×この技術を簡単クリック査定この機能をご利用いただくには、会員登録(無料)が必要です。出願した特許の牽制数、引用された数などを知る事ができます。気になる技術や特許をブックマークしておけば、いつでも後から読むことができます。後で印刷するために、公報をPDFでダウンロードできます。会員登録してastamuseを使えば、もっと簡単に便利にお使いいただけます。会員登録(無料)「astamuse」は世界中の挑戦したい社会課題に挑戦し、未来を創る人のプラットフォームです。※この項目の情報は公開日時点(2019年9月12日)のものです。(20)課題COL1A1遺伝子、TGF−β遺伝子、又は、SMAD2/3遺伝子を標的とする二本鎖リボ核酸(dsRNA)組成物、並びに、COL1A1、TGF−β、又は、SMAD2/3の発現を阻害するために該dsRNA組成物を使用する方法の提供。解決手段COL1A1、TFGβ、又は、SMAD2/3の発現を阻害するためのdsRNAであって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、特定のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、特定の配列に対応するアンチセンスヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む、前記dsRNA。米国では、慢性肝疾患は疾患関連死の12番目の主因であり、毎年およそ28,000人の人々が慢性肝疾患で落命する。米国とヨーロッパでは、肝硬変は肝胆疾患および消化器疾患の間で最も一般的な新生物によらない死因である。米国の都市部の男性の4番目の主な死因はアルコール性肝疾患である。慢性肝疾患は、肝線維症および肝硬変に至る肝臓細胞の進行性の破壊と再生のプロセスを特徴とする。肝線維症は肝臓が損傷を受けた時に起こるプロセスである。そのような損傷は、ウイルスの活動(例えば、慢性B型肝炎または慢性C型肝炎)または他の肝臓感染症(例えば、寄生生物、細菌)、化学物質への曝露(例えば、医薬、レクリエーショナルドラッグ、過度のアルコール、汚染物質への曝露)、自己免疫性プロセス(例えば、自己免疫性肝炎)、代謝系疾患(例えば、脂質貯蔵障害、グリコーゲン貯蔵障害、コレステロール貯蔵障害または金属貯蔵障害)、または癌増殖(原発性または続発性肝臓癌)の結果であり得る。ある肝星細胞(HSC)である。肝臓では線維症は、ネクローシス、虚脱および瘢痕形成の結果であるばかりか、損傷を受けた間充織細胞が様々な細胞外マトリックス(ECM)成分を合成することによりマトリックスの合成と分解が混乱した結果でもある。肝線維症は、細胞外物質の分泌の増加と分解の減少の漸進的なプロセスである。肝臓細胞への損傷によってそのプロセスが始まると信じられている。傷害の後のネクローシス死肝臓細胞の存在が、マトリックス産生細胞を刺激するサイトカインを含むメディエーターを分泌する炎症細胞の反応を誘起する。肝臓細胞への損傷により、肝臓の類洞を裏打ちするマクロファージであるクッパー細胞から複数の細胞性因子が活性化され、そして、分泌されることになる。これらの因子は、損傷を受けた肝臓細胞、血小板および肝臓類洞内皮細胞によって分泌される細胞性因子と共に、HSCの活性化因子になる。活性化されると、HSCは増殖性で線維形成性であり、且つ、収縮性の筋線維芽細胞に分化し、そして、HSCは自己分泌とパラ分泌を介して増殖して大量のECM物質を合成し、その物質は徐々に蓄積して肝臓に線維状の塊を形成する。筋線維芽細胞はプロコラーゲンを分泌し、その末端ドメインがプロコラーゲンペプチドによって切断された後にそれは不溶性のコラーゲンとして蓄積して線維症の原因となる。コラーゲン特異的シャペロンであるヒートショックプロテイン47(HSP47)が小胞体内でのプロコラーゲンの正確な三重らせん形成を確実にすることでコラーゲンの分泌を促進する。HSP47はプロコラーゲン合成の翻訳調節にも関係があるとされている。ECM物質の区分は次のとおりである:コラーゲン類(タイプI、III、IV、V、VI、VII)、グリコプロテイン(ラミニン、フィブロネクチン、エンタクチン、アンジュリンおよびエラスチン)およびプロテオグリカン類(コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸およびヘパリン)。マクロファージにより産生される分解酵素によりECMマトリックスを分解する肝臓の能力を圧倒する反復性で持続性の傷害の後に線維症が発生する。肝臓中で増えた過剰なECM物質により、肝臓の構造が乱れ、門脈高血圧症となる。それにより硬変として知られる肝臓循環系の不可逆的で有害な再構成が引き起こされる可能性がある。硬変は、線維性瘢痕組織および再生結節による肝臓組織の置換を特徴とする。これらの再生結節は、損傷を受けた組織が再生を試みたプロセスの結果であり、そして、これにより肝機能が喪失することになる。したがって、線維症は肝臓損傷の徴候であり、且つ、進行性肝硬変による肝不全の主要な原因である。線維症は様々な慢性肝疾患で共通して発生するので、肝線維症の治療および/または予防は非常に重要である。概要COL1A1遺伝子、TGF−β遺伝子、又は、SMAD2/3遺伝子を標的とする二本鎖リボ核酸(dsRNA)組成物、並びに、COL1A1、TGF−β、又は、SMAD2/3の発現を阻害するために該dsRNA組成物を使用する方法の提供。COL1A1、TFGβ、又は、SMAD2/3の発現を阻害するためのdsRNAであって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、特定のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、特定の配列に対応するアンチセンスヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む、前記dsRNA。請求項1COL1A1の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、(i)前記センス鎖が配列番号29のヌクレオチド配列からなり、かつ前記アンチセンス鎖が配列番号30のヌクレオチド配列からなるか、(ii)前記センス鎖が配列番号33のヌクレオチド配列からなり、かつ前記アンチセンス鎖が配列番号34のヌクレオチド配列からなるか、(iii)前記センス鎖が配列番号41のヌクレオチド配列からなり、かつ前記アンチセンス鎖が配列番号42のヌクレオチド配列からなるか、(iv)前記センス鎖が配列番号45のヌクレオチド配列からなり、かつ前記アンチセンス鎖が配列番号46のヌクレオチド配列からなるか、(v)前記センス鎖が配列番号47のヌクレオチド配列からなり、かつ前記アンチセンス鎖が配列番号48のヌクレオチド配列からなるか、または(vi)前記センス鎖が配列番号55のヌクレオチド配列からなり、かつ前記アンチセンス鎖が配列番号56のヌクレオチド配列からなる、前記dsRNA。請求項2少なくとも1個の修飾ヌクレオチドを含む、請求項1に記載のdsRNA。請求項3前記修飾ヌクレオチドの少なくとも1つが、2'−O−メチル修飾ヌクレオチド、5'−チオリン酸エステル基含有ヌクレオチド、コレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基に結合した末端ヌクレオチド、2'−デオキシ−2'−フルオロ修飾ヌクレオチド、2'−デオキシ修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、2'−アミノ修飾ヌクレオチド、2'−アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミダートおよび非天然塩基含有ヌクレオチドからなる群より選択される、請求項2に記載のdsRNA。請求項4リガンドをさらに含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載のdsRNA。請求項5前記リガンドが前記dsRNAの前記センス鎖の3'末端と複合体化されている、請求項4に記載のdsRNA。請求項6請求項1〜5のいずれか1項に記載のdsRNAを含有する、細胞。11前記細胞が肝星細胞である、請求項10に記載の方法。請求項12COL1A1発現が少なくとも30%阻害される、請求項10または11に記載の方法。16請求項1〜5のいずれか1項に記載のdsRNAをコードするベクター。請求項17請求項16に記載のベクターを含む、細胞。本願は、米国特許法第119条(e)に基づき、2010年10月29日に出願された米国特許仮出願第61/408,271号、2010年8月6日に出願された米国特許仮出願第61/371,481号、および2010年6月2日に出願された米国特許仮出願第61/350,829号の利益を主張するものである。これらの各出願の内容の全体は、参照により本明細書に組み入れられたものとする。本願は、EFS−Webを介してASCIIフォーマットで提出してある配列表を含み、これによりその全体を参照して組み入れたものとする。2011年6月2日に作成された前記ASCII複製物は51058PCT.txtという名称であり、864,110バイトのサイズである。本発明は、肝臓におけるコラーゲン1A1(COL1A1)遺伝子、トランスフォーミング増殖因子β1(TGFβ)遺伝子ならびにSMADホモログ2および3(SMAD2/3)遺伝子の発現の阻害、および肝線維症の抑制に関連する。肝星細胞での遺伝子発現の阻害を目的とする。背景技術0004米国では、慢性肝疾患は疾患関連死の12番目の主因であり、毎年およそ28,000人の人々が慢性肝疾患で落命する。米国とヨーロッパでは、肝硬変は肝胆疾患および消化器疾患の間で最も一般的な新生物によらない死因である。米国の都市部の男性の4番目の主な死因はアルコール性肝疾患である。慢性肝疾患は、肝線維症および肝硬変に至る肝臓細胞の進行性の破壊と再生のプロセスを特徴とする。0005肝線維症は肝臓が損傷を受けた時に起こるプロセスである。そのような損傷は、ウイルスの活動(例えば、慢性B型肝炎または慢性C型肝炎)または他の肝臓感染症(例えば、寄生生物、細菌)、化学物質への曝露(例えば、医薬、レクリエーショナルドラッグ、過度のアルコール、汚染物質への曝露)、自己免疫性プロセス(例えば、自己免疫性肝炎)、代謝系疾患(例えば、脂質貯蔵障害、グリコーゲン貯蔵障害、コレステロール貯蔵障害または金属貯蔵障害)、または癌増殖(原発性または続発性肝臓癌)の結果であり得る。ある肝星細胞(HSC)である。0006肝臓では線維症は、ネクローシス、虚脱および瘢痕形成の結果であるばかりか、損傷を受けた間充織細胞が様々な細胞外マトリックス(ECM)成分を合成することによりマトリックスの合成と分解が混乱した結果でもある。肝線維症は、細胞外物質の分泌の増加と分解の減少の漸進的なプロセスである。肝臓細胞への損傷によってそのプロセスが始まると信じられている。傷害の後のネクローシス死肝臓細胞の存在が、マトリックス産生細胞を刺激するサイトカインを含むメディエーターを分泌する炎症細胞の反応を誘起する。肝臓細胞への損傷により、肝臓の類洞を裏打ちするマクロファージであるクッパー細胞から複数の細胞性因子が活性化され、そして、分泌されることになる。これらの因子は、損傷を受けた肝臓細胞、血小板および肝臓類洞内皮細胞によって分泌される細胞性因子と共に、HSCの活性化因子になる。活性化されると、HSCは増殖性で線維形成性であり、且つ、収縮性の筋線維芽細胞に分化し、そして、HSCは自己分泌とパラ分泌を介して増殖して大量のECM物質を合成し、その物質は徐々に蓄積して肝臓に線維状の塊を形成する。筋線維芽細胞はプロコラーゲンを分泌し、その末端ドメインがプロコラーゲンペプチドによって切断された後にそれは不溶性のコラーゲンとして蓄積して線維症の原因となる。コラーゲン特異的シャペロンであるヒートショックプロテイン47(HSP47)が小胞体内でのプロコラーゲンの正確な三重らせん形成を確実にすることでコラーゲンの分泌を促進する。HSP47はプロコラーゲン合成の翻訳調節にも関係があるとされている。0007ECM物質の区分は次のとおりである:コラーゲン類(タイプI、III、IV、V、VI、VII)、グリコプロテイン(ラミニン、フィブロネクチン、エンタクチン、アンジュリンおよびエラスチン)およびプロテオグリカン類(コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸およびヘパリン)。マクロファージにより産生される分解酵素によりECMマトリックスを分解する肝臓の能力を圧倒する反復性で持続性の傷害の後に線維症が発生する。肝臓中で増えた過剰なECM物質により、肝臓の構造が乱れ、門脈高血圧症となる。それにより硬変として知られる肝臓循環系の不可逆的で有害な再構成が引き起こされる可能性がある。硬変は、線維性瘢痕組織および再生結節による肝臓組織の置換を特徴とする。これらの再生結節は、損傷を受けた組織が再生を試みたプロセスの結果であり、そして、これにより肝機能が喪失することになる。したがって、線維症は肝臓損傷の徴候であり、且つ、進行性肝硬変による肝不全の主要な原因である。線維症は様々な慢性肝疾患で共通して発生するので、肝線維症の治療および/または予防は非常に重要である。0008細胞または哺乳類においてコラーゲン1A1(COL1A1)遺伝子、トランスフォーミング増殖因子β1(TGFβ)遺伝子ならびに/またはSMADホモログ2および3(SMAD2/3)遺伝子のRNA転写物のRNA誘導サイレンシング複合体(RISC)介在性切断をもたらす組成物および方法が本明細書において記載される。これに限定されないが、慢性肝疾患を含む肝臓細胞への損傷の結果として生じるCOL1A1遺伝子の過剰発現を原因とする肝線維症の治療および/また予防用の組成物および方法もまた記載されている。アルコール性脂肪肝炎(NASH)、化学物質への曝露、および中でも癌の結果である。0009慢性肝疾患および肝線維症を治療および/または予防する組成物および方法の実施形態は、慢性的な肝臓障害条件下で生じる損傷を含む肝臓損傷の間に過剰に産生され、そして、線維症の原因となる細胞外マトリックス(ECM)物質のうちの少なくとも1つが減少する可能性がある場合、肝臓での線維症が、予防されなくても、少なくとも低減する可能性があるという前提に少なくとも部分的には基づいている。その組成物と方法は、関連するECM遺伝子とまた線維症プロセス中のECM物質の主要な生産者である肝星細胞(HSC)の活性化に関与するシグナル伝達分子、例えば、TGF−βおよびSMAD2/3の遺伝子発現のRNA干渉に基づく。0010本明細書において用いられる場合、用語「iRNA」は、その用語が本明細書において定義されるようにRNAを含有し、そして、RNA誘導サイレンシング複合体(RISC)経路によるRNA転写物の標的切断を仲介する因子を意味する。1つの実施形態では、本明細書に記載されるようなiRNAは細胞または哺乳類においてCOL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子またはSMAD2/3遺伝子の発現を阻害する。0011本明細書において取り上げられる前記組成物に含まれるiRNAは、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子またはSMAD2/3遺伝子のmRNA転写物の少なくとも一部と実質的に相補的である、30ヌクレオチド以下、一般的には19〜24ヌクレオチドの長さの領域を有するRNA鎖(アンチセンス鎖)を持つdsRNAを包含する。00121つの実施形態では、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子またはSMAD2/3遺伝子の発現を阻害するためのiRNAは、互いに相補的な少なくとも2つの配列を含む。そのiRNAは、第1配列を有するセンス鎖と第2配列を有するアンチセンス鎖を含む。そのアンチセンス鎖は、COL1A1、TGFβまたはSMAD2/3をコードするmRNAの少なくとも一部と実質的に相補的であるヌクレオチド配列を含み、そして、その相補領域は30ヌクレオチド以下および少なくとも15ヌクレオチドの長さである。一般的に、前記iRNAは19〜24ヌクレオチド、例えば、19〜21ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、前記iRNAは約15から約25ヌクレオチドまでの長さであり、別の実施形態では、前記iRNAは約25から約30ヌクレオチドまでの長さである。COL1A1、TGFβおよび/またはSMAD2/3を発現する細胞と接触すると、本明細書に記載されるような方法で測定法されたときのように、前記iRNAはCOL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子またはSMAD2/3遺伝子の発現をそれぞれ少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%または少なくとも40%またはそれ以上阻害する。iRNAが製剤される。00131つの実施形態では、本明細書において取り上げられるiRNAは、表3〜7のセンス配列からなる群より選択されるdsRNAの第1配列と表3〜7のアンチセンス配列からなる群より選択される第2配列を含む。本明細書において取り上げられる前記iRNA分子は、天然ヌクレオチドを含むことができ、または、これらに限定されないが、2'−O−メチル修飾ヌクレオチド、5'−チオリン酸エステル基含有ヌクレオチドおよびコレステリル誘導体に結合した末端ヌクレオチドを含む少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含むことができる。前記修飾ヌクレオチドは、2'−デオキシ−2'−フルオロ修飾ヌクレオチド、2'−デオキシ−修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、2'−アミノ−修飾ヌクレオチド、2'−アルキル−修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホラミデートおよび非天然塩基含有ヌクレオチドからなる群より選択されることができる。一般に、そのような修飾配列は、表3〜7のセンス配列からなる群より選択されるiRNAの第1配列と表3〜7の対応するアンチセンス配列からなる群より選択される第2配列に基づくであろう。RNA転写物を標的とする。別の実施形態では、前記iRNAはSMAD2転写物を標的とする。別の実施形態では、前記iRNAはSMAD3転写物を標的とする。0015本明細書に記載される態様のいくつかの実施形態では、前記iRNAは、配列番号53(41100−b1D)と配列番号54(41101−b1D)のRNA配列ペア(AD−21349−b1)、配列番号69(42861)と配列番号70(42862)のRNA配列ペア(AD−22138)、配列番号91(42883)と配列番号92(42884)のRNA配列ペア(AD−22149)、または、配列番号140(40322−b1)と配列番号141(40323−b1)のRNA配列ペア(AD−20916−b1)を含むdsRNAである。RNA転写物の5'または3'非翻訳領域のような非コード領域を標的にする。00171つの態様では、本発明の実施形態は、本発明において取り上げられるiRNAのうちの少なくとも1つを含む細胞を提供する。その細胞は、一般的に、ヒト細胞などの哺乳類細胞である。1つの好ましい実施形態では、前記細胞は肝臓細胞である。好ましい実施形態では、前記細胞はHSCである。0018別の態様では、本発明の実施形態は、生物、好ましくはヒト対象において、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子および/またはSMAD2/3遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物を提供する。その組成物は、典型的には本明細書において記載されるiRNAの1つ以上と薬学的に許容可能な担体または送達用媒体を含む。1つの実施形態では、前記組成物は、これに限定されないが、慢性肝疾患を含む肝疾患の治療に用いられる。1つの実施形態では、前記組成物は、肝線維症の治療に用いられる。NASH、化学物質への曝露または癌の結果である。0019別の実施形態では、前記医薬組成物は、本明細書において記載される投与計画、例えば、4週間に1回以下、3週間に1回以下、2週間に1回以下、または1週間に1回以下の計画での投与用に製剤される。投与を維持することができる。NASH、化学物質への曝露および癌を治療すると知られている薬剤などの非iRNA治療薬と共に投与される。別の実施形態では、本明細書において記載される特徴とされるiRNAを含有する組成物、例えば、COL1A1を標的とするdsRNAは、抗C型肝炎ウイルス剤療法などの非iRNA療法と共に投与される。本発明において取り上げられるiRNAはC型肝炎ウイルスの感染の治療のためにインターフェロンαと共に投与されることができる。iRNAを投与し、その後、その患者に非iRNA薬剤または非iRNA療法を施す(逆もまた成り立つ)。iRNAと非iRNA治療薬または非iRNA療法を同時に施す。1つの実施形態では、前記治療薬は、例えば、C型肝炎ウイルス感染症の治療用インターフェロンαである。別の実施形態では、1つより多いiRNAの組合せを患者に投与する。互いに相補的な少なくとも2つの配列を含む二本鎖リボ核酸(dsRNA)を細胞に導入する工程。そのdsRNAは第1配列を有するセンス鎖と第2配列を有するアンチセンス鎖を持ち、そのアンチセンス鎖はCOL1A1、TGFβおよび/またはSMAD2/3をコードするmRNAの少なくとも一部と実質的に相補的であって、30ヌクレオチド以下、すなわち、15〜30ヌクレオチドの長さであり、一般的に19〜24ヌクレオチドの長さである相補領域を持ち、そして、そのdsRNAは、COL1A1、TGFβおよび/またはSMAD2/3を発現する細胞と接触するとCOL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子またはSMAD2/3遺伝子の発現をそれぞれ少なくとも10%、好ましくは少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%またはそれ以上阻害する。工程(a)で作製された細胞を、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子またはSMAD2/3遺伝子のmRNA転写物が分解されるのに十分な時間にわたり維持し、それによって細胞内のCOL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子またはSMAD2/3遺伝子の発現をそれぞれ阻害する工程。0023別の実施形態では、前記方法は標的遺伝子の発現を肝臓細胞で、好ましくは肝星細胞で阻害するためのものである。0024他の態様では、部分的にはCOL1A1の過剰発現が介在する肝疾患または肝線維症を治療する、予防する、反転させる、または、管理する方法が本明細書において提供される。1つの実施形態では、その方法は、そのような治療、予防、反転または管理を必要とする患者に治療上有効量または予防上有効量の本明細書において取り上げられるiRNAの1つ以上を投与する工程を含む。NASH、化学物質への曝露または癌を原因とする慢性肝疾患を有する。別の実施形態では、COL1A1、TGFβまたはSMAD2/3を標的とするiRNAの投与により、患者において高血清アルブミンおよび/または黄疸などの肝疾患または肝線維症の少なくとも1つの症状の重症度が緩和される、または、除去される。00251つの態様では、本発明は細胞中でCOL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子および/またはSMAD2/3遺伝子の発現を阻害するためのベクターを提供する。1つの実施形態では、そのベクターは、本明細書に記載されるようなiRNAの1つの少なくとも一方の鎖をコードするヌクレオチド配列に機能するように結合された少なくとも1つの調節性配列を含む。0026別の態様では、本発明は、細胞中でCOL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子および/またはSMAD2/3遺伝子の発現を阻害するためのベクターを含有する細胞を提供する。そのベクターは、本明細書に記載されるようなiRNAのうちの1つの少なくとも一方の鎖をコードするヌクレオチド配列に機能するように結合された調節性配列を含む。iRNAを含有する組成物を提供する。その第2の遺伝子はTGFβ、SMAD2またはSMAD3をコードする遺伝子であり得る。0028[本発明1001]COL1A1の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号53のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、配列番号54の対応するアンチセンスヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む、前記dsRNA。[本発明1002]COL1A1の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記アンチセンス鎖が、COL1A1RNA転写物と相補的な領域を含み、かつ、表3または表6に列挙されたアンチセンス配列のうちの1つと3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む、前記dsRNA。[本発明1003]TFGβの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号69のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、配列番号70の対応するアンチセンスヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む、前記dsRNA。[本発明1004]TFGβの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号91のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、配列番号92の対応するアンチセンスヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む、前記dsRNA。RNA転写物と相補的な領域を含み、かつ、表4または表7に列挙されたアンチセンス配列のうちの1つと3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む、前記dsRNA。[本発明1006]SMAD2/3の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号140のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、配列番号141の対応するアンチセンスヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む、前記dsRNA。RNA転写物と相補的な領域を含み、かつ、表5に列挙されたアンチセンス配列のうちの1つと3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む、前記dsRNA。[本発明1008]少なくとも1個の修飾ヌクレオチドを含む、本発明1001〜1007のいずれかのdsRNA。[本発明1009]前記修飾ヌクレオチドの少なくとも1つが、2'−O−メチル修飾ヌクレオチド、5'−チオリン酸エステル基含有ヌクレオチド、コレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基に結合した末端ヌクレオチド、2'−デオキシ−2'−フルオロ修飾ヌクレオチド、2'−デオキシ修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、2'−アミノ修飾ヌクレオチド、2'−アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミダートおよび非天然塩基含有ヌクレオチドからなる群より選択される、本発明1008のdsRNA。[本発明1010]前記相補領域が少なくとも17ヌクレオチド長である、本発明1002、1005、および1007のいずれかのdsRNA。[本発明1011]前記相補領域が19〜21ヌクレオチド長である、本発明1002、1005、および1007のいずれかのdsRNA。[本発明1012]それぞれの鎖が30ヌクレオチド以下の長さである、本発明1001〜1011のいずれかのdsRNA。[本発明1013]少なくとも一方の鎖が、少なくとも1ヌクレオチドの3'オーバーハングを含む、本発明1001〜1012のいずれかのdsRNA。[本発明1014]リガンドをさらに含む、本発明1001〜1013のいずれかのdsRNA。[本発明1015]前記リガンドが前記dsRNAの前記センス鎖の3'末端と複合体化されている、本発明1014のdsRNA。[本発明1016]前記相補領域が表3または表6のアンチセンス配列のうちの1つからなる、本発明1002のdsRNA。[本発明1017]表3または表6から選択されるセンス鎖配列からなるセンス鎖と、表3または表6から選択されるアンチセンス配列からなるアンチセンス鎖とを含む、本発明1002のdsRNA。[本発明1018]前記相補領域が表4または表7のアンチセンス配列の1つからなる、本発明1005のdsRNA。[本発明1019]表4または表7から選択されるセンス鎖配列からなるセンス鎖と、表4または表7から選択されるアンチセンス配列からなるアンチセンス鎖とを含む、本発明1005のdsRNA。[本発明1020]前記相補領域が表5のアンチセンス配列の1つからなる、本発明1007のdsRNA。[本発明1021]表5から選択されるセンス鎖配列からなるセンス鎖と、表5から選択されるアンチセンス配列からなるアンチセンス鎖とを含む、本発明1007のdsRNA。[本発明1022]本発明1001〜1007のいずれかのdsRNAを含有する、細胞。[本発明1023]本発明1001または1002のdsRNAを含む、COL1A1遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物。[本発明1024]本発明1003、1004または1005のdsRNAを含む、TGFβ遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物。[本発明1025]本発明1006または1007のdsRNAを含む、SMAD2/3遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物。[本発明1026]脂質製剤をさらに含む、本発明1023〜1025のいずれかの医薬組成物。[本発明1027]前記脂質製剤がSNALPまたはXTC製剤である、本発明1026の医薬組成物。工程(a)で作製された細胞を、COL1A1遺伝子のmRNA転写物が分解されるのに十分な時間にわたり維持し、それによって前記細胞内のCOL1A1遺伝子の発現を阻害する工程を含む、前記方法。[本発明1029]前記細胞が肝星細胞である、本発明1028の方法。[本発明1030]COL1A1発現が少なくとも30%阻害される、本発明1028または1029の方法。[本発明1031]肝線維症を治療する方法であって、そのような治療を必要とするヒトに、治療上有効量の本発明1001〜1007のいずれかのdsRNAまたは本発明1030〜1034のいずれかの医薬組成物を投与する工程を含む、前記方法。[本発明1032]前記対象の体重に対して0.01mg/kg〜5mg/kgの濃度で前記dsRNAが投与される、本発明1040の方法。[本発明1033]肝線維症の治療に使用するための、本発明1001〜1007のいずれかのdsRNAまたは本発明1023〜1027のいずれかの医薬組成物。[本発明1034]dsRNAの少なくとも一方の鎖をコードするベクターであって、前記dsRNAが、COL1A1をコードするmRNAの少なくとも一部と相補的な領域を含み、30塩基対以下の長さであり、かつ切断のために前記mRNAを標的とする、前記ベクター。[本発明1035]dsRNAの少なくとも一方の鎖をコードするベクターであって、前記dsRNAが、TGFβをコードするmRNAの少なくとも一部と相補的な領域を含み、30塩基対以下の長さであり、かつ切断のために前記mRNAを標的とする、前記ベクター。[本発明1036]dsRNAの少なくとも一方の鎖をコードするベクターであって、前記dsRNAが、SMAD2/3をコードするmRNAの少なくとも一部と相補的な領域を含み、30塩基対以下の長さであり、かつ切断のために前記mRNAを標的とする、前記ベクター。[本発明1037]前記相補領域が19〜21ヌクレオチド長である、本発明1034〜1036のいずれかのベクター。[本発明1038]本発明1034〜1037のいずれかのベクターを含む、細胞。[本発明1039]肝線維症を特徴とする慢性肝疾患を治療する方法であって、そのような治療を必要とするヒトに、治療上有効量の本発明1001〜1007のいずれかのdsRNAまたは本発明1023〜1027のいずれかの医薬組成物を投与する工程を含む、前記方法。様々な実施形態の詳細は、以下の記述に表される。本発明のその他の特色、目的および利点が本明細書と添付の図面から、および添付の特許請求の範囲から明らかになるであろう。siRNAのインビトロでの効果を示す図である。AD−21349(配列番号53および配列番号54)はCOL1A1mRNAの産生について約65pMのIC50を有する。AD21349(配列番号53および配列番号54)のAF09およびAF12ベースの送達が評価されるCCl4マウスモデルの処理計画を示す図である。AD21349(配列番号53および配列番号54)のAF09およびAF12ベースの送達を用いるCCl4マウスモデルでのCOL1A1ノックダウンの効果を示す図である。AD21349(配列番号53および配列番号54)のAF09およびAF12ベースの送達の用量反応が評価されるCCl4マウスモデルの処理計画を示す図である。AD21349(配列番号53および配列番号54)のAF12ベースの送達を用いるCCl4マウスモデルでのCOL1A1ノックダウンの用量依存的効果を示す図である。AD21349(配列番号53および配列番号54)のAF11ベースの送達が評価されるCCl4マウスモデルの処理計画を示す図である。AD21349(配列番号53および配列番号54)のAF11ベースの送達を用いるCCl4マウスモデルでのCOL1A1ノックダウンの効果を示す図である。図8は、siACTA2のAF12ベースの送達を用いるCCl4マウスモデルでのACTA2ノックダウンの効果を示す図である。siRNA(10nM)のインビトロでの効果を示す図である。siRNAであるAD22149(配列番号91および配列番号92)とAD22138(配列番号69および配列番号70)はTGFβの発現についてそれぞれ約20pMと約70pMのIC50を有する。siRNA(10nM)のインビトロでの効果を示す図である。AD−20916(配列番号140および配列番号141)はSMAD2の発現について約75pMのIC50を有する。AD−20916(配列番号140および配列番号141)の脂質ナノ粒子ベースの送達を用いるCCl4マウスモデルでのSMAD2ノックダウンの効果を示す図である。AD−20916(配列番号140および配列番号141)の脂質ナノ粒子ベースの送達を用いるCCl4マウスモデルでのCOL1A1の発現へのSMAD2ノックダウンの効果を示す図である。siRNA注入動物の約50〜60%)、そして、線維症の発生においてSMAD類がTGFβシグナル伝達に関与していることをそのデータは示している。図13は、siCOL1A1の脂質ナノ粒子ベース製剤を用いる慢性肝臓傷害モデルでのCOL1A1ノックダウンの効果を示す図である。図14は、siACTA2のAF12ベースの送達を用いるCCl4マウスモデルで平滑筋αアクチン(α−SMA)を有する星細胞への送達の効果を示す図である。図15A〜15Cは、Col1a1のノックダウンにRNAiが介在することを示す図である。図15Aは、5'RACE試験の計画を示す図である。図15Bは、動物が脂質ナノ粒子−siCol1a1製剤を注入され、24時間後に殺処理されたことを示す図である。図15Cは、ネステッドPCRのDNAバンドを表すアガロースゲルを示す図である。AD21349(配列番号53および配列番号54)のAF12ベースの送達を用いる胆管結紮マウスモデルでのCOL1A1ノックダウンの実験計画と効果を示す図である。図17は、胆管結紮動物での相対的なCol1a1発現を示す図である。AD21349(配列番号53および配列番号54)を用いる胆管結紮マウスモデルでのCOL1A1ノックダウンの効果を示す図である。AD21349(配列番号53および配列番号54)を用いる肝臓傷害性TAAマウスモデルでのCOL1A1ノックダウンの実験計画と効果を示す図である。本明細書において記載される態様および実施形態は、これに限定されないが、慢性肝疾患に関係がある肝線維症を含む肝疾患および肝線維症の治療および/または予防のための組成物と方法に関連する。その実施形態は、肝臓の損傷中に過剰に産生され、そして、線維症の原因となる細胞外マトリックス(ECM)物質のうちの少なくとも1つが減少する可能性がある場合、肝臓の線維症が、予防されなくても、少なくとも低減する可能性があるという前提を利用している。本明細書において記載される組成物と方法は、関連するECM遺伝子とまた線維形成のプロセス中に肝星細胞(HSC)の活性化に関与するシグナル伝達分子、例えばTGF−βおよびSMAD2/3の遺伝子発現のRNA干渉に基づく。0031二本鎖RNA分子(dsRNA)がRNA干渉(RNAi)として知られるよく保存された調節機構で遺伝子発現を妨げることが示されている。elegans)で遺伝子の発現を阻害するために少なくとも25ヌクレオチド長のdsRNAを使用することを開示した。586.5号を参照のこと)を含む他の生物でもdsRNAは標的RNAを分解することが示されている。この天然の機構は、今では遺伝子の異常な、または、望まれない調節を原因とする疾患を治療するための新しい種類の医薬の開発の焦点となっている。0032慢性肝疾患症状の間に肝臓での線維症の原因となる1つのそのようなECM成分はコラーゲン1A1(COL1A1)である。本発明者らは、本明細書において記載されるように、インビボでのHSCへのsiRNAの脂質ナノ粒子(LNP)介在性送達が、四塩化炭素(CCl4)誘発性マウス肝臓傷害モデルのHSCにおけるCOL1A1発現をかなり低減させたことを示す(図2〜3)。CCl4処理の後に、カチオン性脂質C12−200(PNAS,2010,107(2):1864)を含むLNP中に製剤されたsiRNAを静脈内注射により投与した。HSC特異的な標的であるCOL1A1の発現のサイレンシングにより、HSCへの効果的なsiRNA送達が実証された。COL1A1ノックダウンはおよそ0.1mg/kgのIC50を有すると共に用量依存的であった(図4〜5)。siRNA製剤を用いてCOL1A1発現の効果的で著しい減少が達成されることもできることを示した(図13)。図13図2図3図4図50033線維形成のプロセス中にHSCの活性化に関与するシグナル伝達分子には、TGF−βとSMAD2/3が含まれるがこれらに限定されない。TGF−βとSMAD2/3を特異的に標的とするsiRNAのLNP介在性送達がTGF−βとSMAD2/3のインビトロでの発現を著しく低減させることを本発明者らは示す(図9〜10)。肝臓でSMAD2/3を特異的に標的とするsiRNAのLNP介在性送達が、四塩化炭素(CCl4)誘発性マウス肝臓傷害モデルでのSMAD2/3とCOL1A1の発現を著しく低減させることを本発明者らはさらに示す(図11〜12)。図10図11図12図90034線維症は、慢性肝疾患を含む多くの慢性器官不全疾患に共通の病理上の特色である。傷害の後にネクローシス死細胞が、マトリックス産生細胞を刺激するサイトカインのようなメディエーターを分泌する炎症細胞の反応を誘起する。基本的に、損傷を受けた肝臓細胞は物質(例えば、コラーゲン類)を細胞外のマトリックスに分泌するHSCを活性化する。ECMでの不適切なコラーゲンの沈着が線維症の特徴であり、それは発病過程の後期で生じる。線維症を止めることで肝臓の機能を安定化することができ、移植までの時間を延期し、または生存期間の延長をもたらす。0035線維症の生物学は非常によく理解されている。それはTGF−β駆動型プロセスであり、SMAD2とSMAD3がTGFβシグナル伝達の中間物として機能する。TGF−βは直接的に、および、間接的に作用するが、それはこのプロセスの重要なメディエーターである。肝線維症の治療および/または予防の1つの方法は、HSCの増殖を抑制すること、および/または、HSCのアポトーシスを促進することである。別の方法は、HSCがコラーゲンのようなECM成分を産生し、肝臓細胞のECMに分泌して線維性の塊を形成することを阻害することである。COL1A1は、通常、肝臓に非常に低いレベルで存在するが、肝臓への損傷の後に活性化されたHSCによって発現が上昇し、そして、産生される。COL1A1、TGFβ、SMAD2およびSMAD3などのTGFβシグナル伝達中間物ならびにCOL1A1の過剰発現に寄与するその他のタンパク質/因子の発現をRNAiで阻害することが、病因に無関係に肝線維症の治療に妥当であり得る。0036したがって、本明細書において記載される態様および実施形態は、細胞または哺乳類においてCOL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子および/またはSMAD2/3遺伝子の発現を阻害するための、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子および/またはSMAD2/3遺伝子をそれぞれ標的とするiRNAとそれらを用いる方法を含む。COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子および/またはSMAD2/3遺伝子の発現を阻害することにより肝線維症を治療および/または予防するための組成物および方法もまた本明細書において提供される。iRNAはRNA干渉(RNAi)として知られるプロセスによるmRNAの配列特異的な分解を目的とする。0037前記態様の1つの実施形態では、COL1A1の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号53のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、配列番号54のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む前記二本鎖リボ核酸(dsRNA)が、本明細書において提供される。0038前記態様の別の実施形態では、TGFβの発現を阻害するためのdsRNAであって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号69のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、配列番号70のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む前記dsRNAが、本明細書において提供される。0039前記態様の別の実施形態では、TGFβの発現を阻害するためのdsRNAであって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号91のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、配列番号92のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む前記dsRNAが、本明細書において提供される。0040前記態様の別の実施形態では、SMAD2/3の発現を阻害するためのdsRNAであって、前記dsRNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号140のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、配列番号141のヌクレオチド配列と3個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含む前記dsRNAが、本明細書において提供される。0041本明細書に記載される態様のいくつかの実施形態では、前記iRNAは、配列番号53(41100−b1D)と配列番号54(41101−b1D)のRNA配列ペア(AD−21349−b1)、配列番号69(42861)と配列番号70(42862)のRNA配列ペア(AD−22138)、配列番号91(42883)と配列番号92(42884)のRNA配列ペア(AD−22149)および/または配列番号140(40322−b1)と配列番号141(40323−b1)のRNA配列ペア(AD−20916−b1)を含むdsRNAである。0042いくつかの実施形態では、前記iRNAの配列は、表3〜7に見出される配列識別子によって特定される配列を含む。表3〜7はセンス鎖と対応するアンチセンス鎖の配列識別子(配列番号)を含む。表3の各列(配列番号1〜配列番号62)は、本明細書において記載される組成物と方法で用いられるCOL1A1を標的とする2つの別々のiRNA、すなわち、センス鎖(配列番号1〜配列番号62のうちの奇数番号の配列識別子)と対応するアンチセンス鎖(配列番号1〜配列番号62のうちの偶数番号の配列識別子)の2つの別々のペアを特定する。同様に、表4の各列(配列番号63〜配列番号130)は、本明細書において記載される組成物と方法で用いられるTGF−βを標的とする2つの別々のiRNA、すなわち、センス鎖(配列番号63〜配列番号130のうちの奇数番号の配列識別子)と対応するアンチセンス鎖(配列番号63〜配列番号130のうちの偶数番号の配列識別子)の2つの別々のペアを特定する。表5の各列(配列番号132〜配列番号167)は、本明細書において記載される組成物と方法で用いられるSMAD2/3を標的とする2つの別々のiRNA、すなわち、センス鎖(配列番号132〜配列番号167のうちの奇数番号の配列識別子)と対応するアンチセンス鎖(配列番号132〜配列番号167のうちの偶数番号の配列識別子)の2つの別々のペアを特定する。表6の各列(配列番号185〜配列番号2792)は、本明細書において記載される組成物と方法で用いられるCOL1A1を標的とする2つの別々のiRNA、すなわち、センス鎖(配列番号185〜配列番号2792のうちの奇数番号の配列識別子)と対応するアンチセンス鎖(配列番号185〜配列番号2792のうちの偶数番号の配列識別子)の2つの別々のペアを特定する。表7の各列(配列番号2793〜配列番号2860)は、本明細書において記載される組成物と方法で用いられるSMAD2/3を標的とする2つの別々のiRNA、すなわち、センス鎖(配列番号2793〜配列番号2860のうちの奇数番号の配列識別子)と対応するアンチセンス鎖(配列番号2793〜配列番号2860のうちの偶数番号の配列識別子)の2つの別々のペアを特定する。したがって、いくつかの実施形態では、iRNAは表3〜7に記載され、そして、本明細書において提供される配列識別子(配列番号)によって特定されるようなRNA配列ペア(「センス鎖と対応するアンチセンス鎖の二重鎖」)または「センス鎖と対応するアンチセンス鎖」を含むdsRNAである。0043本明細書において取り上げられる組成物のiRNAは、30ヌクレオチド以下の長さの、すなわち、15〜30ヌクレオチドの長さの、一般的には19〜24ヌクレオチドの長さの領域であって、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子および/またはSMAD2/3遺伝子のmRNA転写物の少なくとも一部と実質的に相補的である領域を有するRNA鎖(アンチセンス鎖)を含む。これらのiRNAの使用により、肝臓でのCOL1A1の発現または過剰発現に関係する線維形成のプロセスに関連があるとされる遺伝子のmRNAを標的とした分解が可能になる。非常に低用量のCOL1A1、TGFβおよび/またはSMAD2/3のiRNAが特異的に、および、効率的にRNAiを仲介することができ、それぞれ、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子および/またはSMAD2/3遺伝子の発現を著しく阻害することになる。細胞ベースの試験およびインビボモデル系を用いて、本発明者らは、COL1A1、TGFβおよび/またはSMAD2/3を標的とするiRNAが特異的に、および、効率的にRNAiを仲介することができ、各遺伝子の発現を著しく阻害することになることを示している。本発明者らはまた驚くことに、反復性肝臓傷害または慢性肝臓傷害の条件でのCOL1A1発現の著しい低減を仲介するために、COL1A1を標的とするiRNAを用いることができることを発見している。本発明者らは、間接的にCOL1A1の発現を阻害することになるSMAD2/3の発現の阻害をSMAD2/3のRNAiが仲介することを示す。したがって、これらのiRNAを含む方法と組成物は、直接的な、または、間接的なCOL1A1生産の下方調節による肝疾患および/または肝線維症の治療および/または予防に有用である。以下の詳細な説明は、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子および/またはSMAD2/3遺伝子の発現を阻害するためのiRNAを含む組成物の製造法および使用法ならびにCOL1A1の発現または過剰発現を原因とする肝線維症を特徴とする肝疾患を治療および/または予防し、可能であれば反転させる組成物および方法を開示する。0044本明細書において取り上げられる組成物の実施形態はまた、30ヌクレオチド以下の長さであり、一般的には19〜24ヌクレオチドの長さであり、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子またはSMAD2/3遺伝子のRNA転写物の少なくとも一部と実質的に相補的な領域を有するアンチセンス鎖を持つiRNAを含む。0045本明細書において取り上げられる医薬組成物の実施形態は、30ヌクレオチド以下の長さであり、一般的には19〜24ヌクレオチドの長さであり、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子および/またはSMAD2/3遺伝子のRNA転写物の少なくとも一部と実質的に相補的な領域を有するアンチセンス鎖を持つiRNAを薬学的に許容可能な担体と共に含む。iRNAおよび薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子、SMAD2遺伝子および/またはSMAD3遺伝子の発現を阻害する前記組成物の使用方法、ならびにCOL1A1遺伝子の過剰発現を原因とする肝線維症を治療および/または予防し、可能であれば反転させるために前記医薬組成物を使用する方法が本発明において取り上げられる。00471つの実施形態では、前記医薬組成物は1つより多いiRNAタイプ、すなわち、1つより多い遺伝子標的を標的とするiRNAを含む。iRNAの組合せを含む。00481つの実施形態では、ビタミンA結合リポソームを用いて前記iRNAを送達する。肝臓中のHSCは循環系からビタミンAを取り込み、そして、それを貯蔵する。ビタミンA結合リポソームは、iRNAがビタミンA捕捉性HSCを特異的に標的とするように機能する。00491つの実施形態では、本明細書において記載されるiRNAの送達用の前記脂質ナノ粒子(LNP)製剤は、LNPカプセル化iRNAがビタミンA捕捉性HSCを標的とするようにビタミンAと結合させられる。0050いくつかの実施形態では、本明細書において記載される前記医薬組成物および/または治療法は、コラーゲン特異的シャペロンであるヒートショックプロテイン47(HSP47)を標的とする追加のiRNAをさらに含む。26:431-442)は、siRNA含有ビタミンA結合リポソームによるHSP47の発現阻害が、致死量のジメチルニトロソアミンで処理されたラットにおいてほぼ完全に肝線維症を解決し、そして、生存期間を延長させることを示した。添付の請求項で使用されるある用語および言い回しの意味が以下に提供される。本明細書の他の部分での用語の使用法とこの節で提供されるその定義の間に明らかな食い違いがある場合、この節での定義が勝るものとする。肝臓が長期間にわたって反復性損傷および/または傷害を受け、結果として線維症および硬変に至る肝臓実質の進行性の破壊と再生のプロセスに入っている病気を意味する。)を含む様々な病因のうちのどんなものの結果としても生じることができ、または、どんなものとも関係がある。肝疾患または肝疾患状態は、本明細書において用いられる場合、その状態が少なくとも1か月間持続する、または、継続するとき、「慢性」であるとみられるが、いくつかの好ましい実施形態では、「慢性」を12週間以上の期間として定義することができる(例えば、対象の残りの生存期間など)。器官または組織の通常の成分として、というよりはむしろ修復性プロセスまたは反応性プロセスとしての線維性組織の形成を意味する。線維症は、任意の特定の組織での線維芽細胞の蓄積と正常な沈着を超過するコラーゲンの沈着を特徴とする。線維症は、炎症、刺激状態または傷治癒の結果として生じる。蓄積およびコラーゲンの沈着」と同じ意味で用語「線維症」を用いる。線維芽細胞は結合組織の細胞であり、全身の結合組織に分散している。線維芽細胞は、I型および/またはIII型コラーゲンを含有する軟質ECMを分泌する。組織に対する傷害への反応で、近くの線維芽細胞がその傷に移動し、増殖し、そして、大量のコラーゲン性細胞外マトリックスを産生する。コラーゲンは、細胞外マトリックスおよび結合組織、軟骨および骨の主な成分であるグリシンとプロリンに富む線維性タンパク質である。コラーゲン分子は、α鎖と呼ばれる鎖の3重らせん構造であり、ロープ様のらせん状に互いに巻き付けられている。コラーゲンにはいくつかの形態または型が存在し、これらのうちで最も一般的なI型は皮膚、腱および骨に見られ、そしてIII型は皮膚、血管および内臓器官に見られる。プロセス」は、線維形成中の線維性組織の一時的、および、進行性の沈着を意味する。肝臓に存在する、および/または、肝臓に生じる線維症を意味する。fibrosis)」は互換的に用いられる。肝臓が機能性肝臓細胞の喪失を経た肝線維症の後期を意味する。正常な肝臓組織が線維性組織と置換され、その結果、正常な肝臓構造が広範囲に変形する。密集した線維組織が取り巻く再生結節が主な特徴である。線維症瘢痕組織の異常増殖が肝臓の本来の機能を抑制する。硬変は通常、非可逆的であると考えられる。0057「G」、「C」、「A」、「T」および「U」は各々一般的にそれぞれグアニン、シトシン、アデニン、チミジンおよびウラシルを塩基として含有するヌクレオチドを表す。moiety)を意味し得ることが理解されるであろう。当業者は、そのような置換部分を担持するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対形成特性を実質的に変えることなく、グアニン、シトシン、アデニンおよびウラシルを他の部分と置換できることに気付くであろう。これに限定されないが、その塩基としてイノシンを含むヌクレオチドは、アデニン、シトシンまたはウラシルを含有するヌクレオチドと塩基対形成することができる。それ故に、ウラシル、グアニンまたはアデニンを含有するヌクレオチドは、本明細書において取り上げられるdsRNAのヌクレオチド配列において、例えば、イノシンを含有するヌクレオチドと置換されることができる。別の例では、オリゴヌクレオチド内のどの位置にあるアデニンおよびシトシンもそれぞれグアニンおよびウラシルと置換して標的mRNAとG−Uウォッブル塩基対を形成することができる。そのような置換部分を含有する配列は本明細書において記載される組成物および方法に適切である。0058本明細書において用いられる場合、用語「iRNA」は、その用語が本明細書において定義されるようにRNAを含み、そして、RNA転写物のRNA誘導サイレンシング複合体(RISC)経路による標的切断に介在する因子を意味する。1つの実施形態では、本明細書に記載されるようなiRNAは細胞内でのCOL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子またはSMAD2/3遺伝子の発現を阻害する。第1次転写産物のRNAプロセッシングによる産物であるメッセンジャー(mRNA)を含む、COL1A1遺伝子、TGFβ遺伝子、SMAD2遺伝子またはSMAD3遺伝子の転写中に形成されたmRNA分子のヌクレオチド配列の連続部分を意味する。その配列の標的部分は少なくとも、その部分での、または、その近くでのiRNA指向性切断の基質として働くために十分な長さであろう。標的配列は一般的に長さが9〜36ヌクレオチドまで、例えば、15〜30ヌクレオチドであり、その間の部分範囲を含むであろう。非限定的な例として、標的配列は15〜30ヌクレオチド、15〜26ヌクレオチド、15〜23ヌクレオチド、15〜22ヌクレオチド、15〜21ヌクレオチド、15〜20ヌクレオチド、15〜19ヌクレオチド、15〜18ヌクレオチド、15〜17ヌクレオチド、18〜30ヌクレオチド、18〜26ヌクレオチド、18〜23ヌクレオチド、18〜22ヌクレオチド、18〜21ヌクレオチド、18〜20ヌクレオチド、19〜30ヌクレオチド、19〜26ヌクレオチド、19〜23ヌクレオチド、19〜22ヌクレオチド、19〜21ヌクレオチド、19〜20ヌクレオチド、20〜30ヌクレオチド、20〜26ヌクレオチド、20〜25ヌクレオチド、20〜24ヌクレオチド、20〜23ヌクレオチド、20〜22ヌクレオチド、20〜21ヌクレオチド、21〜30ヌクレオチド、21〜26ヌクレオチド、21〜25ヌクレオチド、21〜24ヌクレオチド、21〜23ヌクレオチドまたは21〜22ヌクレオチドまでであり得る。0060本明細書において用いられる場合、用語「配列を含む鎖」は、標準ヌクレオチド命名法を用いて言及される配列により記載されるヌクレオチド鎖を含むオリゴヌクレオチドを意味する。0061本明細書において用いられる場合、他に指示されない限り、用語「相補的である」は、第2ヌクレオチド配列に対する関係で第1ヌクレオチド配列について記述するために用いられるとき、当業者によって理解されるように、第1ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが一定の条件で第2ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドとハイブリダイズして二重鎖構造を形成する能力に当てはまる。NaCl、40mMPIPESpH6.4、1mMEDTA、50oCまたは70°Cで12〜16時間とそれに続く洗浄を含み得る。生物内で遭遇し得るような生理学的に妥当な条件などの他の条件を適用することができる。当業者は、ハイブリダイズしたヌクレオチドの最終的な適用に合わせて、2つの配列の相補性を試験するために最も適切な一組の条件を決定することができるであろう。0062iRNA内の相補的配列、例えば、本明細書に記載されるようなdsRNA内の相補的配列は、第1ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの第2ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドへの一方または両方のヌクレオチド配列の全長にわたる塩基対形成を含む。そのような配列は、本明細書において互いに対して「完全に相補的である」と言及されることができる。本明細書において第1配列が第2配列に対して「実質的に相補的である」と言及される場合、その2つの配列は完全に相補的であり得る、または、それらの配列の最終的な適用、例えば、RISC経路による遺伝子発現の阻害に最も妥当な条件でハイブリダイズする能力を保持しながら、30塩基対(bp)までの二重鎖にハイブリダイゼーションすると、それらは1つ以上だが、一般的には5つ以下、4つ以下、3つ以下または2つ以下のミスマッチ塩基対を形成することができる。2つのオリゴヌクレオチドがハイブリダイゼーションして、1つ以上の一本鎖オーバーハングを形成するように設計されている場合、そのようなオーバーハングは、相補性の判定の点でミスマッチとみなされないものとする。21ヌクレオチドの長さの1つのオリゴヌクレオチドと23ヌクレオチドの長さの別のオリゴヌクレオチドを含むdsRNAであって、長い方のオリゴヌクレオチドが短い方のオリゴヌクレオチドと完全に相補的である21ヌクレオチドの配列を含むdsRNAを本明細書において記載される目的にとって「完全に相補的である」とさらに言及することができる。0063「相補的」配列は、本明細書において使用される場合、非天然ヌクレオチドおよび修飾ヌクレオチドのハイブリダイズする能力についての上記の要件が満たされている限り、非ワトソン‐クリック塩基対ならびに/または非天然ヌクレオチドおよび修飾ヌクレオチドから形成される塩基対を含むことができ、または、それらから完全に形成されることができる。そのような非ワトソン‐クリック塩基対には、G:Uウォッブル塩基対合またはフーグスティーン型塩基対合が含まれるがこれらに限定されない。0064本明細書では、用語「相補的である」、「完全に相補的である」および「実質的に相補的である」を、それらが使用されている文脈から理解されるように、dsRNAのセンス鎖とアンチセンス鎖の間、または、iRNA薬剤のアンチセンス鎖と標的配列の間の塩基マッチングに関して使用することができる。0065本明細書において用いられる場合、mRNAの「少なくとも一部と実質的に相補的である」ポリヌクレオチドは、目的のmRNA(例えば、COL1A1をコードするmRNA)の連続部分に実質的に相補的であるポリヌクレオチドを意味する。mRNAの少なくとも一部に相補的である。0066用語「二本鎖RNA」または「dsRNA」は、本明細書において用いられる場合、標的RNAに対して「センス」方向と「アンチセンス」方向を有すると言及すされるであろう2本の逆平行であり実質的に相補的である核酸鎖を含むハイブリダイズした二重鎖領域を持つRNA分子またはRNA分子複合体を包含するiRNAを意味する。その二重鎖領域は、RISC経路を通した所望の標的RNAの特異的分解を可能にする任意の長さの二重鎖領域であり得るが、それは、典型的には、9塩基対から36塩基対(bp)、例えば、15〜30bpの長さの範囲にあるであろう。9bpと36bpの間の二重鎖を考慮すると、その二重鎖は、この範囲での任意の長さ、例えば、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35または36であることができ、そして、その範囲の中の任意の部分範囲、これらに限定されないが、15〜30bp、15〜26bp、15〜23bp、15〜22bp、15〜21bp、15〜20bp、15〜19bp、15〜18bp、15〜17bp、18〜30bp、18〜26bp、18〜23bp、18〜22bp、18〜21bp、18〜20bp、19〜30bp、19〜26bp、19〜23bp、19〜22bp、19〜21bp、19〜20bp、20〜30bp、20〜26bp、20〜25bp、20〜24bp、20〜23bp、20〜22bp、20〜21bp、21〜30bp、21〜26bp、21〜25bp、21〜24bp、21〜23bpまたは21〜22bpの間の部分範囲内の任意の長さであることができる。Dicerおよび類似の酵素によるプロセッシングによって細胞中に生成されたdsRNAは一般に19〜22bpの長さである。dsDNAの二重鎖領域の一方の鎖は、標的RNAの領域と実質的に相補的な配列を含む。その二重鎖構造を形成する2本の鎖は、少なくとも1つの自己相補領域を有する1つのRNA分子に由来する可能性があり、または、2つ以上の別々のRNA分子から形成される可能性がある。前記二重鎖領域が1つの分子の2本の鎖から形成される場合、その分子は、二重鎖構造を形成する一方の鎖の3'末端とそれの他方の鎖の5'末端の間が(本明細書において「ヘアピンループ」と称される)ヌクレオチドの一本鎖によって分けられた二重鎖領域を持つ可能性がある。そのヘアピンループは少なくとも1個の未対合のヌクレオチドを含むことができ、いくつかの実施形態では、そのヘアピンループは少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、少なくとも9個、少なくとも10個、少なくとも20個、少なくとも23個またはそれ以上の未対合のヌクレオチドを含むことができる。dsRNAの2つの実質的に相補的である鎖が別々のRNA分子からなる場合、それらの分子は必ずというわけではないが、共有結合で結合することができる。前記の2本の鎖がヘアピンループ以外の手段により共有結合で結合される場合、その結合構造は「リンカー」と称される。上記のようなdsRNAを指すために、用語「siRNA」もまた本明細書において用いられる。0067用語「RNA分子」または「リボ核酸分子」は、自然で発現される、または、自然に見いだされるRNA分子だけでなく、本明細書に記載されるような、または、当技術分野において公知であるような1個以上のリボヌクレオチド/リボヌクレオシド類似体または誘導体を含むRNAの類似体および誘導体を包含するということを当業者は認識するであろう。厳密に言うと、「リボヌクレオシド」はヌクレオシド塩基とリボース糖を含み、そして、「リボヌクレオチド」は1つ、2つ、または3つのリン酸部分を有するリボヌクレオシドである。用語「リボヌクレオシド」と「リボヌクレオチド」は、本明細書において用いられる場合、同義であるとみなされ得る。ヌクレオ塩基構造またはリボース‐リン酸骨格構造において、例えば、以下で本明細書に記載されるように、RNAを修飾することができる。リボヌクレオシド類似体または誘導体を含む分子は二重鎖を形成する能力を保持しなければならない。非限定的な例として、RNA分子は、2'−O−メチル修飾ヌクレオシド、5'チオリン酸エステル基を含むヌクレオシド、コレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基に結合した末端ヌクレオチド、ロックドヌクレオシド、脱塩基ヌクレオシド、2'−デオキシ−2'−フルオロ修飾ヌクレオシド、2'−アミノ−修飾ヌクレオシド、2'−アルキル修飾ヌクレオシド、モルホリノヌクレオシド、ホスホラミデートまたは非天然塩基含有ヌクレオシドまたはそれらの任意の組合せが含まれるがこれらに限定されない少なくとも1個の修飾リボヌクレオシドを含むこともできる。RNA分子は、dsRNA分子の全長まで少なくとも2個の修飾リボヌクレオシド、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、少なくとも9個、少なくとも10個、少なくとも15個、少なくとも20個またはそれ以上の修飾リボヌクレオシドを含むことができる。RNA分子中のそのような複数の修飾リボヌクレオシドの各々について修飾が同じである必要はない。1つの実施形態では、本明細書において記載される方法および組成物で使用することが考えられる修飾RNAは、要求される二重鎖構造を形成する能力を持ち、RISC経路による標的RNAの特異的分解を可能にする、または、仲介するペプチド核酸(PNA)である。00681つの態様では、修飾リボヌクレオシドはデオキシリボヌクレオシドを含む。そのような例では、iRNA薬剤は、例えば、デオキシヌクレオシドオーバーハング、またはdsRNAの二本鎖部分内の1個以上のデオキシヌクレオシドを含む1個以上のデオキシヌクレオシドを含むことができる。どんな場合にも二本鎖DNA分子は用語「iRNA」によって包含されないことは自明である。00691つの態様では、RNA干渉薬剤は、標的RNAの切断を指向するために標的RNA配列と相互作用する一本鎖RNAを含む。