FavoritesSummary永続的な化学物質のトランスおよび多世代の影響は、環境と人間の健康に対する長期的な影響を判断する上で不可欠です。我々は、自由に生きている線虫カエノルハブ炎エレガンスを用いて、トランスおよび多世代の効果を研究するための新しい詳細な方法を提供する。here.Abstract化学物質の毒性に関する情報は、その用途と廃棄物管理に不可欠です。低濃度の化学物質の場合、長期的な影響は、環境と人間の健康への影響を判断する上で非常に重要です。長期的な影響を実証する上で、最近の研究で世代を超えた化学物質の影響は、新しい洞察を提供します。ここでは、自由に生きている線虫カエオルハブ炎エレガンスを用いて、複数世代にわたる化学物質の効果を研究するためのプロトコルについて説明する。(1)トランスジェネレーション(TG)と(2)多世代効果研究、(後者)を多世代露光(MGE)と多世代残差(MGR)効果スタディに分ける2つの側面を提示する。TG効果研究は、親への化学暴露が子孫に残留結果をもたらす可能性があるかどうかを決定する単純な目的で堅牢です。効果が親に測定された後、次亜塩素酸ナトリウム溶液は、親を殺し、子孫に対する効果測定を容易にするために子孫を保つために使用されます。TG効果試験は、親が汚染物質にさらされたときに子孫が影響を受けるかどうかを判断するために使用されます。MGEおよびMGR効果試験は、連続的な世代暴露が世代を超えて子孫の適応応答をもたらす可能性があるかどうかを決定するために体系的に使用されます。慎重なピックアップと転送は、各世代の効果測定を容易にするために世代を区別するために使用されます。遺伝子発現の変化を測定しました。いくつかの実験例はまた、トランスおよび多世代効果研究を説明するために提示される。Introduction化学物質の適用および廃棄物管理は、特定の濃度での効果の情報に大きく依存します。時間は効果と濃度の間のもう一つの重要な要素です。1.したがって、研究者は、動物実験で露光期間の異なる長さを配置し、さらにはライフサイクル全体をカバーします。マウスは、その毒性効果2を研究するために30、90または180日間ニコチンにさらされた。このような暴露期間は、環境中の生物の世代にわたって持続する汚染物質(例えば、持続的な有機汚染物質[POP])の長期的な影響を解明するのに十分ではありません。したがって、世代を超えた効果に関する研究はますます注目を集めています。世代効果研究には主に2つの側面があります。1つ目は、親への化学暴露が子孫3に何らかの影響をもたらすかどうかを強くテストできるトランスジェネレーション(TG)効果試験です。2つ目は、露出効果と残留効果の両方を考慮した、より体系的な多世代効果研究です。一方で、多世代暴露(MGE)効果は、長期的に困難な環境に対する動物の適応応答を示すために使用される。母体暴露は第1子子への胚暴露と第2の生殖線暴露を伴うため、多世代残差(MGR)効果は、暴露後の長期的な残留結果を実証するために使用される。第三世代として第三の子孫を露出から完全に外す子孫4.哺乳動物(例えば、マウス)は、特にヒトに関連する毒性研究におけるモデル生物であるが、世代的影響の研究におけるその応用は非常に時間がかかり、高価で倫理的に5に関する。したがって、甲殻類ダフニアマグナ6、昆虫ショウジョウバエメラノガスター7およびゼブラフィッシュダニオレリオ8を含む生物は、代替選択肢を提供する。これらの生物は人間との類似性を欠いているか、研究に特定の装置を必要とします。カエオルハブ炎エレガンスは、短いライフサイクル(20°Cで約84時間)9の小さな自由に生きている線虫(長さ約1mm)です。この線虫は、人間に対して保守的な多くの生物学的経路を共有し、したがって、様々なストレスまたは毒性物質10の効果を示すために広く採用されている。線虫の99.5%は、重金属やスルホンアミド3、11、金ナノ粒子および重体のMGE効果の生成効果など、世代的効果の研究に非常に適したこの生物を作るハーマフロダイトである。金属12および温度13、スルホンアミド14のMGR効果、およびガンマ照射15およびリンダン4のMGEおよびMGR効果の両方が及ぶ。マウスとC.エレガンス16、17の発達および繁殖に及ぼす化学物質(例えばゼアラレノン)の効果との間に同等の結果が見出された。この小動物から人間への影響。効果の研究は両方の時間がかかり、慎重な設計とパフォーマンスが必要です。.特に、前述の研究では、ライフステージの選択、暴露条件、および生成分離方法に違いが存在していました。このような違いは、結果間の直接比較を妨げ、結果のさらなる解釈を妨げました。したがって、TGおよびMG効果研究を導く統一プロトコルを確立し、また、長期的な結果における様々な毒性物質または汚染物質の同様のパターンを明らかにするために、より大きな画像を提供することが不可欠である。本プロトコルのオーバーゴールは、C.エレガンスとのトランスおよび多世代効果を研究する際の明確な操作プロセスを示す。培養大腸菌OP50水酸化ナトリウム4gを100mLの水に溶解して1M水酸化ナトリウム溶液を調出す。リソジェニーブロス(LB)培地を1L円錐フラスコに10gのトリプトン、5gの酵母エキス、10gの塩化ナトリウムを1Lの円錐形フラスコに溶解させ、1Lの円錐形のフラスコに1Lの超純水を溶かして調剤する。水酸化ナトリウム溶液1MでpHを7.0に調整します。mLの媒体とアリコートする。円錐形のフラスコをクラフト紙で覆います。MPaで20分間殺菌し、LB培地を室温まで冷やします。細菌懸濁液からピペット200μL(ステップ1.8を参照)または接種ループを使用して寒天から小さなコロニーを選ぶか(ステップ2.14)、LB培地に入れます。LB培地を37°Cで150rpmで24~48時間振ってインキュベートします。LB培地は茶色の透明液から濁ったカーキ色のサスペンションに変わります。全フラスコの80%の細菌懸濁液を使用して、ステップ2.11で使用する線虫食品として大腸菌OP50を提供します。細菌懸濁液を含むフラスコの残りの部分を冷蔵庫に4°Cで保管してください。LB懸濁液のピペット200μLを新鮮なLB培地の上側(ステップ1.4)にし、その後のインキュベーションのためにステップ1.6を繰り返す。mLでK2HPO4の22.8gを溶解します。PO4の6.8gを溶解します。μmの滅菌可能な使い捨て用膜フィルターを通して溶液を滅菌容器に濾過して殺菌します。μmの無菌使い捨て膜フィルターを通して溶液を滅菌容器に濾過して殺菌します。絶対エタノールの5mLにコレステロール0.025gを溶解して1Mコレステロール溶液を調作し、0.22μmの無菌使い捨て膜フィルターを通して無菌容器に濾過して殺菌する。1Lの超純水を含む1Lの円錐フラスコに17gの寒天粉末、2.5gのペプトン、3gの塩化ナトリウムを加えて線虫成長培地(NGM)寒天を調少します。°CでNGM寒天を20分間殺菌します。CaCl2、および5mg/mLコレステロールエタノール溶液を2.4~2.6の培地に加え、十分に混ぜます。NGM寒天媒体を100個の滅菌ペトリ皿(直径6.0cm)に注ぎます。ペトリ皿の中の媒体を室温に冷やし、固寒天を形成する。ステップ1.7から前述のNGM寒天に対する細菌懸濁液のピペット170μLは、無菌先端を用いた。NGM寒天を少し振り、LB培地をNGM寒天面に均等に分配します。NGM寒天を37°Cの上側に接種し、8~12時間、細菌の芝生を形成する。ステップ2.12から培養線虫にステップ2.12または2.19で細菌の芝生と寒天のほとんどを使用してください。1または2寒天を上下に下に保管し、4°Cの冷蔵庫での水蒸発や汚染を避け、細菌を汚染に維持します。ストッキングNGM寒天に2,000未満の線虫がある場合(以前の実験または他の研究室から贈られたもの)、無菌先端を持つC.エレガンを含むNGM寒天の6分の1を切り、細菌で新たに調製されたNGM寒天に移します。芝生(ステップ2.13から)。NGM寒天を22°Cのインキュベーターで上下に保ち、その後の培養物を使用します。NGM寒天に2,000以上の線虫がある場合は、NGM寒天の線虫を2mLの滅菌水で遠心管に流し込みます。2mLの水を入力すると、約1.5mLの出力になります。mLを加えてペレット(すなわち、線虫)を洗浄します。遠心管の線虫を30分間落ち着かせ、ピペッティングで上清を1mL捨てます。各チューブに1mLの滅菌水を加え、線虫を再懸濁させます。線虫懸濁液(合計約1.5mL)を、細菌芝生(ステップ2.13から)で新しいNGM寒天に150μLをピペッティングし、合計で8-10の新しいNGM寒天を作ります。NGM寒天をステップ2.19から上側に20°Cのインキュベーターで一晩上に保ち、その後の培養のために上側に置きます。日ごとに繰り返します。C.エレガンスの同期卵とL3幼虫を準備するNGM寒天から生まれた赤毛線虫と新たに作られた卵を無菌遠心管に流し込み、各NGM寒天に2mLの滅菌水を加え、約1.5mLの出力を得る。遠心管の線虫を30分間落ち着かせ、ピペッティングで上清の85%を捨てます。次亜塩素酸ナトリウム溶液を0.6gのNaOHと5mLのNaOCl(4-6%活性勾配、詳細は材料表を参照)を25mLの水で溶解させ、NaOHを0.5M、NaOClを1%にします。ステップ3.2からペレットを混合し(体積をV0としてマークする)、次亜塩素酸ナトリウム溶液の7倍V0(ステップ3.3、すなわち、体積比1:7)19を混合する。幼虫と成体線虫をlyseseに10〜15分間2分ごとに遠心管を振ります。線虫懸濁液の色は濁りからクリアに変わります。チューブを700xgで20°Cで3分間遠心分離し、ピペッティングで上清を捨てます。無菌水の5倍V0でペレットを再懸濁し、加齢卵を洗浄する。遠心分離機を20°Cで3分間700xgで、次いで上清を捨てます。無菌水の1倍V0をチューブに加え、年齢同期卵を再懸濁させる。μLをピペッティングすることにより、卵懸濁液を分配します。NGM寒天を20°Cのインキュベーターで30分間上に置き、細菌の芝生で水を蒸発または吸着できるようにします。寒天を上下に下にして、その後の文化を作ります。卵時間(T卵)として時間をマークします。1Lの水にNaClの3gとKClの2.36gを溶解することによりK培地を調製する。分間殺菌し、室温まで冷却します。T卵の後に時間が36時間に達すると、線虫はL3幼虫ステージ(L3線虫)20に達する。NGM寒天から線虫を遠心管に流し、各NGM寒天に2mLの滅菌水を加え、約1.5mLの出力を得る。30分間沈降した後、上清の85%を(ピペッティングによって)2時間からK培地に置き換え、腸3で食物を消化する。μLに調整し、その後の実験を行います。世代間効果研究にC.エレガンスを使用する5濃度レベルと1つの溶媒または絶対制御、すなわち合計6群の化学溶液を調達する。μLのレプリケートとして追加します。μL線虫懸濁液を追加します。t0としてマークします。時間がt0の後に24時間に達すると、井戸の生きていると死んだ線虫を数えます。中央値致死濃度(LC50)を計算します。LC50値の10%以下の5濃度のシリーズを準備します。ウェル滅菌マイクロプレートの中間領域に追加し、エッジ効果を回避します。μLをステップ4.6から60ウェルのそれぞれに加えます。T0としてマークします。暴露後、各群の5つの井戸から線虫をピペッティング(合計6本)で1.5mL遠心管に集めます。線虫を30分間決済し、ピペッティングで上清を捨て、1mLの殺菌水で底部の線虫を再懸濁して洗う。線虫を30分間決済し、ピペッティングで上清を捨て、下部の線虫を使用して、F0としてマークされた露出親世代の指標測定(セクション7を参照)を行います。ステップ4.10に従って、各グループの残りの5つの井戸から線虫を収集、決済、洗浄します。.ステップ4.12から線虫を30分間決済し、ピペッティングで上清を捨て、100μLの滅菌水を加えて線虫を再懸濁させる。線虫懸濁液をステップ2.13から細菌の芝生を持つ3つの新しく調製されたNGM寒天に均等に移す。線虫を36時間インキュベートして重力化し、手順3.1~3.9に従って年齢同期を実行します。ステップ2.13から細菌の芝生でそれぞれのNGM寒天の同期卵を36時間インキュベートします。NGM寒天の線虫をステップ4.14から6本の遠心管に洗い流します。線虫を30分間決済し、ピペッティングで上清を捨てます。mLでペレットを再懸濁し、洗浄します。線虫を30分間決済し、ピペッティングで上清を捨てます。NGM寒天(ステップ2.9から)を1mLの制御または化学溶液(本プロトコルの低濃度および高濃度、すなわち合計3群)と混合する。cm)に1皿あたり約10mLのNGM寒天媒体を注ぎます。ペトリ皿の中の媒体を室温に冷やし、固寒天を形成する。ステップ2.11に基づいて寒天にピペット細菌懸濁液。μW/cm2)に細菌の芝生を15分間さらします。接種ループを使用して小さなコロニーを選択し、ステップ1.4で寒天からLB培地に入れます。LB培地を37°Cで150rpmの速度で24時間振ってインキュベートし、細菌の増殖を確認し、殺し工程5.4を検証する。ステップ3.9から寒天に年齢同期卵をピペットします(ステップ5.4から)。寒天を20°Cで3dにインキュベートします。次に(すなわち、D3で)、成熟した線虫を使用してF0の効果を測定します(セクション7を参照)。D3では、F0成熟線虫を新しいNGM寒天(ステップ5.4から)に取り付け、その端部に人工繊維ワイヤーをリングに曲げて装着します。D4では、成熟したF0線虫をNGM寒天から選び出して捨てる。世代の露出を体験します。D6では、3日間の暴露を経験したF1成熟線虫の指標(セクション7参照)を測定します。D9では、手順5.8~5.10を繰り返し、F1線虫を使用してF2ワームを再現し、F2線虫への影響を測定します。線虫への影響を測定します。同じ方法で、子孫を再現し、n番目の子孫生成(Fn)に対するMGE効果を測定する。D3では、F0成熟線虫を追加した化学物質なしで新しいNGM寒天に取り入れ(ステップ2.13から)。D4で、成熟したF0線虫を選び出して捨てる。線虫としてマークします。D6では、3日間成長したT1成熟線虫の指標(セクション7参照)を測定します。D9では、手順6.2~6.3を繰り返し、T1線虫を使用してT2線虫を再現し、T1線虫の効果を測定します。D12では、ステップ6.4を繰り返し、T2線虫を使用してT3線虫を再現し、T2線虫の効果を測定します。移動動作の動作を測定します。無菌水を使用してNGM寒天から線虫を洗い流し、遠心管に集めます。線虫を30分間決済し、上清を捨て、ペレットの線虫を使用して効果測定を行います。mLでペレット内の線虫を再懸濁し、ステップ2.10から細菌の芝生なしでNGM寒天にそれらをピペット。解剖顕微鏡を使用して、咽頭の後球が60秒間隔内の走行経路の垂直方向に沿って方向を変化する回数を指す(数)体曲げ頻度(BBF)の線虫をスコアリングする。解剖顕微鏡を使用して、60秒間隔で後方旋回やオメガターン(OT)を含む90°を超えて進む方向が変化する時間を指す反転運動(RM)をスコアリングします。OTは、線虫の頭がギリシア文字オメガ(Ω)のような線虫の形を作るその尾に触れたり、ほとんど触れたりしたときの動きを指します。注:各実験反復における各処置について少なくとも6つの線虫を調べた。MGE(F0~F3)が3群(1対1および2回の暴露治療)による生殖および寿命に及ぼす影響の例。反復は、生存日を示す最後の数字で表示されます。変更する必要があります。F0線虫を3dまで転送する必要はありません。3dの後、F0線虫は成熟し、36の新しいNGM寒天(各寒天に2つの線虫を含む)が生存と生殖を観察するために使用される。F0線虫の数を整理するために予備的な実験を行い、多世代の操作を成功させるために少なくとも200人の子孫を保証する必要があります。MGR効果が研究されている場合、F0線虫は化学暴露なしで透明なNGM寒天に移されるべきであり、T1開始として留意すべきである。F0線虫のほとんどは、化学的および遺伝的指数を測定するために収集され、F0の30寒天はクリアされます。寿命と生殖に関する測定には、毎日転送が必要です。寒天にピッキングされます。F0-1-1-3からF0-3-12-3に対する残りの子孫線虫(MGEのF1、またはMGRのT1)は1dに成長し、マーカーはF1-1-1-1にF1-1-1-1に変更されます。これらの寒天はまた、毎日の転送でF1の寿命を監視するために使用されます。F1-1-1-1からF1-3-12-1に対する線虫は2dに成長し、簡単に観察できるようになり、線虫をカウントし、マーカーをF1-1-1-1-2からF1-3-12-2に変更します。F0-1-1-4からF0-3-12-4寒天の子孫線虫は1dに成長した。F1-1-1-2からF1-3-12-2に対する線虫は3dに成長し、マーカーはF1-1-1-3からF1-3-12-3に変更されます。F1線虫はこの日からF2を再現し始め、F1線虫はF2-1-1-0をF1-3-12-0にする新しいNGM寒天に移管されるべきである。MGR研究の場合、T2は今日開始します。これは化学暴露によって遅れる可能性があるため、その後の世代のために十分な線虫を確保するために、各実験で柔軟な変更を行う必要があります。F0-1-1-4からF0-3-12-4寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫をカウントした後に寒天がクリアされます。F0-1-1-5からF0-3-12-5寒天の子孫線虫は1dに成長した。F0-1-1-5からF0-3-12-5寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫をカウントした後に寒天がクリアされます。初期再現を計算します。F0-1-1-6からF0-3-12-6寒天の子孫線虫は1dに成長した。F2-1-1-0からF1-3-12-0のF2線虫は1dに拡大し、マーカーはF2-1-1-1からF2-3-12-1に変更されます。F0-1-1-6からF0-3-12-6寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫をカウントした後に寒天がクリアされます。F0-1-1-7からF0-3-12-7寒天のF0の子孫線虫は1dに成長した。F1-1-1-1-4からF1-3-12-4に対するF1の子孫線虫は1dに成長しました。F2-1-1-1からF2-3-12-1のF2線虫は2dに成長し、線虫はカウントされ、マーカーはF2-1-1-2からF2-3-12-2に変更されます。F0-1-1-7からF0-3-12-7寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされる。F1-1-1-4からF1-3-12-4のF1の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F0-1-1-8からF0-3-12-8に対するF0の子孫線虫は1dのために成長した。F1-1-1-5からF1-3-12-5に対するF1の子孫線虫は1dのために成長しました。F2-1-1-2からF2-3-12-2のF2線虫は3日間成長し、マーカーはF2-1-1-3からF2-3-12-3に変更されます。F2線虫は今日再生を開始し、彼らは36の新しいNGM寒天に転送され、F3-1-1-0からF3-3-12-0にマークされています。MGR研究の場合、T3は今日から始まります。F0-1-1-8からF0-3-12-8寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされる。F1-1-1-5からF1-3-12-5寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。初期再現を計算するために使用されます。F0-1-1-9からF0-3-12-9に対するF0の子孫線虫は1dに成長した。F1-1-1-6からF1-3-12-6に対するF1の子孫線虫は1dに成長しました。F3-1-1-0からF3-3-12-0に対する子孫線虫は1dに成長し、マーカーはF3-1-1-1からF3-3-12-1に変更されます。F0線虫の再生は、最初の数日後に大幅に減少します。したがって、線虫転写はD10以降に毎日行う必要がなくなり、2日ごとに行うことができる。生存はまだ毎日の観察を必要とします。F0-1-1-9からF0-3-12-9寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされる。F1-1-1-6からF1-3-12-6のF1の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F0-1-1-10からF0-3-12-10寒天のF0の子孫線虫は1dに成長した。F1-1-1-1-7からF1-3-12-7に対するF1の子孫線虫は1dに成長しました。F2-1-1-4からF2-3-12-4に対するF2の子孫線虫は1dに成長した。F0-1-1-10からF0-3-12-10寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされる。F1-1-1-1-7からF1-3-12-7寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F2-1-1-4からF2-3-12-4のF2の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F0-1-1-11からF0-3-12-11に対するF0の子孫線虫は1dに成長した。F1-1-1-1-8からF1-3-12-8に対するF1の子孫線虫は1dのために成長しました。F2-1-1-5からF2-3-12-5に対するF2の子孫線虫は1dのために成長した。F3線虫は今日再生を開始し、彼らは36の新しいNGM寒天に転送され、F4-1-1-0からF4-3-12-0にマークされています。MGR研究では、F3の子孫(すなわち、T1')が今日開始されます。F0-1-1-11からF0-3-12-11のF0の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされる。F1-1-1-8からF1-3-12-8のF1の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F2-1-1-5からF2-3-12-5寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。初期再生を計算するために使用されます。F0-1-1-12からF0-3-12-12に対するF0の子孫線虫は1dに成長した。F1-1-1-9からF1-3-12-9に対するF1の子孫線虫は1dに成長しました。F2-1-1-6からF2-3-12-6に対するF2の子孫線虫は1dに成長した。F4-1-1-0からF4-3-12-0のF3の子孫線虫は1dに成長し、マーカーはF4-1-1-1からF4-3-12-1に変更されます。F0-1-1-12からF0-3-12-12のF0の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされる。F1-1-1-9からF1-3-12-9にF1の子孫線虫は2dで成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F2-1-1-6からF2-3-12-6寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされる。F4-1-1-1からF4-3-12-1のF3の子孫線虫は2dに成長し、線虫をカウントした後に寒天がクリアされます。MGRの研究では、T1'線虫は2dのために成長し、翌日(D15)にT2'を再現し始め、T2'はD18でT3'を再現し始めます。野生型C.エレガンスの寿命は15日として例示される。その後、T3'寿命の終わりはD33になります。F0-1-1-13からF0-3-12-13に対するF0の子孫線虫は1dに成長した。F1-1-1-1-10からF1-3-12-10にF1の子孫線虫は1dのために成長しました。F2-1-1-7からF2-3-12-7寒天の子孫線虫は1dに成長した。F3-1-1-4からF2-3-12-4に対するF3の子孫線虫は1dに成長しました。F0-1-1-13からF0-3-12-13のF0の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされる。F1-1-1-10からF1-3-12-10のF1の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F2-1-1-7からF2-3-12-7寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-4からF3-3-12-4のF3の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F0-1-1-14からF0-3-12-14に対するF0の子孫線虫は1dに成長した。F1-1-1-1-11からF1-3-12-11に対するF1の子孫線虫は1dに成長しました。F2-1-1-8からF2-3-12-8に対するF2の子孫線虫は1dのために成長した。F3-1-1-5からF2-3-12-5に対するF3の子孫線虫は1dのために成長しました。野生型C.エレガンスの寿命は15日として例示される。したがって、F0は暴露以来16日目までにすべて死亡しているはずです。F0-1-1-14からF0-3-12-14のF0の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされる。F1-1-1-11からF1-3-12-11のF1の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F2-1-1-8からF2-3-12-8のF2の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-5からF3-3-12-5寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。初期再現を計算するために使用されます。F0-1-1-15からF0-3-12-15に対するF0の子孫線虫は1dに成長した。F1-1-1-1-12からF1-3-12-12にF1の子孫線虫は1dのために成長しました。F2-1-1-9からF2-3-12-9に対するF2の子孫線虫は1dに成長した。F3-1-1-6からF2-3-12-6に対するF3の子孫線虫は1dに成長した。F0-1-1-15からF0-3-12-15のF0の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされる。これ以上F0の子孫はいません。F1-1-1-12からF1-3-12-12にF1の子孫線虫は2dで成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F2-1-1-9からF2-3-12-9にF2の子孫線虫が2dで成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-6からF3-3-12-6のF3の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F1-1-1-1-13からF1-3-12-13に対するF1の子孫線虫は1dに成長しました。F2-1-1-10からF2-3-12-10に対するF2の子孫線虫は1dに成長した。F3-1-1-7からF2-3-12-7に対するF3の子孫線虫は1dに成長しました。F1-1-1-13からF1-3-12-13のF1の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F2-1-1-10からF2-3-12-10寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-7からF3-3-12-7寒天の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F1-1-1-1-14からF1-3-12-14に対するF1の子孫線虫は1dに成長しました。F2-1-1-11からF2-3-12-11に対するF2の子孫線虫は1dに成長した。F3-1-1-8からF2-3-12-8に対するF3の子孫線虫は1dのために成長しました。MGR研究では、T2'は今日T3'を再現し始めます。野生型C.エレガンスの寿命は15日として例示される。その後、T3'寿命の終わりはD33になります。F1-1-1-14からF1-3-12-14のF1の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F2-1-1-11からF2-3-12-11のF2の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-8からF3-3-12-8のF3の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F1-1-1-1-15からF1-3-12-15にF1の子孫線虫は1dのために成長しました。F2-1-1-12からF2-3-12-12に対するF2の子孫線虫は1dに成長した。F3-1-1-9からF2-3-12-9に対するF3の子孫線虫は1dに成長しました。F1-1-1-14からF1-3-12-14のF1の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。これ以上のF1子孫はいません。F2-1-1-12からF2-3-12-12にF2の子孫線虫は2dで成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-9からF3-3-12-9にF3の子孫線虫は2dで成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F2-1-1-13からF2-3-12-13に対するF2の子孫線虫は1dに成長した。F3-1-1-10からF2-3-12-10にF3の子孫線虫は1dのために成長しました。F2-1-1-13からF2-3-12-13のF2の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-10からF3-3-12-10のF3の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F2-1-1-14からF2-3-12-14に対するF2の子孫線虫は1dに成長した。F3-1-1-11からF2-3-12-11に対するF3の子孫線虫は1dに成長した。F2-1-1-14からF2-3-12-14のF2の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-11からF3-3-12-11にF3の子孫線虫は2dで成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-12からF2-3-12-12に対するF3の子孫線虫は1dに成長した。F2-1-1-15からF2-3-12-15のF2の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。これ以上のF2子孫は存在しません。F3-1-1-12からF3-3-12-12にF3の子孫線虫は2dで成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-13からF2-3-12-13に対するF3の子孫線虫は1dに成長した。F3-1-1-13からF3-3-12-13のF3の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-14からF2-3-12-14に対するF3の子孫線虫は1dに成長しました。F3-1-1-14からF3-3-12-14のF3の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。F3-1-1-15からF2-3-12-15にF3の子孫線虫は1dのために成長しました。F3-1-1-15からF3-3-12-15のF3の子孫線虫は2dに成長し、線虫を数えた後に寒天がクリアされます。MGR研究では、F3の最初の非露出子孫(すなわち、T3')がD18で生まれる。野生型C.エレガンスの寿命は15日として例示される。その後、T3'寿命の終わりはD33になります。MGEとMGRの両方の研究は、線虫の寿命が長い日数をカバーします。マーカーとその定義の一覧。MGE効果スタディの生殖と寿命を測定します。c、xは生成番号を指し、aはグループ番号を指し、グループ番号(対照用は1、高濃度の場合は3)を指します。