従って、遺伝子送達用の微小球のさらなる開発が必要であることが証明されている。望まれる長所は、血流により抗癌剤を腫瘍脈管構造に特異的に標的化させる能力である。栄養供給および老廃物除去の同時途絶を伴う腫瘍血液供給の妨害は、おそらく、腫瘍細胞の破壊のために最も望ましい結果である。agent)を、これらの作用物質用の担体として様々な種類のポリマー材料を用いて、哺乳動物に送達するための組成物および方法を提供する。好適な実施形態では、本発明は、上記作用物質の送達のための微粒子、特に微小球を提供する。好適な実施形態では、本発明は、トランスフェクション薬剤を利用してポリヌクレオチドを送達するための微粒子を提供する。【0025】より具体的には、好適な実施形態では、本発明において使用するポリマー材料担体は、本発明の生物活性治療因子およびトランスフェクション薬剤を「担持」できるか、またはそれらと会合できるあらゆる粒子を包含する。好適なポリマー材料は、塞栓し、かつ生物活性治療因子を放出するのに十分な大きさの、実質的に球体、実質的に親水性、不活性、イオン性かつ架橋されたポリマーに基づく。トランスフェクション薬剤と物理的に連結させており、微粒子にも連結している。(前癌性障害を含む)の治療のために利用する方法および装置を提供する。(b)ポリマー材料担体、および(c)トランスフェクション薬剤を含む組成物が提供される。本発明の別の好適な態様では、(a)生物活性治療因子をコードするポリヌクレオチド、(b)ポリマー材料担体、および(c)トランスフェクション薬剤を含む組成物が提供される。本発明の別の好適な態様では、(a)生物活性治療因子をコードするポリヌクレオチド、(b)ポリマー材料担体、および(c)リポポリアミントランスフェクション薬剤を含む組成物が提供される。合成のいずれかに由来するRNAおよびDNA(組換えRNAおよびDNA、ならびにアンチセンスRNAおよびDNAを含む);ハンマーヘッドRNA、リボザイム、アンチジーン(antigene)核酸、一本鎖および二本鎖の両方のRNAおよびDNA、ならびにそれらの類似体が挙げられるがこれらに限定されない。本発明のポリマー材料としては、アクリルポリマー、ビニルアルコールポリマー、アクリレート(acrylate)ポリマー、ポリ(乳酸)、ポリアクリルアミド、ポリ(無水物)、多糖類、シリコーン、またはそれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。好ましくは、ポリマー材料は、ポリアクリルアミドおよびその誘導体、ポリアクリレートおよびその誘導体、ならびにポリアリルおよびポリビニル化合物など、アクリルファミリーの実質的に親水性の架橋コポリマーである。これらのポリマーは全て架橋し、安定かつ非再吸収性である。それらの組合せなどの会合力が挙げられるがこれらに限定されない)により吸着されることが好ましい。トランスフェクション薬剤と会合させて複合体を形成する。高い疎水性など特定の性質を複合体に与えるトランスフェクト剤との複合体を形成する。ポリマー材料担体との物理的会合は、塩(塩化ナトリウムが挙げられるがこれに限定されない)、または造影剤(バリウムもしくはヨウ化物を含む塩など)の添加により増強され得るイオンおよび疎水性会合により生じる。vivoで加水分解可能な結合(エステルまたはオシジック(osidic)結合が挙げられるがこれらに限定されない)の使用によりモジュレートされてもよい。会合したペプチドを使用することによってもモジュレートされ得る(ペプチド結合は細胞タンパク質分解酵素で切断可能である)。本発明の別の態様では、血管を塞栓するための方法であって、それを必要とする患者の管に、治療有効量の生物活性治療因子を投与して、血管が効果的に塞がれるようにすることを含む方法を提供する。腫瘍を成長させる血管に同時にまたは順次送達される。コードするポリヌクレオチドを含む治療有効量の組成物を投与することを含み、該ポリヌクレオチドはトランスフェクション薬剤と会合し、該ポリヌクレオチド-トランスフェクション薬剤はポリマー材料担体とさらに会合して、血管が有効に塞がれる、上記方法を提供する。コードするポリヌクレオチドを含む治療有効量の組成物を投与することを含み、該ポリヌクレオチドはリポポリアミントランスフェクション薬剤と会合しており、該ポリヌクレオチド-トランスフェクション薬剤は実質的に親水性の微小球とさらに会合して、血管が有効に塞がれる、上記方法を提供する。コードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターまたはウイルス様粒子を含む治療有効量の組成物を投与することを含み、該ウイルスベクターまたはウイルス様粒子はトランスフェクション薬剤と会合し、該会合したウイルスベクター-トランスフェクション薬剤は実質的に親水性の微小球とさらに会合して、血管が有効に塞がれる、方法を提供する。コードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターまたはウイルス様粒子を含む治療有効量の組成物を投与することを含み、該ウイルスベクターまたはウイルス様粒子はリポポリアミントランスフェクション薬剤と会合し、該会合したウイルスベクター-トランスフェクション薬剤は実質的に親水性の微小球とさらに会合して、血管が有効に塞がれる、上記方法を提供する。コードするポリヌクレオチドと共に治療有効量の薬剤を投与することを含み、該ポリヌクレオチドはトランスフェクション薬剤と会合しており、該会合したポリヌクレオチド-トランスフェクション薬剤はポリマー材料担体とさらに会合して、新しい血管の形成が阻害される、上記方法を提供する。本発明の別の態様では、このような薬剤は、ポリマー材料担体に組み込まれて、同時に投与される生物活性治療因子の導入を妨害しないようにしてもよい。症状が緩和されるようにする、上記方法を提供する。group)遷移金属(例えば、バナジウム種、モリブデン種、タングステン種、チタニウム種、ニオビウム種、またはタンタル種)と共に含む。別の好適な実施形態では、本発明の組成物は、(a)生物活性治療因子をコードするポリヌクレオチド、(b)陽イオン架橋微粒子、および(c)リポポリアミントランスフェクション薬剤を、トランスフェクション増強剤と共に含む。別の好適な実施形態では、ポリヌクレオチドおよびトランスフェクション薬剤と会合した実質的に親水性のポリマー材料を疾患を患う哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物宿主へのポリヌクレオチド送達方法を提供する。後者の方法の実施形態としては、前記ポリヌクレオチドおよびトランスフェクション薬剤と会合した実質的に親水性のポリマー材料の投与が、遺伝子療法のためのものである実施形態、前記ポリマー材料微小球が投与部位にある管を塞栓するのに十分な大きさである実施形態、および前記ポリマー材料が投与部位にある管を塞栓するのに十分な大きさではないが、腫瘍に留まるには十分な大きさである実施形態が提供される。トランスフェクション薬剤と会合している、上記方法を提供する。本発明の別の態様では、上記のトランスフェクション薬剤に会合したポリマー材料担体/生物活性治療因子を、切除後の腫瘍の切除周縁に投与して、該部位における癌の局所再発および血管形成を阻害することを含む、腫瘍切除部位を治療する方法を提供する。おいて血管を塞栓する方法を提供する。おいて血管を塞栓する方法を提供する。トランスフェクション薬剤と会合している、上記方法を提供する。本発明の別の態様では、遺伝子材料に連結したトランスフェクション薬剤に連結した、血管を塞栓可能なポリマー材料を含む、能動的塞栓形成に適した微粒子を提供する。別の態様では、器官(例えば眼が挙げられるがこれに限定されない)の血管新生疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の生物活性治療因子を例えば眼に投与して、新しい血管の形成を阻害することを含む、上記方法を提供する。治療するのに適した組成物および方法を提供し、さらにその他の関連する利点を提供する。頸部の腫瘍、乳房の腫瘍、カポージ肉腫、ならびに表在性形態の膀胱癌が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の生物活性治療因子または組成物により治療され得る。トラコーマ(tracoma)、月経過多、ならびに脈管接着が挙げられるがこれらに限定されない。行うキットを提供する。コードするポリヌクレオチドに会合したトランスフェクション薬剤が他方のバイアルに含まれ、両方のバイアルの内容物を混合して医薬的組成物を形成する、キットを提供する。コードするポリヌクレオチドがさらに別のバイアルに含まれ、3つのバイアル全ての内容物を混合して医薬的組成物を形成する、キットを提供する。本発明の別の実施形態では、(a)塞栓形成に適した微小球の懸濁液、および(b)遺伝子材料を細胞に送達するのに適したトランスフェクション薬剤の成分が1つのバイアルに入った、キットを提供する。本発明の上記および他の態様は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照することにより明らかになるであろう。様々な参考文献を以下に記載するが、これらは参照によりその全体が本明細書に援用される。定義:本明細書で使用する「実質的に球形」とは、最も低い外部表面積を表す体積として画定される完全な球形に近い形状を全般的に意味する。具体的には、本発明でいう「実質的に球形」とは、粒子の任意の断面を見た際に、平均長手直径および平均短手直径の差が20%未満であることを意味する。本発明の微小球の表面は、1000倍におよぶ拡大で滑らかに見える。本発明の微小球は、粒子に加えて、本明細書に記載および定義する他の物質を含んでいてもよい。本明細書で使用する、本発明における「細胞接着プロモーター」とは、微小球中に存在または微小球と会合して、微小球表面への細胞の接着性を促進または増強する任意の物質を意味する。これらの物質は、共有結合を介してまたは相互貫入ポリマーの様式で、微小球の表面に会合するタンパク質であることが多い。対する生物学的もしくは生理学的応答を提供する任意の物質を指す。伴う炎症の影響を予防または減少させる抗炎症剤がある。本明細書で使用する、本発明における「化学修飾」とは、微小球の生成過程の途中、または微小球を様々な剤もしくは組織と混合もしくは接触させて、身体に注射後に腫瘍塞栓形成に加えて他の機能も行える能力を微小球が有する、微小球の化学性質および特徴の変化を意味する。エマルジョン、分散液、小胞などが挙げられる)の安定性を改善できる任意の物質を指す。プロドラッグが含まれる。「安定化物質」の定義にはまた、特定の本発明トランスフェクション薬剤も含まれる。対する組成物の高い耐性が例示され得る。head)は、C12GluPhCnN+およびC14GluPhCnN+などの化合物に見とめられるようにトランスフェクション効率を低下させるが、最短のスペーサーを有するDOTB/DOSCなどの化合物は、最も高い表面電荷密度および最良のトランスフェクション効率をもたらす。プロドラッグおよび/または生物活性剤の微小球からの放出を防ぐ意味において使用する「実質的に」という用語は、約50%を上回るものが放出が所望になるまで表面に会合したままであるかまたは微小球に含まれたままであることを意味し、好ましくは約60%を上回る、より好ましくは約70%を上回る、さらに好ましくは約80%を上回る、さらにより好ましくは約90%を上回るものが、放出が所望になるまで表面に会合したままであるか、あるいはまた治療薬剤形の場合には微小球に含まれたままであることを意味する。プロドラッグおよび/または生物活性剤はまた、放出が所望になるまで、完全に表面に会合したままであるか微小球に含まれたまま(すなわち、約100%が表面に会合したままであるか微小球に含まれたまま)であり得る。安定化物質の例としては、例えば、脂質、タンパク質、ポリマー、炭水化物、および界面活性剤が挙げられる。生物活性剤の周りに壁(すなわち、フィルム、膜など)を含んでいてもよいし、または実質的に壁または膜を欠いていてもよい。安定化物質は、所望であれば、小滴を形成してもよい。安定化物質はまた、塩および/または糖を含んでいてもよい。特定の実施形態では、安定化物質は、実質的(完全も含む)に架橋されていてもよい。安定化物質は、中性、正または負の電荷を有し得る。/または生物活性剤の連結を全般的に指す。架橋は、1つ以上のエレメント、基または化合物から構成されていてもよく、一般的に第1の安定化物質分子の原子を第2の安定化物質分子の原子に結合させる。架橋の橋は、共有会合および/または非共有会合を伴う。様々なエレメント、基、および/または化合物のいずれも、架橋における橋を形成することができ、安定化物質は自然にまたは合成的手段により架橋され得る。架橋は、ケラチン、インスリンおよび他のタンパク質におけるように、システイン残基のジスルフィド結合により結合したペプチド鎖から作られた物質において自然に生じ得る。架橋は、例えば、安定化物質などの化合物と、例えば熱、高エネルギー放射線などに曝露されることにより反応し得る架橋剤として作用し得る化学物質とを組み合わせるなどの適切な化学修飾によりもたらし得る。用いた架橋、高エネルギー放射線にょる非飽和物質の架橋、カルバミン酸ジメチルオールでの架橋などが挙げられる。/または生物活性剤を実質的に架橋させてもよい。本明細書で使用する「実質的に」という用語は、約50%を上回る安定化化合物が架橋を含むことを意味する。所望であれば、約60%、70%、80%、90%、95%を上回る、さらには100%の安定化化合物がそのような架橋を含む。安定化物質は、架橋されてなくてもよく(すなわち、約50%を上回る安定化化合物が架橋を欠く)、所望であれば、約60%、70%、80%、90%、95%を上回る、さらには100%の安定化化合物が架橋を欠く。本明細書で使用する「会合」とは、本発明の生物活性治療剤、トランスフェクション薬剤、および微小球の間の付着を指す。このような会合は、生物活性治療剤およびトランスフェクション薬剤である場合、複合体の形成を生じても生じなくてもよい。疎水相互作用(それぞれ、本明細書でさらに以下において定義する)を含むことを意図する。本明細書で使用する「共有会合」とは、2つの原子の結合軌道において電子の共有を伴う分子間会合または結合を指す。本明細書で使用する「非共有会合」とは、共有結合を伴わない2つ以上の別々の分子の分子間会合を指す。分子間相互作用は、例えば、関与する分子の極性、およびもし存在すれば関与する分子の電荷(正または負)など様々な要因に依存する。非共有会合は、イオン相互作用、双極子-双極子相互作用、ファン・デル・ワールス力、およびその組合せから選択される。本明細書で使用する「イオン相互作用」または「静電相互作用」とは、2つ以上の分子(それぞれ正または負に荷電されている)の分子間相互作用を指す。従って、例えば、「イオン相互作用」または「静電相互作用」とは、第1の正に荷電された分子と、第2の負に荷電された分子との間の引力を指す。イオンまたは静電相互作用としては、例えば遺伝子材料などの負に荷電された安定化物質と、例えば陽イオン脂質などの正に荷電された脂質(例えばラウリルトリメチルアンモニウムブロミド)との間の引力が挙げられる。本明細書で使用する「ファン・デル・ワールス力」とは、量子力学による非極性分子の間の引力を指す。ファン・デル・ワールス力は、一般的に、隣接する分子により誘導され、電子分布の変化を伴う一時的な双極子モーメントを伴う。本明細書で使用する「水素結合」とは、電気的陰性原子(例えば、酸素、硫黄または窒素)に共有結合した水素原子と、他の電気的陰性原子との間で生じ得る引力、または架橋を指す。水素結合は、第1の分子中の水素原子と、第2の分子中の電気的陰性原子との間で生じ得る(分子間水素結合)。水素結合は、両方とも単一の分子に含まれる水素原子と電気的陰性原子との間で生じ得る(分子内水素結合)。本明細書で使用する「親水相互作用」は、水と実質的に結合、水を吸収および/または水に溶解し得る分子または分子の部分を指す。これは、可逆ゲルの膨潤および/または形成を生じ得る。本明細書で使用する「疎水相互作用」は、水と実質的に結合しない、水を吸収しない、および/または水に溶解しない分子または分子の部分を指す。開示を明確にするために、限定するものではないが、本発明の詳細な説明を以下の副節に分ける。安全かつ効果的な方法を提供する。方法は、医師および/または執刀医(インターベンショナルX線技師が挙げられるがこれに限定されない)にとって有益である。本発明の方法および組成物は、手術の前、途中または後で執刀医により使用され得る。簡単に言うと、遺伝子療法において、遺伝子はDNAまたはRNAの分子として患者の細胞に送達される。遺伝子は、目的の遺伝子、および標的細胞において遺伝子の高レベルの発現を指令するプロモーター/エンハンサーエレメントを含む核酸の発現構築物-カセットの一部を形成する。DNAは、細胞中の酵素により、RNAメッセンジャー分子に転写され、これは遺伝子配列をタンパク質産物に翻訳するための鋳型を形成する。このタンパク質は、標的細胞または周りの組織に機能を発揮して、細胞欠損を補正するか、または腫瘍細胞などの細胞を殺す。)を補正すること、または治療的な目的のタンパク質の発現を確実にすることからなる。vivoで適切な組織に直接導入し得る。関与する様々なトランスフェクション技術がある。塞栓形成は、血液が流れる管の部分的または完全な閉塞である。治療的塞栓形成は、動脈または静脈を閉塞して、動静脈奇形などの機能障害を補正するか、充実性腫瘍/癌成長への必須要素の供給を止める目的で血流を止める処置である。一般的には、治療的塞栓形成は、塞栓物質が置かれる場所で活性分子が担持および/または送達されない点で、「受動的」な処置である。本発明は、トランスフェクト可能遺伝子材料の局所送達と、血流の減少とを協同で行う(両方とも癌細胞の減少または排除という同じ目的をもって作用する)「能動的」な塞栓形成に関する。(b)微小球担体、および(c)トランスフェクション薬剤を含む組成物を提供する。治療を必要とする哺乳動物に投与することによる、遺伝子療法の方法を提供する。適切なゲージの針を介して腫瘍または病んだ組織に直接投与する、方法を提供する。脈管系に注射することにより腫瘍または病んだ組織に送達する、方法を提供する。本発明の別の態様では、例えばタキソール、ドキソルビシン、シスプラチン、パクリタキセルなど(これらに限定されない)の抗新形成薬を含む組成物を、切除後に腫瘍の切除周縁に投与して、該部位における癌の局所再発および血管の形成を阻害することを含む、腫瘍切除部位を治療する方法を提供する。それらの組合せを含むようにできる。一実施形態では、微小球が、架橋したポリマーからなる粒子を含むために構造内に様々な特性を有する化学物質を含むことができるという事実、および表面共有結合に関連した特有の特徴を有するという事実により、本発明の微小球の化学修飾が可能になる。本発明の微小球の化学修飾はまた、投与後の微小球と隣接する細胞および組織との間の相互作用を介しても生じ得る。本発明の方法は以下の利点を有する:すなわち、(1)注射される物質は元々注射された組織から移動しにくいため、患者に対して投与を繰り返したりまたは有害な影響を与えることなく、意図する遺伝子療法を達成できる、(2)注射される物質は、生化学的にまたは免疫系もしくはリンパ系を介して消化、移動または排除されにくいので、本方法はより効果的かつ長く持続する、(3)物質は、18〜26ゲージの針または30ゲージ以下の針を介して注射されるのに十分な大きさであるため、本方法はより正確、有効、かつ患者に対する侵害性が低い、(4)注射される粒子は可塑性があるが脆くはなく、壊れることなく注射し易いため、簡単かつ安全な注射が得られる、ならびに(5)注射される粒子は、形が不揃いではなく、互いと凝集せず、同じく簡単かつ正確な注射が得られる。これらの利点は、単独でも組み合わさっても、治療効果を向上し、患者にとって安全、より好都合かつ快適である。本発明のポリヌクレオチドまたは他の遺伝子材料を送達するために、ポリヌクレオチドまたは他の遺伝子材料、およびトランスフェクション薬剤と会合できかつ活性部位を標的化できる任意のポリマー材料を使用してもよい。好適な実施形態では、この材料は、ポリヌクレオチドまたは他の遺伝子材料を担持して、塞栓する。本発明では、微粒子、最も好ましくは微小球を使用することが好ましい。幅広い種類のポリマー担体が本発明において利用でき、その代表的な例としては、ポリ(エチレン-酢酸ビニル)(40%架橋)、ポリ(D,L-乳酸)オリゴマーおよびポリマー、ポリ(L-乳酸)オリゴマーおよびポリマー、ポリ(グリコール酸)、乳酸およびグリコール酸のコポリマー、ポリ(カプロラクトン)、ポリ(バレロラクトン)、ポリ(無水物)、ポリ(カプロラクトン)またはポリ(乳酸)とポリエチレングリコールとのコポリマー、多糖類、シリコーン、ならびにそれらの配合物が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の薬剤送達の態様のために好ましいポリマー材料は微小球である。薬剤送達の実施形態では、トランスフェクション剤の使用は任意である。本発明で使用するマイクロビーズまたは微小球(本明細書においては集合的に微小球と称する)は、生物適合性で、親水性で、かつ実質的に球形で、非毒性のポリマーである。微小球は、18ゲージ以下の針を介して注射可能であり、免疫系またはリンパ系により排除されない。ポリマーは、細胞接着を促進する剤により被覆されることが好ましい。生細胞を微小球に付着させて、周囲組織と連結する層状細胞を形成して、ビーズの長期安定性を向上させてもよい。本発明の微小球は、弾性体、好ましくはアクリルポリマー、ビニルアルコールポリマー、アクリル酸ポリマー、多糖類、シリコーン、またはそれらの混合物からなる群より選択される弾性体を含む。好ましくは、この用途に有用な親水性コポリマーは、ポリアクリルアミドおよびその誘導体、ポリアクリレートおよびその誘導体、ならびにポリアリル化合物およびポリビニル化合物のようなアクリルファミリーのものである。別の実施形態では、本発明の微小球は、酢酸ポリビニルと陽イオン疎水性ポリマーとを組合せたものをベースにしてもよい。組織への細胞接着の促進など)を示す他の化学物質を含むことができる。本発明において使用する微小球は、組織および細胞に対して非毒性であり、生物適合性があり、かつそれらが促進する細胞成長により移植部位における様々な細胞および組織に対して接着性を有する。これらの微小球は、非再吸収性かつ非生物分解性であるため、安定性、耐久性を有し、所望の部位に移植された後はその全体的な形状および位置を維持する。代替的な実施形態では、本発明の微小球は、再吸収性を有するため、生物分解性である。このような再吸収性かつ生物分解性の微小球は、例えば、限定するものではないが、多糖類および多糖類誘導体に基づく。一般的に、本発明において使用する微小球は、いかなる形状を有してもよいが、実質的に球形の微小球が好ましい。本発明に使用する微小球は、約10μm〜約2000μmの直径を有し得る。表面に細胞が接着した本発明に使用する微小球は、40μm〜1000μmにわたる直径を有することが好ましい。本発明の弾性微小球は、18ゲージ以下の針を介して注射可能であり、マクロファージ、または免疫系もしくはリンパ系の他のエレメントにより排除されることが好ましい。このような場合、微小球の好ましい平均直径は約40μm〜約400μmであり、より好ましくは約50〜200μmである。好適な実施形態では、注射可能な微小球の平均直径は約70μm〜約120μmである。本発明の別の態様では、本発明に使用する微小球のサブセットは、種々のポリマーを含む、非毒性で、生物適合性で、膨潤性で、親水性であって、かつ実質的に球形の粒子をベースにしている。膨潤性の微小球は、水吸収性の高い架橋ポリマーであるため、特定の条件下で水溶性媒体と接触すると膨潤できる。当業者に理解されるように、架橋ポリマーの膨潤の程度は、一般的にポリマー材料の特性および架橋の程度に依存する。微小球が懸濁されるかまたは接触する溶剤の特性(塩濃度およびイオン濃度、ならびにpHレベルなど)もまた膨潤の程度に影響する。特定の架橋された膨潤性ポリマーの大きさおよび膨潤の程度を注意深く制御することにより、これらの微小球を使用して塞栓形成および遺伝子送達を達成することができる。本発明によれば、高い水吸収能力を有するポリマー材料をまず選択する。架橋の程度を制御することにより、これらのポリマーの膨潤性をさらに操作する。架橋度の制御は、当業者に知られているように、化学的にまたは照射により達成できる。【0095】より重要なことには、上記ポリマーを含む微小球の膨潤は、微小球を懸する溶剤を制御することによりさらに制御できる。これは、本明細書に開示するように2段階で達成できる。注射前の微小球の大きさを、使用する具体的な微小球に応じて適切な溶剤、塩濃度、およびpHレベルを用いて注意深く制御する。注射前の微小球は、元の大きさのままであってもよいし、該溶剤との接触により一定の程度まで膨潤してもよい。注射前膨潤を制御することで、微小球が30ゲージ以下の針を介して容易に注射されるようにする。組織と接触する場合に、微小球は、所定の大きさへとさらに膨潤してもよいし、注射前の大きさを保ったままでもよい。注射前膨潤の程度、従って注射後の膨潤は、使用する特定の微小球、ならびに治療される皮膚欠損の性質および位置により決定される。本発明で使用する微小球は、膨潤前に約10〜約400μmの直径を有する。膨潤前は、微小球の直径は、好ましくは約10〜約200μmであり、最も好ましくは約10〜約120μmである。注射および膨潤後、微小球は、約40μmを上回る、好ましくは約50μmを上回る、より好ましくは約70μmを上回る平均直径を有する。本発明の微小球は、元の大きさの約15倍まで膨潤可能である。注射後の微小球の完全に膨潤した大きさは、上記議論した様々な手段により制御されて、組織に潜在的な損傷を生じることなく注射部位に固定されるようにする。元の大きさ、使用する溶剤、微小球の注射前の膨潤などの要因に基づいて予め決まっている。従って、状況に必要な特定の塞栓療法(embolotherapy)遺伝子療法に応じて、具体的な注射計画が設計できる。微小球のこれらの大きさおよび特性は、30ゲージ以下の針を介して微小球を容易に注射でき、同時に、該微小球は、注射部位に固定され、マクロファージまたは免疫系の他のエレメントにより消化または排除されないほどに十分に大きいという点で有利である。他の固体物質に置き換えることが挙げられる。本発明はまた、米国特許第5,925,683号(その内容全体を参照により本明細書に援用する)に開示される液体のゲル化性溶液であり得る塞栓材料の使用を包含する。構成する可溶性直鎖状ポリマーも含む。調製されるか、または適切なカテーテルの使用を介して適所で生成される空の微小球(微粒気泡)の調製および/または注射も、本発明に包含される。本発明で使用する微小球または他の固体物質は、可塑性を有するため、変形したままではなく注射用器具および小さいカテーテルに容易に入りかつそれを通ることができるが、微小球はまた、移植プロセスの途中または後に生じる筋肉収縮応力に対して耐性である。微小球はまた、熱安定性であり、これは、容易かつ簡便な滅菌、および冷凍保存を可能にする。【0099】また、本発明で使用する微小球または他の固体物質は、懸濁液中で安定であり、これは、微小球または他の固体物質を、懸濁液中で処方および保存し、異なる液体と注射することを可能にする。具体的には、微小球の親水性によって、凝集を形成したり、保存容器および移植用器具(例えば、カテーテル、シリンジ、針など)の壁面へ付着することなく、特に無菌かつ発熱性の(発熱物質は含有しない)注射可用溶液の形態で、懸濁液に入れることが可能となる。一実施形態では、本発明の好適な微小球は、親水性かつ陽イオン性である。微小球は、中性親和性モノマー、二官能性モノマー、陽イオン電荷を有する1つ以上のモノマー、および任意に微小球を検出可能にする官能化モノマーのコポリマーを含むことが好ましい。微小球はまた、1つ以上の細胞接着プロモーター、およびマーキング剤を含んでもよい。コポリマーは、コポリマー形態で、約25〜約98重量%の中性親水性アクリルモノマー、約2〜約50重量%の二官能性モノマー、および陽イオン電荷を有する約0〜約50重量%の1つ以上のモノマーを含む親水性アクリルコポリマーであることが好ましい。例として、仏国特許第2,378,808号(参照により本明細書に援用する)に記載されるコポリマーを本発明に従って使用して、基礎(base)微小球コポリマーを調製できる。親水性アクリルモノマーとしては、アクリルアミドおよびその誘導体、メタクリルアミド及びその誘導体、またはヒドロキシメチルメタクリレートが使用できる。二官能性モノマーの例としては、N,N'-メチレン-ビス-アクリルアミド、N',N'-ジアリルタルチアミド(diallyltartiamide)、またはグリオキサール-ビス-アクリルアミドが挙げられるがこれらに限定されない。陽イオン電荷を有するモノマーとしては、第三級または第四級アミン基、好ましくはジエチルアミノエチルアクリルアミド、メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウム、またはアクリルアミドエチルトリエチルアンモニウムを担持するものが挙げられるがこれらに限定されない。好適な実施形態では、約25〜約98重量%のメタクリルアミド、約2〜約50重量%のN,N-メチレン-ビス-アクリルアミドを含むコポリマーを使用する。本発明の別の関連する態様では、塞栓材料の疎水性またはイオン特性は、必要であるならば、例えば炭化水素鎖および/または親水性イオン化可能化学基を(これらに限定されない)を導入することにより、改変できる。トランスフェクト剤との間の吸着強度のこのような改変はまた、塞栓材料と会合する生物活性治療因子の絶対量を制御するためにも使用できる。本発明の特に有利な一実施形態では、接着剤を網状にすることにより、微小球の安定性を高めることが可能である。agent)を選択できる(例えば、グルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、グリオキサールなど)。本発明の別の実施形態では、微小球を光線下でおよび身体中で可視化する。微小球を、それらの合成後にマーキングすることも可能である。これは、例えば、蛍光マーカー誘導体(例えば、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)、ローダミンイソチオシアネート(RITC)などを含む)の連結により行うことができる。(1986))に記載される条件下で調整され得るアシルアミノ-e-プロピオン-アミド)-3-トリヨード-2,4,6-安息香酸が挙げられる)が挙げられる。バリウム塩または磁鉄鉱塩の場合、出発モノマー溶液に粉末の形態で直接に導入できる。当該分野で周知の様々な種類の細胞接着プロモーターが本発明で使用できる。gの量で、微小球または他の固体基質に存在することが好ましい。微小球は、懸濁重合、点滴(drop-by-drop)重合、またはその他の当業者に公知の方法により調製する。化学組成など、得られる微小球の所望の特徴に依存する。Microbeadsを参照)。微小球は、コラーゲン(ゼラチンは変性コラーゲンである)などの接着剤を含むモノマーの水溶液から出発して調製する。溶液を、非水性で相溶性の溶剤と混合して、小滴の懸濁液を作り、これを、適切な触媒によるモノマーの重合により固体ゲルに変える。微小球を濾過または遠心分離により回収し、洗浄する。【0107】アフィニティークロマトグラフィーで周知の「リガンド固定化」という用語で称される化学結合手順により、細胞接着プロモーターまたはマーキング剤を微小球に導入する。別の導入方法は、微小球を構成するゲル網目構造に拡散させ、次いで、沈着または化学架橋により拡散分子を適所に捕捉するものである。本発明の微小球はまた、仏国特許第2,378,808号、米国特許第5,648,100号、同第5,635,215号および同第5,648,100号(それぞれ参照により本明細書に援用される)のような、当該分野において記載される標準的な重合方法により得ることができる。一般的に、溶液中でのモノマーの重合は、重合反応開始剤の存在下で、約0°C〜約100°C、および約40°C〜約60°Cの温度において実施する。重合開始剤は、酸化還元系から都合よく選択される。アルカリ金属過硫酸塩と、N,N,N',N'-テトラメチルエチレンジアミンまたはジメチルアミノプロピオニトリル、過酸化ベンゾイルなどの有機過酸化物、さらには2,2'-アゾ-ビス-イソブチロニトリルとの組合せを使用することが可能である。使用する開始剤の量は、当業者により、求められるモノマーの量および重合率に適応するようにされる。重合は、塊状でまたはエマルジョン中で実施できる。塊状重合の場合、種々の溶解成分および開始剤を含む水溶液を、均質媒体中で重合させる。これにより、水溶ゲルの塊を得て、次いでこれを、例えばスクリーンの網目を通すことにより微小球に分離することができる。【0111】エマルジョンまたは懸濁液重合は、好ましい調製方法である。所望の大きさの微小が直接得られるからである。これは、以下のように実施できる。種々の溶解成分(例えば、種々のモノマー、細胞接着剤)を含む水溶液を、水に混和しない液体有機相と共に、任意に乳化剤の存在下で攪拌混合する。攪拌速度を調節して、有機相中に水相エマルジョンを得て、所望の直径を有する小滴を形成する。開始剤の添加により重合を開始する。これは、発熱反応を伴い、その進展は反応媒体の温度を測定することにより追跡できる。これらの種々の溶液の混合物が使用できる。重合開始剤がいくつかの成分(酸化還元系)を含む場合、乳化前にそれらの1つを水相に添加することができる。【0113】このようにして得た微小球をその後、冷却、デカンテーション、および濾過により回収できる。これらを大きさの種類により分け、洗浄して、微量の二次産物を除去する。重合段階に続いて、細胞接着剤を網状化する段階を行うことができ、また、合成後の連結により微小球を識別可能にする場合にはマーキング剤の段階を行うことができる。それらの組合せである。おいては、ポリヌクレオチドは本発明の任意の生物活性治療因子をコードし得る。この場合該ポリヌクレオチドは本発明のトランスフェクション剤に会合している。本発明の生物活性治療因子をコードする遺伝物質としては、例えば、核酸、ポリヌクレオチド、天然起源または合成起源のRNAおよびDNA(組換えRNAおよびDNA、ならびにアンチセンスRNAおよびDNAを含む);ハンマーヘッドRNA、リボザイム、アンチジーン核酸、一本鎖および二本鎖の両方のRNAおよびDNA、ならびにその類似体(ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートオリゴデオキシヌクレオチドのようなもの)が挙げられるがこれらに限定されない。使用できる遺伝物質の種類としては、例えば、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体(YAC)、欠陥ウイルスまたは「ヘルパー」ウイルスなどの発現ベクターに担持された遺伝子、ならびに遺伝物質を担持するウイルス様粒子が挙げられる。このようなポリヌクレオチドは、例えば組織特異的エンハンサー、核局所化シグナルなど(これらに限定されない)の他のエレメントと組み合わせて使用することもできる。【0117】さらに、遺伝物質は、例えばタンパク質または他のポリマーと組合せてもよい。トランスフェクション剤と併用する標的化のためのポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の使用も提供する。(CFTR)の少なくとも一部をコードするDNA、IL-2の少なくとも一部をコードするDNA、TNFの少なくとも一部をコードするDNA、Rasの少なくとも一部をコードするDNAに結合可能なアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。特定のタンパク質をコードするDNAを、多くの異なる種類の疾患の治療のために使用し得る。envを与えてHIV感染を治療してもよい;アンチセンスras/p53を与えて肺癌を治療してもよい;アデノシンデアミナーゼを与えてADA欠乏症を治療してもよい;ならびに第VIII因子を与えて血友病Bを治療してもよい。744-746を参照のこと。本発明の微小球と会合した以下の薬剤を1つ以上含む。抗新生物剤としては、例えば、白金化合物(例えば、スピロプラチン、シスプラチンおよびカルボプラチン)、アドリアマイシン、マイトマイシンc、アンサマイトシン、ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、シトシンアラビノシド、アラビノシルアデニン、メルカプトポリリシン、ビンクリスチン、ブスルファン、クロラムブシル、メルファラン(例えば、PAM、L-PAMまたはフェニルアラニン・マスタード)、メルカプトプリン、ミトタン、塩酸プロカルバジン、ダクチノマイシン(アクチノマイシンD)、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、タクソール、マイトマイシン、プリカマイシン(ミトラマイシン)、アミノグルテチミド、エストラムスチンリン酸ナトリウム、フルタミド、酢酸ロイプロリド、酢酸メゲストロール、クエン酸タモキシフェン、テストラクトン、トリロスタン、アムサクリン(m-AMSA)、アスパラギナーゼ(L-アスパラギナーゼ)、エルウィナ(Erwina)アスパラギナーゼ、エトポシド(VP-16)、インターフェロンα-2a、インターフェロンα-2b、テニポシド(VM-26)、硫酸ビンブラスチン(VLB)、硫酸ビンクリスチン、メトトレキセート、およびカルゼレシン(carzelesin)が挙げられるがこれらに限定されない。血液製剤としては、例えば、エリスロポエチン、非経口鉄剤、ヘミン、ならびにヘマトポルフィリンおよびその誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。しては、例えば、ムラミールジペプチド、ムラミールトリペプチド、リンホカイン(例えばリポ多糖類、マクロファージ活性因子などの細菌エンドトキシン)、細菌(マイコバクテリア、コリネバクテリアなど)のサブユニット、合成ジペプチド、N-アセチル-ムラミール-L-アラニル-D-イソグルタミン、およびプロスタグランジンが挙げられるがこれらに限定されない。抗真菌剤としては、例えば、ケトコナゾール、ナイスタチン、グリセオフルビン、フルシトシン(5-fc)、ミコナゾール、アンホテリシンB、リシン、およびβラクタム抗生物質(例えば、スルファゼシン)が挙げられるが、これらに限定されない。spironolactone)、オキサンドロロン、オキシメトロン、プロメトロン、テストステロンシピオネート、フェニル酢酸テストステロン、エストラジオールシピオネート、およびノルエチノドレルが挙げられるがこれらに限定されない。acid)、レチノイドおよびその誘導体(パルミチン酸レチノールなど)、αトコフェロール、ナフトキノン、コルカルシフェロール、葉酸、ならびにテトラヒドロ葉酸塩が挙げられるがこれらに限定されない。オンコスタチンM、インターロイキン(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11および12)、金属タンパク質キナーゼリガンド、コラゲナーゼ、ならびにアゴニストおよびアンタゴニストが挙げられるがこれらに限定されない。本明細書で使用する抗体としては、例えば、実質的に精製された抗体またはそのフラグメント(非ヒト抗体またはそのフラグメントを含む)が挙げられるがこれらに限定されない。様々な実施形態において、本発明の実質的に精製された抗体、またはそのフラグメントは、ヒト抗体、非ヒト抗体、キメラ抗体、および/またはヒト化抗体であり得る。このような非ヒト抗体は、ヤギ、マウス、ヒツジ、ウマ、ニワトリ、ウサギ、またはラット抗体であり得る。本発明の非ヒト抗体は、キメラ抗体、および/またはヒト化抗体であり得る。完全ヒト抗体は、ヒト患者の治療処置のために特に望ましい。キメラ抗体は、各部分が、異なる動物種に由来する分子であり、例えば、マウスmAb由来の可変領域とヒト免疫グロブリンの定常領域とを有するものなどがある(Cabillyら、米国特許第4,816,567号;およびBossら、米国特許第4,816,397号、これらの内容全体を参照により本明細書に援用する)。本発明の範囲内にあると考えられる非ヒト抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得る。本発明のいずれの抗体も、治療的部分または検出可能物質とコンジュゲートできる。トランスフェクション剤と組合わせた標的化のためのポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の使用を提供する。このような抗体は、本発明の方法において有用であり、ポリマー材料、およびトランスフェクション剤に連結した生物活性治療因子を活性部位に標的化送達することを可能にする。本明細書で使用する「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、特定のエピトープと免疫反応可能な抗原結合部位を1種類のみ含む抗体分子の集合を指す。ポリクローナル抗体は、上述したように、本発明のポリペプチドを免疫原として適切な被検体を免疫化することにより調製できる。好ましいポリクローナル抗体組成物は、例えば、本発明の組成物で治療される腫瘍の癌細胞の表面にある受容体の1つ以上のポリペプチドに対する抗体について選択したものである。抗有糸分裂因子としては、例えば、エストラムスチン、およびそのリン酸化誘導体、リン酸エストラムスチン、ドキソルビシン、アンフェチニル(amphethinile)、コンブレタススタチンA4、およびコルヒチンが挙げられるがこれらに限定されない。【0129】ワクチンとしては、例えば、肺炎球菌ワクチン、灰白髄炎ウイルスワクチン、炭疽ワクチン、結核(BCG)ワクチン、A型肝炎ワクチン、コレラワクチン、髄膜炎菌A、C、Yワクチン、W135ワクチン、ペストワクチン、狂犬病(ヒト二倍体)ワクチン、黄熱ワクチン、日本脳炎ワクチン、腸チフス(フェノールおよび熱による不活性化した)ワクチン、B型肝炎ワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン、B型インフルエンザ菌ワクチン、ポリオワクチン、麻疹ワクチン、おたふく風邪ワクチン、風疹ワクチン、水痘ワクチン、肺炎連鎖球菌Ty(生変異型細菌)ワクチン、Vi(Vi莢膜多糖)ワクチン、DT(トキソイド)ワクチン、Td(トキソイド)ワクチン、aP(不活性細菌抗原/無細胞(DtaP))ワクチン、Hib(細菌多糖−タンパク質コンジュゲート)ワクチン、B型肝炎ウイルス(不活性血清由来ウイルス抗原/組換え抗原)ワクチン、インフルエンザワクチン、ロタウイルスワクチン、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)ワクチン、ヒトアストロウイルスワクチン、ロタウイルスワクチン、ヒトAおよびB型インフルエンザウイルスワクチン、A型肝炎ウイルスワクチン、生弱毒化パラインフルエンザウイルス3型ワクチン、エンテロウイルスワクチン、レトロウイルスワクチン、およびピコルナウイルスワクチンが挙げられるがこれらに限定されない。(第III期)、精巣癌、またはそれらの組合せが挙げられるがこれらに限定されない。酵素としては、例えば、アルカリホスファターゼ、シクロオキシゲナーゼI型、ならびにアゴニストおよびアンタゴニストが挙げられるがこれらに限定されない。抗アレルゲン性剤としては、例えばアメレキサノックス(amelexanox)が挙げられるがこれに限定されない。抗凝集剤としては、例えば、フェンプロクモン(phenprocoumon)、およびヘパリンが挙げられるがこれらに限定されない。循環剤としては、例えば、プロプラノロールが挙げられるがこれに限定されない。抗結核剤としては、例えば、パラアミノサリチル酸、イソニアジド、硫酸カプレオマイシン、シクロセリン、塩酸エタンブトール、エチオナミド、ピラジンアミド、リファンピン、および硫酸ストレプトマイシンが挙げられるがこれらに限定されない。抗ウイルス剤としては、例えば、アシクロビル、アマンタジン、アジドチミジン(AZTまたはジドブジン)、リバビリン、およびビダラビン一水和物(アデニンアラビノシド、ara-A)が挙げられるがこれらに限定されない。抗狭心症剤としては、例えば、ジルチアゼム、ニフェジピン、ベラパミル、四硝酸エリトリトール、二硝酸イソソルビド、ニトログリセリン(三硝酸グリセリン)、および四硝酸ペンタエリトリトールが挙げられるがこれらに限定されない。抗生物質としては、例えば、ダプソーン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、セファクロール、セファドロキシル、セファレキシン、セフラジンエリスロマイシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、アモキシシリン、アンピシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、ジクロキサシリン、シクラシリン、ピクロキサシリン(picloxacillin)、ヘタシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンG、ペニシリンV、チカルシリン、リファンピン、およびテトラサイクリンが挙げられるがこれらに限定されない。抗炎症剤および鎮痛剤としては、例えば、ジフルニサル、イブプロフェン、インドメタシン、メクロフェナム酸塩、メフェナム酸、ナプロキセン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、アスピリン、およびサルチル酸塩が挙げられるがこれらに限定されない。抗原生動物剤としては、例えば、クロロキン、メトロニダゾル、ヒドロキシクロロキン、キニーネ、およびメグルミンアンチモネートが挙げられるがこれらに限定されない。抗リウマチ剤としては、例えば、ペニシラミンが挙げられるがこれに限定されない。麻酔薬としては、例えば、アヘン安息香チンキおよびアヘン誘導体(コデイン、ヘロイン、メタドン、モルヒネおよびアヘンなど)が挙げられるがこれらに限定されない。強心配糖体剤としては、例えば、デスラノシド、ジギトキシン、ジゴキシン、ジギタリン、およびジギタリスが挙げられるがこれらに限定されない。神経筋遮断剤としては、例えば、アトラクリウムメシレート、ガラミントリエチオダイド、臭化ヘキサフルオレニウム、ヨウ化メトクリン、臭化パンクロニウム、塩化サクシニルコリン(塩化スキサメトニウム)、塩化ツボクラリン、および臭化ベクロニウムが挙げられるがこれらに限定されない。鎮静剤(催眠薬)としては、例えば、アモバルビタール、アモバルビタールナトリウム、アプロバルビタール、ブタバルビタールナトリウム、抱水クロラール、エトクロルビノール、エチナメート、塩酸フルラゼパム、グルテチミド、塩酸メトトリメプラジン、メチプリロン、塩酸ミダゾラムパラアルデヒド、ペントバルビタール、ペントバルビタールナトリウム、フェノバルビタールナトリウム、セコバルビタールナトリウム、タルブタール、テマゼパム、およびトリアゾラムが挙げられるがこれらに限定されない。局所麻酔薬としては、例えば、塩酸ブピバカイン、塩酸クロロプロカイン、塩酸エチドカイン、塩酸リドカイン、塩酸メピバカイン、塩酸プロカイン、および塩酸テトラカインが挙げられるがこれらに限定されない。全身麻酔薬としては、例えば、ドロペリドール、エトミデート、ドロペリドールを伴うクエン酸フェンタニール、塩酸ケタミン、メトヘキシタールナトリウム、およびチオペンタールナトリウムが挙げられるがこれらに限定されない。放射性粒子または放射性イオンとしては、例えば、ストロンチウム、レニウム、イットリウム、テクネチウム、およびコバルトが挙げられるがこれらに限定されない。抗腫瘍剤、ホルモン、ステロイド、抗真菌剤、ペプチド、またはペプチド類似体であることが好ましい。生物活性剤は、デキサメタゾン、アムホテリシンB、アドリアマイシン、マイトマイシンc、タキソール、ドキソルビシン、または組織プラスミノゲン活性化因子(t-PA)であることがより好ましい。本発明で使用する生物活性治療因子は、低濃度で高い活性を有するものであることが好ましい。本発明の標的化する態様により、治療のために適用する用量を低くすることが可能となる。治療部位における有効濃度が身体中で希釈されずに維持されるからである。投与する方法、患者の年齢、性別、体重および身体状態に依存する。一般的に、低い用量で治療を開始し、その後、状況下で所望の効果が得られるまで少しずつ増加する。Referenceなどの参考文献に依って、特定の生物活性治療因子の適切な量を決定することができ、さらにこのことから、本発明の方法を用いた組合せ治療薬剤および遺伝子療法の場合に患者に投与できる本発明の対応するプロドラッグの適切な量を決定することができる。)を治療する目的で患者(例えば、患者の部位)に送達する。プロドラッグは、上述したように使用するか、またはエマルジョンなどの他の実施形態に取り入れてもよい。核酸、ポリヌクレオチド、天然起源または合成起源のRNAおよびDNA(組換えRNAおよびDNA、ならびにアンチセンスRNAおよびDNAを含む);ハンマーヘッドRNA、リボザイム、アンチジーン核酸、一本鎖および二本鎖のRNAおよびDNA、ならびにそれらの類似体を含む遺伝物質を、例えば組織特異的エンハンサーおよび核局在化シグナルなどの(これらに限定されない)他のエレメントと組み合わせてまたはそれらと組み合わせずに、従来の形質転換技術またはトランスフェクション技術を介して真核生物細胞に導入できる。本明細書で使用する「形質転換」および「トランスフェクション」という用語は、外来核酸を宿主細胞に導入するための様々な当該技術分野で認められている技術を指すことを意図し、例えば、リン酸カルシウムもしくは塩化カルシウム共沈法、DEAE-デキストラン仲介型トランスフェクション、リポフェクション、またはエレクトロポーレーションが挙げられるがこれらに限定されない。宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトするのに適切な方法は、Sambrookら(前掲)、および他の研究マニュアルに見出し得る。哺乳動物細胞の安定したトランスフェクションに関しては、使用する発現ベクターおよびトランスフェクション技術によっては、ごく一部の細胞のゲノムにしか外来DNAが組み込まれないことが知られている。これらの組込み体を同定および選択するために、通常、選択マーカー(例えば、抗生物質に対する耐性)をコードする遺伝子を、目的の遺伝子と共に宿主細胞に導入する。好ましい選択マーカーとしては、G418、ハイグロマイシンおよびメトトレキセートのような薬剤に対する耐性を付与するものが挙げられる。導入した核酸により安定的にトランスフェクトされた細胞は、薬剤選択により同定できる(例えば、選択マーカー遺伝子を取り入れた細胞は生存し、他の細胞は死ぬ)。vivo導入を実現するために、様々なトランスフェクション剤が採用される。BRL)、ならびにオリゴガラクトース担持脂質(Remyら、出版予定)が挙げられるがこれらに限定されない。細胞への導入効率を高めることも、本発明に包含される。(17):6553-6)、リソホスファチド、リソホスファチジルコリン、リソホスファチジルエタノールアミン、および1-オレオイルリソホスファチジルコリンが挙げられるがこれらに限定されない。適切なトランスフェクション剤の好適な例としては、1992年12月15日にBehrらに付与された米国特許第5,171,678号、1995年12月19日にBehrらに付与された米国特許第5,476,962号、および1997年4月1日にBehrらに付与された米国特許第5,616,745号(これらの開示全体を参照により本明細書に援用する)に開示されるリポポリアミンが挙げられるがこれらに限定されない。本発明の特に好適なトランスフェクション剤は、1992年12月15日にBehrらに付与された米国特許第5,171,678号、1995年12月19日にBehrらに付与された米国特許第5,476,962号、および1997年4月1日にBehrらに付与された米国特許第5,616,745号に開示される一般式(I)のリポポリアミンを含む。一般式(I)のリポポリアミンは、真核生物細胞のトランスフェクションのためのベクターとして特に有用である。一般式(I)のリポポリアミンは、水に分散されると、イオン媒体において不安定であって、陽イオン部分を介してプラスミドまたはオリゴヌクレオチドDNAと強力に会合する単層状ナノ粒子を形成し、後者を密集化して脂質層で包む性質を有する。核酸に対して過剰量の陽イオン電荷を使用することにより、脂質/DNA複合体を細胞膜上に吸着して、細胞がDNAを摂取し易くしてもよい。一般式(I)のかかるリポポリアミンは、さらに、従来の方法(リン酸カルシウム共沈法またはデキストラン技術)の適用ではトランスフェクトできなかった脆弱な細胞(例として、中間下垂体細胞または前方下垂体細胞、クロム親和細胞、末梢ニューロンまたは中枢ニューロンが挙げられるがこれらに限定されない)をトランスフェクトすることができる。本発明の別の態様は、塞栓形成を伴うまたは伴わないベクターの送達に関する。発現ベクターは、本発明の生物活性治療因子またはポリペプチド(もしくはその一部)をコードする核酸を含むことが好ましい。本明細書で使用する「ベクター」という用語は、連結した別の核酸を輸送できる核酸分子を指す。1つの種類のベクターは「プラスミド」であり、これは、追加のDNAセグメントをライゲートできる環状の二本鎖DNAループを指す。別の種類のベクターは、追加のDNAセグメントをウイルスゲノムにライゲートできるウイルスベクターである。ウイルスベクターの具体的な例としては、本発明の微小球およびトランスフェクション剤を用いた遺伝子療法のためのアデノウイルスおよびレトロウイルスベクターが挙げられるがこれらに限定されない。含むウイルス様粒子の使用も本発明に含まれる。このようなウイルス様粒子は、ジスルフィド架橋形成を介してインテグリン結合ペプチドCYGGRGDTPにコンジュゲートしたポリエチレンイミン(PEI)を用いて設計され得る。特定のベクターは、導入される宿主細胞中で自律複製が可能である(例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム哺乳動物ベクター)。その他のベクター(例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター)は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれて、宿主ゲノムと共に複製される。特定のベクター、発現ベクターは、作用可能に連結した遺伝子の発現を指示することができる。一般的に、組換えDNA技術において利用する発現ベクターは、プラスミド(ベクター)の形態であることが多い。本発明は、等価の機能を果たすウイルスベクター(例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス)などの他の発現ベクターの形態も含むことを意図する。本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞中での核酸の発現に適した形態の本発明の核酸を含む。これは、組換え発現ベクターが、発現される核酸配列に作用可能に連結した、発現のために使用する宿主細胞に基づいて選択される1つ以上の調節配列を含むことを意味する。vitro転写/翻訳系、またはベクターが宿主細胞に導入される場合には宿主細胞において)該ヌクレオチド配列の発現が可能なように、目的のヌクレオチド配列が調節配列に連結されることを意味することを意図する。「調節配列」という用語は、プロモーター、エンハンサー、および他の発現制御エレメント(例えば、ポリアデニル化シグナル)を含むことを意図する。(1990)に記載されている。当業者には、発現ベクターの設計が、形質転換する宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどの要因に依存し得ることが理解されるであろう。本発明の発現ベクターは、宿主細胞に導入されて、本明細書に記載する核酸にコードされるタンパク質またはペプチド(融合タンパク質および融合ペプチドを含む)を生成できる。本発明の組換え発現ベクターは、原核生物(例えば、大腸菌)または真核生物(例えば、昆虫細胞(バキュロウイルス発現ベクターを使用)、酵母細胞もしくは哺乳動物細胞)における本発明のポリペプチドの発現のために設計できる。適切な宿主細胞は、Goeddel(前掲)においてさらに議論されている。vitroで転写および翻訳され得る。別の実施形態では、本発明の核酸は、哺乳動物発現ベクターを用いて、哺乳動物細胞において発現される。6:187-195)が挙げられる。哺乳動物細胞で使用する場合、発現ベクターの制御機能は、ウイルス調節配列により提供されることが多い。使用されるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス2、サイトメガロウイルス、およびシミアンウイルス40由来のものである。原核生物細胞および真核生物細胞の両方に適切な他の発現系については、Sambrookら(前掲)の第16章および第17章を参照のこと。別の実施形態では、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型において優先的に核酸の発現を指示することができる(例えば、組織特異的調節エレメントを核酸を発現するために使用する)。組織特異的調節エレメントは当該分野で公知である。264,166号)が挙げられる。3:537-546)などの発生段階に伴って調節されるプロモーターも包含される。本発明は、発現ベクターにアンチセンス方向でクローニングされる本発明のDNA分子を含む組換え発現ベクターをさらに提供する。DNA分子は、所与のポリペプチドをコードするmRNAにアンチセンスであるRNA分子の発現が(DNA分子の転写により)可能なように調節配列に作用可能に連結される。細胞型特異的発現を指示する調節配列を選択できる。アンチセンス発現ベクターは、組換えプラスミド、ファージミド、または弱毒化ウイルスの形態であり得、その中でアンチセンス核酸は高効率調節領域の制御下で生成され、その活性はベクターが導入される細胞型によって決定され得る。1986)を参照のこと。本発明の一態様では、DNA鋳型上の毒素遺伝子に組織特異的エンハンサーおよび/またはプロモーターを供給することで、癌細胞において該遺伝子の発現を集中させることにより、様々な癌を治療できる。毒素遺伝子としては、ジフテリア毒素遺伝子が挙げられるがこれに限定されない。ジフテリア毒素の細胞内発現は、細胞を殺すことが知られている。特定のプロモーターの使用は、膵臓癌のために膵臓特異的プロモーターを用いるなど、組織特異的であり得る。この戦略は、膵臓癌の治療のために使用できる。組織特異的エンハンサーは、ジフテリア毒素の発現が膵臓細胞においてのみ生じることを確実にする。組織特異的エンハンサーの制御下で、ジフテリア毒素遺伝子を含むDNA/リポポリアミン/微小球複合体を、膵臓に栄養を補給しているカニューレ挿入動脈に直接導入する。特定の投薬スケジュールに合わせて、膵臓組織を根絶するのに必要な期間だけ注入を行い得る。ジフテリア毒素以外の他の致死遺伝子(例えば、リシンまたはコブラ毒因子またはエンテロトキシンをコードする遺伝子など)も、同様の効果で使用できる。プロモーター/エンハンサーを使用して、本発明の生物活性治療因子を前立腺癌の治療が必要な患者の前立腺に向けさせることである。(およびこの遺伝子ファミリーの他のメンバー)など(これらに限定されない)の遺伝子の導入により、特定の癌を治療することもできる。目的で、欠失を有するアデノウイルスが適切なビヒクルとして提案されてきた。アデノウイルスは、非エンベロープDNAウイルスである。アデノウイルス由来の遺伝子導入ベクター(いわゆるアデノウイルスベクター)は、このような目的のための遺伝子導入に特に有用となる多数の特徴を有している。アデノウイルスの生物学は詳細に解析されている。アデノウイルスはヒトの重大な病理に関連しておらず、該ウイルスはそのDNAを非常に効率的に宿主細胞に導入し、該ウイルスは幅広い種類の細胞を感染させることができ、広範な宿主範囲を有し、該ウイルスは比較的容易に大量生産でき、該ウイルスは、特にウイルスゲノムの初期領域(early-region)1(E1)における欠失により複製をできなくすることが可能である。kDa末端タンパク質を有する、約36,000塩基対の線状二本鎖DNA分子である。ウイルス複製起点は、ITR内のゲノム端に正確に位置する。DNA合成は、2段階で生じる。鎖が転置(displacement)し、娘二本鎖分子および転置した親鎖を生成することにより複製が進行する。転置した鎖は一本鎖であり、いわゆる「パンハンドル(panhandle)」中間体を形成し、これは複製の開始および娘二本鎖分子の生成を可能にする。ゲノムの両端から同時に複製が進行して、パンハンドル構造を形成する必要がないようにする。増殖性(productive)感染サイクルの間、ウイルス遺伝子は、2つの段階(ウイルスDNA複製までの期間である前期、およびウイルスDNA複製の開始と同時に始まる後期)で発現される。加えて後期ウイルス遺伝子生成物が発現され、宿主細胞のDNA合成およびタンパク質合成が中断される。構造および特性が多少異なる様々なアデノウイルス血清型がある。これらの血清型のうち、本発明の範囲内においては、2または5型ヒトアデノウイルス(Ad2もしくはAd5)、または動物由来源のアデノウイルスの使用が好ましい(その開示全体を参照により本明細書に援用する特許出願公報WO94/26914号を参照)。81)、ヒツジ、ブタ、トリ、あるいはまたサル(例:SAV)由来のアデノウイルスが考えられる。VR-800)]である。好ましくは、ヒト、イヌまたは混合した起源のアデノウイルスを本発明の方法に使用し得る。アデノウイルスと、目的の遺伝子を含むカセットを特に担持するプラスミドとの相同組換えにより調製できる。相同組換えは、アデノウイルスおよびプラスミドの適切な細胞系への同時トランスフェクションの後に生じる。好ましくは使用する細胞系は、(i)上記エレメントにより形質転換可能であるべきであり、かつ、(ii)アデノウイルスゲノムの欠失部分を補充できる配列を、組換えの危険性を回避するために好ましくは組み込まれた形態で含むべきである。WO94/26914号および仏国特許第2,707,664号にも記載されている(それぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する)。レトロウイルスベクターは、高い感染効率、および標的細胞染色体におけるウイルス伝染型情報の安定した同線上(co-linear)組込みなどレトロウイルス複製サイクルの特徴を利用する哺乳動物のための遺伝子導入ビヒクルである。レトロウイルスベクターは、基礎的研究、バイオテクノロジーおよび遺伝子療法における重要なツールとなりつつある。現在使用されているほとんどのレトロウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス(MLV)に由来している。MLVは、様々な細胞型においてよく立証されている転写パターン、および比較的単純なモジュール(modular)遺伝子構造により、特にベクターとして適している。【0175】レトロウイルス構造:レトロウイルスは、エンベロープ化ウイルスに属する。二重脂質エンベロープは宿主細胞膜から誘導され、ウイルス表面タンパク質(SU)および膜貫通タンパク質(TM)の挿入により改変される。マトリックスタンパク質(MA)は、内部コアを囲む外膜の直下に位置する。コアは、キャプシドタンパク質(CA)からなる。キャプシドの内部には、5'側端において水素結合を介して互いと付着した2コピーのレトロウイルスゲノムが存在する。ウイルスコア粒子は、ウイルス酵素:逆転写酵素(RT)、プロテアーゼ(PR)およびインテグラーゼ(IN)、ならびにウイルスゲノムに結合したヌクレオキャプシドタンパク質(NC)も含む。ウイルスにコードされたこれらのタンパク質の他、ビリオンは、宿主のtRNA集合に由来する多数のtRNA分子も含む。【0176】マウス白血病ウイルス(MLV)は、単純レトロウイルスに属する。レトロウイルスは、特徴的なゲノムマップを有する:3つの構造遺伝子gag、polおよびenvを挟む2つの長末端反復配列(LTR)。LTRは、3つの領域に細分化され得る:細胞転写機構に認識されるエンハンサーエレメントおよびプロモーターエレメントを含むU3領域、逆転写の間に役割を果たし、さらにポリアデニル化シグナルを含むR領域、ならびに逆転写およびレトロウイルスゲノムのパッケージングに重要な配列を含むU5領域。LTRは、組込みプロセスの間重要となる逆方向反復配列であるシスエレメントを含む。組み込まれたプロウイルスは、gag-およびgag-polポリプロテイン(polyprotein)をコードする完全長mRNA、ならびにエンベロープ糖タンパク質をコードするスプライシングされたmRNAの2つのmRNA転写産物を生じる。完全長mRNAは、ゲノムRNAとしても作用し、LTR部分の既に記載した成分の他に、3つの重要なシスエレメントを5'側非翻訳配列に含む。U5領域の下流に位置するプライマー結合部位(PBS)は、プライマーtRNA分子の3'側端に相補的な18ヌクレオチドからなる。5'側非翻訳領域には、PBSとgagオープンリーディングフレームの開始部位との間に、パッケージングシグナル(Ψ)が位置している。5'側非翻訳領域は、ビリオン中の2つのウイルスゲノムの二量体化に関与する二量体連結ドメインをさらに含む。(PP)があり、これはAおよびG残基の配列からなる。このエレメントは、逆転写の間、プラス鎖DNA合成を開始する部位として役割を果たす。【0178】レトロウイルスのライフサイクル:宿主細胞質へのウイルス粒子侵入を説明するのに2つの異なるメカニズムが提案されている。MLVを含むほとんどのレトロウイルスは、エンベロープに包まれたウイルス粒子全体がエンドソーム体に取り込まれるプロセスである受容体仲介型エンドサイトーシスを介して、宿主細胞に侵入すると考えられている。エコトロピックマウス白血病ウイルスに対する受容体分子はクローニングされ、陽イオンアミノ酸輸送体であることが特定されている。【0179】ウイルスコア粒子が宿主細胞の細胞質に侵入した後、組み込まれた二本鎖DNAプロウイルスをもたらす全ての酵素的機能は、先の宿主細胞中で合成されて、ビリオンに輸送されるウイルスタンパク質により行われる。コア粒子の侵入後のウイルスタンパク質の宿命は明確でないが、逆転写酵素、インテグラーゼおよびキャプシドタンパク質はRNAゲノムと共に残り、核タンパク質を形成し、この中で逆転写が生じる。最近、マトリックスタンパク質も、核タンパク質複合体と関連することが分かった。逆転写に続いて、核タンパク質複合体は、宿主細胞核に移動する。INタンパク質が哺乳動物細胞で生成された場合に核に局在化することから、INタンパク質が重要であることが示唆されている。核への核タンパク質複合体の侵入は、有糸分裂を必要とする。これはおそらく、核タンパク質複合体が核エンベロープを貫通することができないためである。核に入ると、INタンパク質によって組込みが仲介される。INタンパク質は、LTRの末端部にある保存された逆方向反復配列を認識し、両方の鎖の3'側ヒドロキシ末端から2塩基を除去する。INタンパク質はまた、宿主DNAにおける切断を触媒し、プロウイルスDNAと宿主DNAとの連結を仲介する。組込みの特異性に関して、共通する宿主DNA標的配列は見とめられていないが、DNアーゼI-過剰反応(hypersensitive)部位付近に組み込む傾向があることが報告されている。単純レトロウイルス(MLVを含む)については、転写および翻訳は宿主細胞の機構により行われる。複雑なウイルス(HIVおよびHTLVを含む)は、転写調節に関与する転写促進タンパク質をコードする。MLV粒子の構築は、宿主の膜にて行われ、該プロセスは出芽プロセスと同時に起こる。哺乳動物BおよびC型ウイルス(それぞれMMTVおよびHTLV)において、ウイルスコア粒子は宿主細胞の細胞質中で構築される。ウイルスゲノムRNAのキャプシド被包は、シス作用キャプシド被包シグナルと、Gag-またはGag-Pol前駆体タンパク質のNC部分との結合により仲介される。出芽後、Gag-およびGag-Polポリプロテインは、ウイルスプロテーゼ(PR)により切断される。ウイルスタンパク質の成熟により、ビリオンの形態に全体的な変化が生じる。ウイルス粒子の出芽後のウイルスポリプロテインのタンパク質分解切断に加えて、ゲノムRNAは成熟プロセスを経て、コンパクトな二量体ゲノムを生じる。【0183】レトロウイルスベクター:レトロウイルスプラスミドベクターの起源とすることができるレトロウイルスとしては、モロニーマウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ラウス肉腫ウイルスなどのレトロウイルス、ハーベイ(Harvey)肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、アデノウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳腺癌ウイルスが挙げられるがこれらに限定されない。一実施形態では、レトロウイルスプラスミドベクターは、モロニーマウス白血病ウイルスに由来する。【0184】ベクターは、1つ以上のプロモーターを含む。III、およびβアクチンプロモーターを含む(これらに限定されない)、真核生物細胞プロモーターなどの細胞プロモーター)が挙げられるがこれらに限定されない。使用できるその他のウイルスプロモーターとしては、アデノウイルスプロモーター、チミジンキナーゼ(TK)プロモーター、およびB19パルボウイルスプロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。適切なプロモーターの選択は、本明細書に含まれる教示から当業者には明らかであろう。目的の生物活性治療因子をコードする核酸配列を、適切なプロモーターの制御下におく。使用できる適切なプロモーターとしては、アデノウイルス主要後期プロモーターなどのアデノウイルスプロモーター、またはサイトメガロウイルス(CMV)プロモーターなどの異種プロモーター;呼吸器合胞体ウイルス(RSV)プロモーター;MMTプロモーターなどの誘導性プロモーター;メタロチオネインプロモーター;熱ショックプロモーター;アルブミンプロモーター;ApoAIプロモーター;ヒトグロブリンプロモーター;単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモーターなどのウイルスチミジンキナーゼプロモーター;レトロウイルスLTR(上述した改変レトロウイルスLTRを含む);βアクチンプロモーター;およびヒト成長ホルモンプロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。プロモーターはまた、目的の生物活性治療因子をコードする遺伝子を制御する天然型プロモーターであってもよい。【0186】レトロウイルスプラスミドベクターを使用して、パッケージング細胞系を形質導入して、プロデューサー細胞系を形成する。(1990)(その全体を参照により本明細書に援用する)に記載されるDNA細胞系が挙げられるがこれらに限定されない。ベクターは、当該分野で公知の任意の手段により、パッケージング細胞を形質導入し得る。このような手段としては、エレクトロポーレーション、リポソームの使用、およびCaPO4沈降が挙げられるがこれらに限定されない。【0187】プロデューサー細胞系は、目的の生物活性治療因子をコードするポリヌクレオチド配列を含む感染性レトロウイルスベクター粒子を生成する。vivoのいずれかで形質導入してもよい。形質導入された真核生物細胞は、目的の生物活性治療因子をコードするポリヌクレオチド配列を発現する。ケラチノサイト、内皮細胞、および気管支上皮細胞が挙げられるがこれらに限定されない。一実施形態では、目的の生物活性治療因子をコードするポリヌクレオチド配列を含むレトロウイルスプラスミドベクターを、上述したように脂質に結合させて、その後宿主に投与してもよい。必要とする患者に投与する前にこれを本発明の微小球と混合してもよい。本発明は、さらに、塞栓形成を伴うまたは伴わない、アンチセンス核酸分子の送達を包含する。アンチセンス核酸分子は、本発明のポリペプチドをコードするセンス核酸に相補的(例えば、二本鎖cDNA分子のコード鎖に相補的、またはmRNA配列に相補的)な分子である。従って、アンチセンス核酸は、センス核酸に水素結合できる。アンチセンス核酸は、コード鎖全体、またはその一部のみ(例えば、タンパク質コード領域(すなわちオープンリーディングフレーム)の全体または一部)に相補的であり得る。アンチセンス核酸分子は、本発明のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列のコード鎖の非コード領域の全体または一部に対してアンチセンスであり得る。非コード領域(「5'側および3'側非翻訳領域」)は、コード領域を挟む5'側および3'側配列であり、アミノ酸に翻訳されない。【0190】アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約5、10、15、20、25、30、35、40、45または50ヌクレオチドの長さを有する。本発明のアンチセンス核酸は、当該分野で公知の手順により、化学合成および酵素ライゲーション反応を用いて構築できる。アンチセンス核酸(例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド)は、天然型ヌクレオチド、または分子の生物学的安定性を高めるように、もしくはアンチセンスとセンス核酸とで形成される二本鎖の物理的安定性を高めるように設計された様々に改変されたヌクレオチドを用いて(例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドが使用できる)、化学的に合成することができる。【0192】アンチセンス核酸を生成するために使用できる改変型ヌクレオチドの例としては、5-フルオロウラシル、5-ブロモウラシル、5-クロロウラシル、5-ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、4-アセチルシトシン、5-(カルボキシヒドロキシルメチル)ウラシル、5-カルボキシメチルアミノメチル-2-チオウリジン、5-カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β-D-ガラクトシルキュェオシン、イノシン、N6-イソペンテニルアデニン、1-メチルグアニン、1-メチルイノシン、2,2-ジメチルグアニン、2-メチルアデニン、2-メチルグアニン、3-メチルシトシン、5-メチルシトシン、N6-アデニン、7-メチルグアニン、5-メチルアミノメチルウラシル、5-メトキシアミノメチル-2-チオウラシル、β-D-マンノシルキューオシン、5'-メトキシカルボキシメチルウラシル、5-メトキシウラシル、2-メチルチオ-N6-イソペンテニルアデニン、ウラシル-5-オキシ酢酸(v)、ワイブトキソシン、プソイドウラシル、キュェオシン、2-チオシトシン、5-メチル-2-チオウラシル、2-チオウラシル、4-チオウラシル、5-メチルウラシル、ウラシル-5-オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル-5-オキシ酢酸(v)、5-メチル-2-チオウラシル、3-(3-アミノ-3-N-2-カルボキシプロピル)ウラシル、(acp3)w、および2,6-ジアミノプリンが挙げられる。【0193】あるいはまた、アンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス方向でサブクローニングされた(すなわち、挿入された核酸から転写されるRNAが、以下の副節にさらに記載する目的の標的核酸に対してアンチセンス方向になる)発現ベクターを用いて生物学的に生成できる。situで生成されて、選択された本発明のポリペプチドをコードする細胞mRNAおよび/またはゲノムDNAとハイブリダイズまたは結合して(例えば、転写および/または翻訳を阻害することにより)発現を阻害する。ハイブリダイゼーションは、従来のヌクレオチド相補性により安定した二本鎖を形成するか、または、例えば、DNA二本鎖と結合するアンチセンス核酸分子の場合には、二重らせんの主溝における特異的な相互作用を介して行われ得る。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の例としては、特定の組織部位での、アンチセンス核酸分子/リポポリアミントランスフェクション剤複合体/微小球の直接注射が挙げられる。【0195】あるいはまた、アンチセンス核酸分子は、標的選択細胞への送達のために改変された後に、本発明の微小球およびトランスフェクション剤を用いて全身投与できる。全身投与のためには、アンチセンス分子を、選択された細胞表面上で発現される受容体または抗原に特異的に結合できるように(例えば、アンチセンス核酸分子を、細胞表面受容体または抗原に結合するペプチドまたは抗体に連結させることにより)改変できる。このようなペプチドまたは抗体は、本発明の微小球およびトランスフェクション剤で得ることができる向上された送達を増強する役割を果たすことができる。アンチセンス核酸分子はまた、上述したベクターを用いて細胞に送達できる。IIIプロモーターの制御下におかれるベクター構築物が好ましい。本発明のアンチセンス核酸分子は、αアノマー核酸分子であり得る。15:6625-6641)。215:327-330)を含むことができる。本発明は、さらにリボザイムも包含する。リボザイムは、相補的領域を有するmRNAなどの一本鎖核酸を切断できる、リボヌクレアーゼ活性を有する触媒RNA分子である。334:585-591に記載))を使用して、mRNA転写産物を触媒的に切断して、mRNAによりコードされるタンパク質の翻訳を阻害できる。本発明のポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異性を有するリボザイムは、目的の標的遺伝子のヌクレオチド配列に基づいて設計できる。RNAの誘導体を構築できる。本発明の生物活性治療因子をコードするmRNAを使用して、特異的リボヌクレアーゼ活性を有する触媒RNAを、RNA分子のプールから選択できる。261:1411-1418を参照のこと。本発明はまた、三重らせん構造を形成する核酸分子を包含する。ポリペプチドをコードする遺伝子の調節領域(例えば、プロモーターおよび/またはエンハンサー)に相補的なヌクレオチド配列を標的化して、標的細胞において遺伝子の転写を防ぐ三重らせん構造を形成することにより、本発明の生物活性治療因子の発現は阻害され得る。14(12):807-15を全般的に参照のこと。リン酸骨格において改変され得る。4(1):5-23を参照)。本明細書で使用する「ペプチド核酸」または「PNA」という用語は、デオキシリボースリン酸骨格がプソイドペプチド骨格により置換され、4つの天然核酸塩基のみが保持された核酸模倣体(例えばDNA模倣体)を指す。PNAの中立(neutral)骨格は、低いイオン強度条件下においてDNAおよびRNAに対する特異的なハイブリダイゼーションを可能にすることが示されてきた。93:14670-675に記載される標準的固相ペプチド合成プロトコールを用いて行うことができる。【0200】PNAは、本発明の治療的および診断的用途において使用できる。PNAは、(例えば、転写もしくは翻訳の停止を誘導するか、複製を阻害することにより)遺伝子発現の配列特異的モジュレーションのためのアンチセンスまたはアンチジーン剤として使用できる。93:14670-675)使用できる。別の実施形態では、親油性もしくは他のヘルパー基(group)をPNAに付着させることにより、PNA-DNAキメラの形成により、または最も好ましくはリポポリアミンをトランスフェクション剤として使用して、PNAを本発明の微小球と会合させる前に複合体化させることにより、例えばPNAの安定性または細胞摂取を向上させるためにPNAを改変できる。PNA-DNAキメラは、PNAおよびDNAの有利な特性を組み合わせて生成できる。このようなキメラは、PNA部分が高い結合親和性および特異性を提供しながら、DNA認識酵素(例えばRNアーゼHおよびDNAポリメラーゼ)がDNA部分と相互作用することを可能にする。(1996)、前掲)。24(17):3357-63に記載されるように行うことができる。標準的ホスホロアミダイト結合化学および改変型ヌクレオシド類似体を使用して、固相支持体上でDNA鎖を合成できる。17:5973-88)。24(17):3357-63)。5:1119-11124)。group)を含むことができる。5:539-549を参照)で改変できる。ハイブリダイゼーション誘発型切断剤など)とコンジュゲートさせてもよい。一態様は、微小球を用いた、哺乳動物への、薬剤、ワクチン、および診断薬、または造影剤の投与である。この実施形態は、トランスフェクション剤の使用を必ずしも必要としない。このような剤は、微小球および生物活性剤と会合する(すなわち、リンカーとして作用する)能力、またはエンドサイトーシスを改善する能力のために選択できる。本発明の一態様では、血管に治療有効量の生物活性治療因子/トランスフェクション剤/微小球組成物を送達して、血管を有効に閉塞するステップを含む、血管を塞栓するための方法を提供する。血管を閉塞するために適した治療有効量は、上記開示に基づき容易に決定できる。/トランスフェクション剤/微小球組成物は、腫瘍に栄養を与える血管に送達される。簡単に言うと、器官または領域への血液供給を減少または止めることが望ましい臨床的状況(例えば、出血、腫瘍発達)は多数ある。以下にさらに詳細に記載するように、これは、本発明の生物活性治療因子/トランスフェクション剤/微小球組成物を、選択的に位置された針またはカテーテルを介して、所望の血管に注射することにより達成され得る。組成物は、脈管構造に留められるまで血流を介して進み、そして物理的(または化学的)に血管を閉塞する。選択された領域への血流の減少または停止は、梗塞(酸素および栄養の不充分な供給による細胞死)、または損傷した管からの出血の減少をもたらす。迅速および持続的、滅菌性、かつ処置時に異なる形状または大きさで容易に入手可能であることが好ましい。放出をもたらすことが好ましい。脈管系に注射された後に15〜200μmの予想大きさを有する。これらは、溶液中または注射後に、大きい粒子に凝集しないことが好ましい。好ましい組成物は、使用前の保存期間中に物理的な特性が変化しない。言うと、良性腫瘍は、塞栓形成療法のみで上手く治療される場合があり得る。このような腫瘍の例としては、脈管由来源の単純腫瘍(例えば、血管腫)、甲状腺腫などの内分泌腫瘍、および良性骨腫瘍が挙げられる。他の腫瘍(例えば、腎腺癌)については、手術前塞栓形成を、外科的切除の数時間または数日前に採用して、手術中の出血の減少、手術時間の短縮、および腫瘍の外科的な操作による生存可能な悪性細胞の散布の危険性を低下し得る。迷走神経腫を含む多くの腫瘍は、手術前に上手く塞栓され得る。塞栓形成はまた、手術不可能な悪性腫瘍の主要な治療様式としても利用されて、進行した疾患を患う患者の生存期間を延長し得る。気管圧縮などの不快な症状を緩和することにより、悪性腫瘍を患う患者の生活の質を有意に改善し得る。得られる最大の利点は、類癌腫および他の内分泌新生物(例えばインスリノーマおよびグルカゴノーマ)からの転移はゆっくりと成長するかもしれないがそれらが生成する内分泌性症状により多大な苦痛を生じ得る悪性内分泌性腫瘍の体液性影響を患う患者において、見とめられ得る。一般的に、本発明の生物活性治療因子/トランスフェクション剤/微小球組成物を利用する塞栓形成療法は、典型的に、部位とは関係なく同じように行われる。動脈または静脈に挿入されたカテーテルを介して注射することにより、塞栓される領域の血管造影撮影をまず行う。カテーテルは、経皮的にまたは手術により挿入され得る。カテーテルを介して、本発明の生物活性治療因子/トランスフェクション剤/微小球組成物を、流れがやむのが見とめられるまで還流させることにより血管を塞栓する。閉塞は、血管造影撮影を繰り返すことにより確認できる。含む組成物の分布を生じる。動脈内腔を塞ぐ塞栓粒子の物理的なバルクは、血液供給の閉塞をもたらす。存在は、腫瘍または脈管塊に供給する新しい血管の形成を防いで、血液供給を中断させる除活効果を向上させる。従って、本発明の生物活性治療因子/トランスフェクション剤/微小球組成物を利用して、様々な種類の腫瘍が塞栓され得ることが明らかであろう。簡単に言うと、腫瘍は、典型的に2つのクラス(良性および悪性)に分類される。良性腫瘍においては、細胞は、分化特徴を維持したままであり、全く非制御的には分裂しない。腫瘍は、局所に留まり、非転移性である。悪性腫瘍においては、細胞は未分化となり、身体の成長およびホルモンシグナルに応答せず、非制御的に増殖する;腫瘍は侵襲性であり、遠隔部位に広がること(転移)ができる。本発明の一態様では、肝臓の転移(二次腫瘍)が、塞栓形成療法を利用して治療され得る。簡単に言うと、大腿動脈または上腕動脈を介してカテーテルを挿入し、X線透視下で動脈系を通るように導くことにより肝臓の動脈まで進入させる。カテーテルは、正常な構造に供給する動脈分枝(branches)はできるだけ多く危害を加えずに、腫瘍に供給している血管の完全な遮断が可能になるのに必要なだけ肝臓の動脈樹系(tree)へ進入させる。理想的には、これは、肝臓の動脈の分節的な分枝であるが、胃十二指腸動脈の起点から離れた肝臓の動脈全体、または複数の別々の動脈が、腫瘍の程度および個々の血液供給に応じて遮断される必要がある。遮断される動脈における流れがやむまで(好ましくは5分間の観察の後も)注射することにより、動脈が塞栓される。注射し、X線透視もしくはX線フィルムにより、先に造影剤で充填された管がそれ以上閉塞されないことを明示することにより確認され得る。同じ処置を、閉塞される供給動脈それぞれに対して繰り返してもよい。手術中に使用して、腫瘍または脈管塊または癌性器官を除去してもよい。