デフォリキュレーション(defolliculation)の後、各cRNAを、10ng/卵母細胞で卵母細胞に注入した。16°Cで3日間培養した後、[3H]MPP、[14C]TEAおよび[3H]セロトニンを使用して取込みの測定を行った。100μMの阻害因子シアニン863の存在または非存在において、指定の基質濃度を使用して、卵母細胞を30分間培養した。各データポイントは、8〜10卵母細胞に対応した。差異の有意性を、不対(unpaired)スチューデントのt検定によって検定した。図1aは、変異体Arg61Cysによる0.1μM[3H]MPPの取込みが70%減少し、変異体Cys88ArgおよびGly401SerによるMPP取込みが98%以上減少したことを示す。wtと有意に異ならず、野生型と同じ、基質活性についての半最大濃度(K0.5)値(図1b)および最大発現輸送率(データを示さず)を示した。wtと比較して、同様のK0.5値(図1b)および32±16%(n=3)減少したVmax値が観測された。wtと比較して、測定した。変異体Arg61Cys、Phe160LeuおよびMet420delについて、3つの独立実験において、基質選択性における有意な変化は検出されなかった(データを示さず)。これに対して、Cys88ArgおよびGly401Ser変異体について、基質特異性における有意な変化が観測された(図1c、d)。MPPの取込みより、減少が有意に少なかった。301(2002),293-298)。生理学的基質(アセチルコリン、セロトニン)を包含する種々の化合物ならびに薬物におけるこの直接的作用によって、OCT1の機能的に重要な変異が、逸脱した薬物作用の原因になりうるかまたはそれに寄与しうる。従って、OCT1変異は、OCT1変異体の保因者である個々の患者における、薬物活性の減少またはその反対に薬物の副作用の発生に関係しうる。許容性に影響する薬物の持続時間および強度の増加が、機能的OCT1変異体の保因者において予測されうる。表7は、薬物誘発胆汁うっ滞に罹患した患者における、OCT1変異体の解析結果を示す。この患者コホートにおけるOCT1変異体の頻度を、薬物誘発胆汁うっ滞(DIC)が観察されない対照群と比較した。SNP(配列番号:24、35)および関連8bp欠失(配列番号:21)と、薬物誘発胆汁うっ滞の発生との有意な関連性である。これらの多型は、正常集団の30%で生じるにすぎないが、薬物誘発副作用を有する患者においては、多型の頻度は70%より大である。従って、これらのOCT1多型の診断は、薬物療法の副作用に遭遇する極めて高い個体リスクを、統計学的有意性をもって予測するのに有用である。このように、OCT1遺伝子型決定は、薬物療法の好ましくない副作用を予測し、それによって制御し防止するのに有効な手段として役立つ。OCT1多型と臨床的表現型との関連性の他の例は、対照と比較した、OCT1遺伝子の遺伝的変異体Gly401Serと、薬物療法の結果として肝副作用を有する患者との有意な相関である(表8)。薬物誘発胆汁うっ滞(DIC)の発症における、OCT1遺伝子のMet408Val多型の影響を調査するために、SNP-遺伝子型によって被験体を群分けした。対照とDIC患者と間において、AおよびG保因者の対立遺伝子頻度における有意差が観察できた(p=0.041)。有意差は、関連変異体17939delTGGTAAGTについても観察されている。肝毒性副作用の発症における、OCT1遺伝子のGly401Val多型の影響を調査するために、SNP-遺伝子型によって被験体を群分けした。群間の遺伝子型の分布は、統計学的に有意であり(p=0.025、フィッシャーの直接確立検定、2面)、肝毒性の発生におけるこの多型の関連性を反映している。有意差は、2群間のAおよびG担体の対立遺伝子頻度においても観察できた(p=0.012)。実施例4:多型の連関は、薬物誘発胆汁うっ滞に関連しているヒト有機カチオン輸送体OCT1の対立遺伝子およびハプロタイプを規定する。いくつかの場合において、遺伝子の規定された遺伝的変異を、対応する表現型に直接関連付けることができる。多くの他の場合、ハプロタイプの決定、即ち、規定された対立遺伝子の組み合わせを知ることよって、単一多型の決定より多く表現型を予測しうることが知られている。従って、連関群および対立遺伝子へのOCT1対立遺伝子を、決定し、指定(assign)することが重要である。この情報は、次のハプロタイプ決定ならびに機能的対立遺伝子および変異対立遺伝子の同定に重要である。SNPが互いに関連していることを示す。33012G>Tはエキソン10における同義多型34044G>Aに関連し、プロモーターにおける-1795G>A置換はエキソン1における同義156T>C変異に関連し、イントロン2における10270C>Tはイントロン5における14602C>T置換に関連している。明らかに、これまでに見出されていない他のSNPも、これらの規定対立遺伝子のより大きい領域に存在することができるが、ここに記載した情報は、対立遺伝子および対立遺伝子クラスターを明確に同定するのに充分である。薬物誘発胆汁うっ滞に関係していることが同定されたMet408-Val多型(実施例3参照)は、少なくとも2つの位置において、OCT1野生型配列と異なる対立遺伝子に属している。従って、薬物誘発胆汁うっ滞の予測用の診断アッセイは、SNPに限定されず、むしろ、これらの多型の存在または非存在によって規定される対立遺伝子の決定からなる。【図1】図1は、OCT1のミスセンス変異の機能的特性決定である。wtおよびOCT1変異体を、ツメガエル属卵母細胞において発現させ、並べて解析した。放射標識有機カチオンのシアニン863阻害性取込みを、30分間にわたって測定した。a)OCT1と比較した、種々の変異体による0.1μM[3H]MPPの取込み。3〜8の各測定の平均取込みおよび標準偏差を示す。wtと比較した差に関して***P<0.001。wtによって示された0.1μM[3H]MPPのシアニン863阻害性取込みは、0.9〜1.8pmol×卵母細胞-1×30分-1であった。水を注入した対照卵母細胞のシアニン863阻害性取込みは、0.02pmol×卵母細胞-1×30分-1より常に低かった。wtおよびOCT1変異体によるMPP取込みの濃度依存性。MPP取込みを、9種類の異なるMPP濃度で測定し、ヒル式をデータに適合させてK0.5値を求めた。3(変異体)または6(wt)の独立実験の平均K0.5±SDを示す。wtと比較した、Cys88Arg(c)およびGly401Ser(d)によるMPP、TEAおよびセロトニンの取込み。TEAおよび1μMセロトニンの取込みを並べて測定した。3実験の平均値±SDを示す。【請求項1】(a)配列番号:4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16または17の核酸配列を有するポリヌクレオチド;(b)配列番号:28、29、30、31、32または33のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド;(c)OCT1遺伝子に対して少なくとも70%、好ましくは少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%の配列同一性を有するポリヌクレオチド、ここで該ポリヌクレオチドは、OCT1遺伝子(GenBankアクセッション番号:GI:9581607)の109130位、109211位、119220位、123551位、126806位、126846位、126863位〜126865位、126922位、126915位、130672位、141819位、142951位、141961位または142993位に少なくとも1つのヌクレオチドのヌクレオチド置換またはヌクレオチド欠失を有する;(d)OCT1遺伝子にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチド、ここで該ポリヌクレオチドはOCT1遺伝子(GenBankアクセッション番号:GI:9581607)の109130位、109211位、119220位、123551位、126806位、126846位、126922位、126915位、130672位、141819位、142951位、141961位または142993位に対応する位置に少なくとも1つのヌクレオチドの置換を有するか、またはOCT1遺伝子(GenBankアクセッション番号:GI:9581607)の126863位〜126865位に対応する位置に3ヌクレオチドの欠失を有する;(e)OCT1遺伝子にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチド、ここで該ポリヌクレオチドはOCT1遺伝子(GenBankアクセッション番号:GI:9581607)の126806位、141819位、142951位または142993位に対応する位置にA、OCT1遺伝子(GenBankアクセッション番号:GI:9581607)の109211位または126846位に対応する位置にC、OCT1遺伝子(GenBankアクセッション番号:GI:9581607)の126922位または130672位に対応する位置にG、OCT1遺伝子(GenBankアクセッション番号:GI:9581607)の109130位、119220位、123551位、126915位または141961位に対応する位置にTを有するか、またはOCT1遺伝子(GenBankアクセッション番号:GI:9581607)の126863位〜126865位に対応する位置にATG欠失を有する;(f)OCT1ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチド、ここで該ポリペプチドは、OCT1ポリペプチド(GenBankアクセッション番号:GI:2511670)の61位、88位、401位、414位または465位にアミノ酸置換を含む;および(g)OCT1ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチド、ここで該ポリペプチドはOCT1ポリペプチド(GenBankアクセッション番号:GI:2511670)の61位にRからCへのアミノ酸置換、88位にCからRへのアミノ酸置換、401位にGからSへのアミノ酸置換、414位にGからAへのアミノ酸置換、420位にMのアミノ酸欠失または465位にGからRへのアミノ酸置換を含む、からなる群より選ばれるポリヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチド。前記ポリヌクレオチドが、トランスポーターOCT1の基質である化合物の異常な血清および/または細胞内濃度の結果としての薬物治療の副作用、または活性の低下、または薬物治療の非活性に関連する請求項1記載のポリヌクレオチド。【請求項3】DNAまたはRNAである請求項1または2記載のポリヌクレオチド。請求項1または2記載のポリヌクレオチドを含有してなる遺伝子。【請求項5】ヌクレオチド欠失および/または置換が対応する野生型遺伝子と比べて変異遺伝子の変化した発現をもたらす請求項4記載の遺伝子。請求項1〜3いずれか記載のポリヌクレオチドまたは請求項4または5記載の遺伝子を含んでなるベクター。【請求項7】ポリヌクレオチドが発現制御配列に作動可能に連結され、原核生物細胞もしくは真核生物細胞またはその単離された画分における発現が可能になる請求項6記載のベクター。請求項1〜3いずれか記載のポリヌクレオチドによりコードされるか、請求項4もしくは5記載の遺伝子によりコードされるか、請求項9記載の方法により得られうるか、請求項10記載の方法により作製された細胞に由来するポリペプチドまたはその断片。請求項11記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体。請求項1〜5に規定されるヌクレオチド置換から生じる1つ以上のアミノ酸置換を含むエピトープを特異的に認識する請求項12記載の抗体。【請求項14】モノクローナルまたはポリクローナルである請求項12または13記載の抗体。請求項1〜3いずれか記載の少なくとも1つのポリヌクレオチド、請求項4もしくは5記載の遺伝子または請求項6もしくは7記載のベクターを含有してなるトランスジェニック非ヒト動物。【請求項16】マウス、ラットまたはゼブラフィッシュである請求項15記載のトランスジェニック非ヒト動物。減少は推定上のプロドラッグまたは薬物の指標である、を含む、OCT1ポリペプチドの分子変異体の活性を調整することができるプロドラッグまたは薬物を同定し、得る方法。【請求項21】(a)薬物活性に応答して検出可能なシグナルを提供することができる成分の存在下で、請求項11記載のタンパク質、請求項17または18記載の固相支持体または請求項1〜3のいずれか記載のポリヌクレオチドまたは請求項4もしくは5記載の遺伝子または請求項6もしくは7記載のベクターを含有する分子変異体遺伝子を発現する細胞と、阻害活性についてスクリーニング対象の化合物とを接触させる工程;および(b)阻害活性から生じるシグナルの存在もしくは非存在またはシグナルの増大もしくは減少を検出する工程、ここでシグナルの非存在または減少は推定上のインヒビターの指標である、を含む、OCT1ポリペプチドの分子変異体の活性のインヒビターを同定し、得る方法。前記細胞が請求項8記載の細胞であるか、請求項10記載の方法により得られるか、または請求項15もしくは16記載のトランスジェニック非ヒト動物により得られる請求項20または21記載の方法。【請求項23】(a)請求項8記載の宿主細胞、請求項10記載の方法により得られた細胞、請求項11記載のポリペプチドまたは請求項17もしくは18記載の固相支持体と、OCT1ポリペプチドと結合することが知られている第一の分子とを接触させ、該ポリペプチドおよび該第一の分子の第一の複合体を形成する工程;(b)該第一の複合体とスクリーニング対象の化合物とを接触させる工程、および(c)該化合物が該第一の複合体の該第一の分子と置き換わるか否かを測定する工程、を含む、OCT1ポリペプチドの分子変異体の活性を調整することができるプロドラッグまたは薬物を同定し、得る方法。【請求項24】(a)請求項8記載の宿主細胞、請求項10記載の方法により得られた細胞、請求項11記載のタンパク質または請求項17もしくは18記載の固相支持体と、OCT1ポリペプチドと結合することが知られている第一の分子とを接触させ、該ポリペプチドと該第一の分子との第一の複合体を形成する工程;(b)該第一の複合体とスクリーニング対象の化合物とを接触させる工程、および(c)該化合物が該第一の複合体の該第一の分子と置き換わるか否かを測定する工程、を含む、OCT1ポリペプチド複合体の分子変異体の活性を調整することができるインヒビターを同定し、得る方法。該測定工程が、該ポリペプチドおよび該化合物の第二の複合体の形成を測定することを含む請求項23または24記載の方法。前記測定工程が前記ポリペプチドに結合されない該第一の分子の量を測定することを含む請求項23〜25いずれか記載の方法。前記第一の分子が標識されている請求項23〜26いずれか記載の方法。請求項11記載のポリペプチドの存在または請求項12〜14いずれか記載の抗体を測定する工程をさらに含む請求項29記載の方法。前記障害が、トランスポーターOCT1の基質である化合物の異常な血清および/または細胞内濃度の結果としての薬物治療の副作用、または活性の減少、または非活性を含む請求項29〜31いずれか記載の方法。ハプロタイプ分析、および固相ハイブリダイゼーション(ドットブロット、リバースドットブロット、チップ)を含む請求項29〜32いずれか記載の方法。疾患を診断するための診断組成物の調製のための請求項1〜3いずれか記載のポリヌクレオチド、請求項4もしくは5記載の遺伝子、請求項6もしくは7記載のベクター、請求項11記載のポリペプチド、配列番号:18、19、20、21、22、23、24、25、26もしくは27のポリヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、配列番号:34もしくは35のポリペプチド、または請求項12〜14いずれか記載の抗体の使用。疾患を治療するための医薬組成物の調製のための請求項1〜3いずれか記載のポリヌクレオチド、請求項4もしくは5記載の遺伝子、請求項6もしくは7記載のベクター、請求項11記載のポリペプチド、配列番号:18、19、20、21、22、23、24、25、26もしくは27のポリヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、配列番号:34もしくは35のポリペプチド、または請求項12〜14いずれか記載の抗体の使用。前記疾患が、トランスポーターOCT1の基質である化合物の異常な血清および/または細胞内濃度の結果としての薬物治療の副作用、または活性の減少、または非活性を含む請求項38または39記載の方法。請求項1〜3いずれか記載のポリヌクレオチド、請求項4もしくは5記載の遺伝子、請求項6もしくは7記載のベクター、請求項11記載のポリペプチド、請求項12〜14いずれか記載の抗体、請求項8記載の宿主細胞、請求項15もしくは16記載のトランスジェニック非ヒト動物または請求項17もしくは18記載の固相支持体を含有してなる単一ヌクレオチド多型の検出のための診断キット。ekouhou.net。