Achievements・エルトロンボパグの血小板増加モデル開発:エルトロンボパグはヒトとチンパンジーのTPO受容体にしか反応せず、マウスでは血小板増加効果が得られない。DNAをマウス受精卵に導入し遺伝子改変マウスを作成した。DNAマウスを作成し、繁殖を開始し、ヒトTPO受容体の発現しているマウスの作成に成功した。・ヒトIPS細胞から巨核球、血小板の作成:CD34陽性骨髄幹細胞(5×105)をトランスフェリン無添加SF培地で、rhTPOおよびエルトロンボパグそれぞれを添加し巨核球及び血小板の作成に成功した。現状では巨核球の産生効率は約20%であった。BrdUを用いて検討した。その結果いずれの癌細胞に対してもエルトロンボパグが抗腫瘍効果を持つことを明らかにした。エルトロンボパグには白血病細胞に対する鉄キレート作用が報告されている。そこで肝癌細胞株にクエン酸鉄アンモニウム(FAC)を添加し鉄補充をすることでエルトロンボパグの抗腫瘍効果がキャンセルされることを確認した。arrestが生じていることがわかった。arrestによる抗腫瘍効果を有していることを明らかにした。planned.ReasonヒトTPO受容体を有する遺伝子組み換えマウスの開発;BAC-DNAを用いてヒトTPO受容体をマウスに発現させた遺伝子組み換えマウスの作成に成功した。今年度は肝繊維化実験に供する数の確保ができなかった。製剤を作用させて血小板を産生させることには成功した。作成された血小板の数が星細胞への効果検証実験に供するには不十分であり、引き続き条件を検討中である。arrestであることを明らかにした。vitroの系で現在検討中である。ヒト肝星細胞TWNT1に対する活性化抑制効果を、エルトロンボパグ又は既存のTPOでiPS細胞から作成した巨核球より産生させた血小板で比較検討する。cytometryを用いαSMA発現陽性細胞率を計測する。・エルトロンボパグのヒト肝細胞癌株に対する抗腫瘍効果のメカニズム解析のために、エルトロンボパグの肝細胞癌に対する鉄キレート作用についても合わせて検討する。RNAのマイクロアレイを用いて網羅的解析を行う。・より効果的かつ効率的にヒト血小板を作成するためにiPS細胞に加えて、分化能に優れているヒト胎盤由来幹細胞を分離培養し、巨核球への分化誘導条件を検討する。製剤を作用させて血小板を産生させる。エルトロンボパグによって産生された血小板が肝星細胞の増殖およびα-SMAの発現に抑制的に作用することが可能か検討する。・肝細胞癌に対する唯一の抗癌剤であるソラフェニブとの併用効果を検討する。Carryover26年度実験におけるヒトTPO受容体を有する遺伝子組み換えマウスの開発、エルトロンボパグによって産生された血小板によるヒト肝星細胞抑制効果の検討、ならびにエルトロンボパグのヒト肝細胞癌株に対する抗腫瘍効果のメカニズムの検討に関しての実験が順調に進んだため次年度の研究費に繰り越した。vitroの実験に各々振り分けて使用する。