研究者の楽園1970年の終わりごろには、キャップの研究は大きく広く進展していて「もう私の出番はない」ように思われた。誰かとバッティングしたり、枚挙的であるように思え、一種の燃え尽き症候群になっていたのかもしれない。室長として独立した研究室をもらっていたのでーーー生活には困らない。「ポスドクは内部昇格を許さない」というルールがあるなか、筆者は、客員研究員だからということで、1976年から、研究所のメンバーに昇格していた。申請は必要なく、研究テーマの選択も自由であった。製薬会社がスポンサーになっている研究所であるから、分子生物学とはいえ、ロシュ社になにか貢献したいなとは、思っていた。所長のユーデンフレンド博士がーーー「研究所の自由度」を守るために「会社側への盾となって」苦労されていることをーーー、所長の親しい友人である早石修先生から聞いていたからである。Pestka博士のグループによりクローニングされており、ロシュ社はIFNタンパク質を、抗がん・抗ウイルス医薬品として開発しようとして、新興のジェネンテク社と交渉中だった。Spector博士が発明したーーー乱用薬物を抗体で感知するーーーAbu・Screen/Rocheが軍隊で採用されているなど、研究所の貢献は、すでにロシュ社に認知されていた。応用研究への展開は中々難しい。ノーベル賞への呼び声が高かった。免疫学研究所では、ーーーヨーロッパの感覚であろうかーーー親元のロシュへ恩返しをしようとするなどの気分は毛頭なかったようである。それから20年近くたって(~1997年)、モノクローン抗体技術の成果が、抗体医薬を生み出すことになり、ロシュ社は、抗体技術のノウハウを得て、現在にいたるまで、抗体医薬のチャンピオンとして活躍している。筆者たちも、創薬のターゲットとして「インフルエンザウイルスに特異的なキャップ拉致反応」を利用した抗インフル医薬品が胸中にあったが、当時のロシュ社は、興味を示さなかった。1980年代は、エイズウイルスやHCVへの対応に主眼が置かれ、インフルエンザウイルスが顧みられることはなかった。縁というものは不思議である。Kettering研究所のKrug博士と、RIMBの我々とで見つけた「キャップ依存的エンドヌクレアーゼ」を標的とした「ゾフルーザ」が、本邦のシオノギ製薬で発見され、その臨床試験などへロシュ社が肩入れして、FDAによる医薬品への承認を得て、世界ではゾフルーザをロシュが販売することになったのは「不思議な縁」であると思わざるを得ない。基礎から応用へは、ゆったりとした時間軸が、必要であるようだ。二本鎖RNAウイルス遺伝子のDNAクローニングと解析この時期、逆転写酵素が発見され、RNAがDNAへ変換することができるようになったので、Maxam・Gilbert法により、そのDNA配列が読めるようになっていて、mRNAがコードするタンパクのアミノ酸配列が判るようになった。新着雑誌には次々と、mRNAの配列が報告されるようになっていて、それがキャップ研究の筆者らには、とても羨ましかった。3'末端にPolyAを持つmRNAであれば、オリゴdTをプライマーにして、二本鎖DNAへ変換することが出来るので、mRNAのクローニングは誰でも出来るようになったのである。二本鎖RNAを遺伝子として持つ蚕・CPVウイルスや、ヒト・レオウイルスや、下痢を起こすロタウイルスでは、mRNAも遺伝子もPolyAを持たず、そんなこともあって、DNAクローニングの舞台から置き去りにされていた。筆者にとっては、二本鎖RNAウイルスは、キャップ発見の故郷でもあるので、キャッピング酵素やメチル化酵素の立体構造などを知りたいと思っていた。二本鎖RNAウイルス遺伝子のDNA化には、まず、3'末端へPolyA、あるいはタグになるオリゴヌクレオチドをつけて、逆転写酵素が働く足場をつけなければならない。(図1)、これを実際にやってくれるプレーヤーがいなかった。大晦日の客そんな時、1980年の大晦日に、日本から強力な助っ人がやってきた。(第21話のあとがきに写真がある)。探索していた免疫学研究者である。真弓教授が率いる日本肝炎研究グループでは、「NonA/NonBウイルスの正体は、RNAかDNAか不明だが、クローニング技術でしか見つけられない」ということで、遺伝子クローニング技術を習得するために今井博士が、私の研究室に送り込まれたようであった。私は、なるべく日本人をとらない方針でいたのだが、今井さんが来てからは、私の研究室には、常に日本人研究者がいることになってしまった。夜になると、日本人の誰かが私のオフィスへ来るようになってきて、―――アメリカの中に小さな日本が出来つつあったーーー。英語で過しているストレス一杯の一日が終わり、気楽に日本語で話せる雰囲気が楽しいからであろう。後に帰国して活躍された人が多かった。丸太は一本では燃えないさて、大晦日の客の今井博士だが、単身で渡米されたので、ひとまず我が家へひきとり、一緒に年末年始を過ごすことにした。今井さんとは、それが初対面だった。遠来の客ということで、久しぶりに暖炉に火を起こした。これまでのこと、今後のことなど、暖炉の火を見ながら、じっくり話し合った。私にはそれが快適だったが、付き合わされた今井さんは、時差の関係で、眠くて大変だったろうと思われる。「一本では、燃えないが、2本の燃えて面を向かい合わせると、よく燃えることを見つけたよ、ほら。」(実際、この発見は、大発見だった)「あっ、ほんとですね。「研究も、こんなもんかもね。「ああ、いいですね、眠くてしょうがなかったんです。―――ということで、大晦日の夜に、門番にことわって、誰もいない研空所へ入り、私は、研究室を案内し、彼は、慣れた手つきで、試薬棚から試薬を取り出して、早速、バッファーや試薬溶液を作ったりした。実験が好きで、実験馴れている今井博士ならではのことだった。彼も、海外留学最初の夜にバッファーを作るなんて思ってもみなかったことであろう。それは、時差を解消するには良い方だったかもしれない。T4・RNAリガーゼを用いて結合させることにした。2本鎖RNAとしては、これまでキャップ発見の際に使ってきた蚕のCPVウイルスや、レオウイルス、それからロタウイルスから抽出したRNAを使ったが、全てうまくいった。オリゴCには、5'と3'の両末端にリン酸をつけて、自身がライゲーションしないように、細工を凝らしたが、こんな前段階プロセスは今井さんにとって核酸科学入門のよい学習になったと思われる。図1.2本鎖RNAウイルス遺伝子のクローニングさいわい、2本鎖RNAをフルサイズで2本鎖DNAにして、pBR322に組み込むことが出来た。ウイルスの10本の分節遺伝子それぞれに対するクローンは、32P・pCpでラベルした各分節RNAをプローブにして分別した。して、3種類のウイルスについて、30本ほどの分節遺伝子を全てクローニングして、充実した1年間を終えた今井さんは、同じフロアの皆さんから盛大な送別会を開いてもらって、日本へ帰国していった。彼はすぐまた戻ってくることになる。今度は、正式にRIMBのポスドクに採用されたので、家族を連れて来ることができたのである。以前に釣り上げたDNAクローンの多くについて、こんどはDNA配列を決定する仕事にとりかかった。これらの仕事は、2本鎖RNA遺伝子のクローニングとしては世界で最初の仕事だった。大阪国立病院の池上信子先生から送られて来た病原性ロタウイルスの11番目の分節遺伝子について、RNA配列を決定し、PNAS誌へ発表した123,124。この稿を書いている2019年9月26日夜、NHKニュースで、ロタウイルスのワクチン無料化のニュースが流れている。(たとえば図2――筆者が実験中の写真)、「きっとお役にたっているよ」と家内に話かけるが、ーーー残念ながら、反応はそっけなくーーー2本の燃えている丸太ではない。一つのタンパクをコードしている。それらの遺伝子はRNAポリメラーゼやキャッピング酵素、メチル化酵素、それから粒子タンパクなどを、独立して、コードしている。ロタ、蚕CPV、レオの3種類のウイルスについて合計30本のセグメントRNAをDNAクローニングしたのであるが、やはり、アフリカなどで蔓延している病原性ロタウイルスに最も強い興味が集まった。ロタのクローンDNAを使って、日本、米国、オーストラリア、ニュージランドのWHO委員の研究者と広い共同研究ネットが広がった125。RNAセグメントにコードされている。Virologyに共著で発表した127。野本さんとは、学生時代にベンチを並べて学んだ先輩・後輩の仲だったが、それから15年を経て、海を越えて、ロタウイルスのDNAクローンをネタに、共同研究することが出来たのは、ことさらに嬉しいことだった。別の論文中、ハイブリダイズ法によるロタウイルスのDNA感染診断法についてもDNAの利用を確認したが128,129、この経験は、後に今井さんらの努力による、ーーー献血で集められた血液中のHCVの混入を調べるーーーDNA診断法の実際に結び付いたと思われる130。あとがき<留学にもいろいろ>留学にもいろいろあるが、今井さんの留学は変わっていた。自費で1年間ーーーまず、足入れ留学しーーー、次には、受け入れ側の費用で、家族を連れて2年間留学するという方法で、経済的に許せば、これは賢明な方法だ。留学直前に結婚して、新婚旅行の延長で留学する人もいたが、「その後が、いろいろ大変だろうな」と心配したものだった。私のように小学生を含む子供3人を連れて留学するのは苦労が多かった。子供を学校へ入れたりして、ストレスが家族全員へかかるからである。当家の場合、苦労したのは家内であろう。アメリカでは、品行方正であれば周囲が優しく迎えてくれるから、何とかやってゆけたーーーいまはもう、その間の苦労を思い出すことは―――家内はともかく、筆者にはない。研究室から、PolyAポリメラーゼを使うテーリング方法でレオウイルスの遺伝子dsRNAをクローニングした論文が出て、2本鎖RNAウイルスの遺伝子クローニングやその解析は、世界的にポピュラーな分野になった。Joklik博士はオーストリア人で、オーストラリアで育ち、米国へ帰化した国際人で、永くVirology誌の編集長をつとめて、分子ウイルス学の分野を先導したウイルス科学者だった。Shatkin博士とは色んな意味でライバル関係にあったが、学会などでは、Joklik博士は、テニスなどへ快く誘ってくれるので、筆者は気にしないで交友を楽しんだ。そのJoklik博士が今年7月に93歳で亡くなったという訃報を知った。Duke大学では永く学部長をつとめられたので、多くの日本人留学生がお世話になったと思われるが、ご冥福を祈りたい。*自動ログインログインユーザ名を忘れましたパスワードを忘れました。