コラーゲンが得られる。時間撹拌しながら添加。酸による抽出-酢酸などの有機酸を用いて抽出し、酸可溶性コラーゲンが得られる。酵素による抽出-ペプシン処理で抽出し、ペプシン可溶性コラーゲンが得られる。各種抽出法で得られた可溶性コラーゲン画分の濃度2塩による抽出では、コラーゲンの収量は高くありません(図2)。したがって多くのコラーゲンを得るためには、酸による抽出か、ペプシンなどによる酵素処理で非らせん末端を除去し水溶性を高める方法がよく行われます。これらの方法においても、原材料の架橋具合により可溶性に一貫性がなく、得られるコラーゲン溶液の再現性に乏しいことと、抽出に時間が掛かるため(通常1週間~3週間)、タンパク質分解により収率を下げてしまう問題も残っています。コラーゲンの三重らせん構造は高温でほどけやすくなります。したがって変性および分解を避けるためには、コラーゲンの抽出は低温下で行う必要があります。非変性コラーゲンの立体構造エピトープ(three-dimensional(3D)epitope)を認識する抗体を実験に使用する場合には、サンプルとなるコラーゲンが変性されていないか注意しなくてはなりません。処理を行ったライゼート中のコラーゲン・タンパク質は変性しており、このような抗体との反応性は低下します。エピトープ情報は、抗体製品それぞれのデータシートに記載されていますので、抗体を選ぶ際に、あるいは実験を行う前に、必ずご確認ください。ELISAコラーゲンはタイプが異なってもアミノ酸配列の相同性が高いため、タイプの違いを判別する場合は、立体構造の違いを識別する抗体を使用した方が確実です。おいては、抗体としては非変性コラーゲンの立体構造を認識する抗体を、標準品としては立体構造を保持した非変性コラーゲンを、それぞれ使用することをお勧めします。系においては、固相化したコラーゲンの立体構造が変化する可能性があります。系を採用してください。pH(塩基性)、高い濃度、高い温度は避けてください。コラーゲンは塩基性の条件下、あるいは高濃度で、重合してヒドロゲルを形成しやすくなります(酸性条件下では可溶性であり安定しています)。以下で取り扱ってください。電気泳動のゲルは次のような条件で作製してください。)、およびカオトロピック剤(塩酸グアニジン、尿素など)を添加してください。アクリルアミドゲルを使用してください。アクリルアミドゲルを使用してください。グラジエント・ゲルを使用してください。1:コントロールはポジティブ、ネガティブ共に、組織などから抽出したネイティブなタンパク質を使用することをお勧めします。適切な抗原賦活化条件を探してください。ホルマリン固定を行うと組織中のコラーゲン分子間で架橋が起こり、三重らせんが整列してフィブリル(fibril)を形成し、次いで線維(fiber)を形成する可能性があり、抗原の賦活化はその架橋の程度に応じて条件設定を行う必要があります。ヘリックス構造に特異的に結合するため、コラーゲン架橋の程度を決定するために使用することができます。6.0)による処理をお勧めします。酵素処理も広く行われています。抗原賦活化の条件が抗体製品のデータシートに示されている場合は、その条件に従ってください。短いペプチド配列を認識する抗体についてのヒント短いコラーゲン・ペプチドを抗原として樹立されたコラーゲン抗体を使用する場合は、コラーゲンの立体構造の維持を気にする必要はあまりありません。すべて、ターゲットであるコラーゲンに特異的な配列を有する短いペプチドを抗原として樹立されています。したがって、ウエスタン・ブロッティング、ELISA、免役組織染色など、比較的幅広く使用することができます。