Kit今日のキナーゼを標的とする創薬研究において、細胞ベースのアッセイは、生物学的有効性を証明するために必要不可欠となっています。キナーゼの生理学的な機能は、局在やアダプタータンパク質の存在、宿主細胞が制御するタンパク質など、細胞内の多くの因子に依存します。これらはシミュレートすることが難しく、精製キナーゼの活性阻害剤は同定可能であっても、細胞にその化合物が作用し得るかどうかは別の課題となります。細胞をベースとしたアッセイでは、初期スクリーニングにおいて同定された化合物が、細胞内に浸透可能か、あるいは副作用を引き起こすような細胞毒性を示さないかを特定することが可能となります。SureFireは、洗浄操作なしに、細胞ベースでキナーゼ活性を検出可能なアッセイシステムです。ビーズそれぞれに結合した抗体でサンドイッチして検出します。洗浄やフィルトレーション操作が不要で、ミニチュア化が可能なマイクロプレートフォーマットのセルベースアッセイです。ターゲットを過剰発現した細胞はもちろんのこと、生理学的に適切な内因性発現レベルの細胞でもアッセイが可能です。多様な細胞種、アッセイフォーマットに対応します。ウェルフォーマットでのアッセイが可能です。Ultraの2種類があります。Ultraをご選択ください。Technologyビオチン化抗体(#1)およびCaptSureTMリガンド標識された抗体(#2)が細胞溶解液中のリン酸化タンパク質を認識します。アクセプタービーズが各抗体と結合して近接し、励起光照射(680nm)によりAlphaLISAシグナルが(615nm)検出されます。ビオチン化抗体(#1)および未標識抗体(#2)が細胞溶解液中のリン酸化タンパク質を認識します。AlphaScreenアクセプタービーズが各抗体と結合して近接し、励起光照射(680nm)によりAlphaScreenシグナル(520-620nm)が検出されます。高感度で広いダイナミックレンジ発現レベルの低いリン酸化タンパク質も検出できます。Aに代わり、CaptSureTMを標識しています。Aに結合しアッセイに干渉する問題を回避しました。抗体のファンクショナルスクリーニングや機能解析など、適用できるアプリケーションがさらに広がりました。Aに代わりCaptSureTMを使用したことで、組織サンプル中のIgGの影響も回避されます。wellプレートアッセイにおけるアッセイ量を増加、ピペッティング操作がより容易になりました。細胞溶解液に抗体およびビーズを添加後の反応時間は2時間と、アッセイ時間がより短くなりました。アッセイキットで検出しました。アッセイキットにて検出しました。シグナルに変化はなく、混在する。545(Tb)を利用し、細胞溶解液中の内在性リン酸化タンパク質とトータルタンパク質を同時に検出するアッセイキットです。*測定には、AlphaScreenスタンダードオプションが搭載されたEnVisionと、対応するフィルターおよびミラーが必要です。アクセプターが結合、またそのリン酸化部位に抗リン酸化抗体AlphaLISAアクセプタービーズが結合します。標的タンパク質に対するビオチン化抗体とストレプトアビジンドナービーズが結合します。nm)が同時に発光、シグナルが検出されます。