F0-1-1-5のマーカーをF0-3-12-5からF1-1-1-3に変更し、F0の子孫(すなわちF1)を再現開始してから3日目にF0の子孫を表します。F1-1-1-1からF1-3-12-1に向けての線虫は3日間成長した。後続のMGE効果スタディでF2を再現するためにそれらを使用してください。同じ方法で、F2線虫を使用してF3を再現し、MGE効果スタディを継続します。同じ方法で、2つの親線虫を毎日転送し、次の日に子孫線虫を数え、親線虫が6NGM寒天(すなわち、各群の全寒天の半分)で繁殖を停止するまで。合計ブロッドサイズとして、再生期間全体の合計子孫数を計算します。日以内に子孫番号を使用して、親の最初の繁殖を表します。親線虫再生が6NGM寒天で停止した日を使用して、再生期間を推定します。個々の親が生き残った日数をその寿命として使用します。ブロッドサイズと寿命を取得します。同様に、前述の手順を繰り返すことにより、F2(Fn)の再現および寿命情報を得ることができる。MGR効果研究における生殖と寿命を測定します。生化学的指標を測定する。NGM寒天から線虫を無菌水で洗い流し、遠心管に集めます。線虫を30分間決済し、上清を捨てます。効果測定にはペレット内の線虫を使用します。7.0)を加え、線虫を洗浄します。gで遠心分離機を、ピペットで慎重に上清を廃棄します。液体窒素または-80°C冷凍庫でペレットを凍結します。氷浴中の害虫を使用してペレットを均質化します。使用して、害虫を取り出す前に遠心管に残留液体を洗浄します。gで遠心分離し、商業キットで生化学物質の活性または量を決定するために上清を使用します(詳細は材料の表を参照)。サンプル中の総タンパク質(TP)の量を測定し、その結果を他の生化学的指標を表す分母として使用し、サンプル間の線虫数の差を排除できるようにします。遺伝子発現を測定する。製造元の指示21に従って、市販のRNA抽出キット(詳細については材料の表を参照)を使用して線虫試料から総RNAを分離する。製造元の指示に従ってSYBRグリーンRT-PCRキットを用いてリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)でcDNAサンプルを分析する(材料の表を参照)21。選択した遺伝子の相対発現レベルを2-ΔΔCT法22により定量し、gdp-2(または他の参照遺伝子)の発現レベルを負の基準として扱う。Resultsここでは、世代間(TG)、多世代暴露(MGE)および多世代残差(MGR)効果研究におけるC.エレガンスを用いて世代を超えた化学物質の効果を研究するためのプロトコルについて述べた。独自の研究成果を事例として紹介します。ある研究は、移動行動3に対する重金属のTG効果を提示する。エレガンスカドミウム(Cd)、銅(Cu)、鉛(Pb)および亜鉛(Zn)の体曲げ頻度(BBF)のTG効果は、母体暴露後の線虫親(F0)およびその子孫(T1)3で研究された。BBFに対する金属の影響は、T1の阻害がF0よりも大きいことを示し、直接露出した親よりも胚にさらされた子孫の移動行動に対する重金属のより重篤な毒性を示した。環境的に現実的な濃度での重金属のTG効果は、母体暴露が後継世代の重金属汚染の危険性を増大させることができることを実証した。1を参照してください。出生前暴露後の線虫親(F0、ブランク)の体曲げ頻度に対するカドミウム(Cd)、銅(Cu)、鉛(Pb)および亜鉛(Zn)の影響(T1、シェーディング)。