子孫(すなわちF1)を再現開始してから2日目にF0の子孫を表します。