響ここでは,アセトンによるクロロフィル・カロテノイド定量方法を解説します。はじめにDMF抽出法は抽出に3日程度かかるが,アセトン抽出法の場合,短時間で抽出から定量まで行えるという利点がある。DMFが葉の組織に十分浸透しないようなクチクラ層の発達した葉でも,アセトン抽出法ならクロロフィル・カロテノイドの測定が可能である。この抽出法では,サンプルの葉の組織を十分に破壊することが必須である。白衣・保護ゴーグル溶媒(80%アセトン)の準備アセトン8に対して蒸留水2を混ぜよく撹拌した上で,オートビュレット付属瓶に注いでおく。氷(氷水)の準備サンプルの温度が上がるとクロロフィルが分解してしまうため,作業中はできる限りサンプルを冷やしておく。氷(氷水)をはったバットに試験管たて・試験管をいれて,作業中は冷やしておけるようにする。discの切り抜き/葉面積の測定クロロフィル・カロテノイド定量方法(DMF抽出法)参照。大きなサンプルの場合,乳鉢にサンプルと液体窒素を入れて乳棒ですりつぶし,そこに一定量の80%アセトンを注ぐ。discなど小さいサンプルの場合について説明する。discを試験管に入れるこの試験管に液体窒素を入れ,撹拌棒で凍った葉を細かく砕く(撹拌棒で粉々に割る)十分に細かくなったら,試験管に80%アセトン4ml(吸光度が1を超えてしまう場合はもっと増やす)を注ぐ。試験管にふたをする(合うフタがない場合はパラフィルムを使う)試験管を振って,溶媒が緑に,サンプルの残りかすが白くなっていればOK(残りかすに緑色が残った場合は,上澄みの吸光度測定後,残りかすについて,液体窒素で凍らすところから繰り返す)試験管は,氷水を張ったバットに立てておいて,温度が上がらないようにしておく3.遠心分離2の試験管の本数がある程度溜まったら,遠心分離機にかけ(5分くらい),葉の残りかすとクロロフィル・カロテノイドの溶けた溶媒とを分離する。遠心分離機に試験管を並べる際は,バランスよく並べる。吸光度の測定ガラスセルに溶媒を移す遠心分離機にかけた試験管から,上澄みを石英ガラスセルに静かに注ぐ。うまく注げない場合は,ピペット,ピペットマンを使用し,残りかすがセルに入らないよう,注意する。する分光光度計については,それぞれマニュアルをよく読むこと。分光光度計では下記の波長の吸光度を測定する。nm測定後,セルに残った溶媒は廃液入れに捨てる。