DATA細胞シートを用いた凍結切片やパラフィン包埋切片の作製手順についてCellShifterTMに接着させたまま切片を作成しますと培養皿状での形態を維持したまま回収可能です。CellShifterTMを細胞シートより剥がして作成しますと細胞内骨格が縮みますので、培養皿上よりも少々縮んだ大きさの切片となりますのでご注意ください。細胞シートの端がどの方向か分かるようにあらかじめクリオモルドに印を付けますOCTコンパウンドをクリオモルドに半分程度入れますピンセットを用いてトリミングした原料を上記のOCTコンパウンドに載せる。(OCTコンパウンドがこぼれないように水平を保ちます)冷やし固めた凍結ブロックが、完全に凍結していることを目視にて確認します(凍結後の目安はコンパウンドが透明から白色に変化することを目視にて確認します。早ければ30分以内に確認できます)薄切準備-80°C冷凍庫内に保存してある凍結ブロックをクライオスタット庫内に移します(-80°C→-20°Cへ上げる。60分程度かかります。メス及び筆もクライオスタット庫内に移します)替刃をセットし固定します凍結ブロックをクリオモルドから押し出し、取り外します(取り出す際には、シートの方向がわかるようにメスで印をつけると良い)取り外した凍結ブロックを下図のように埋め込みし、-20°C中に入れて5〜10分凍結します(切断する面を作製します)凍結ブロックをクリオモルドから取り出し、ピンセットを用いて支持台に凍結ブロックを乗せます(載せる前に簡易固定としてOCTコンパウンドをブロックの載せる位置に適量垂らす。固定するときは水平を保つようにします)支持台と凍結ブロックを固定するためにOCTコンパウンドを追加で加えます(固定後、必要な場合は、メスを用いて凍結ブロックの余剰分を切除します)凍結ブロックをセットした支持台をクライオスタッド庫内に5分〜10分静置しますOCTコンパウンドが凝固し凍結ブロックが固定されたことを確認します。参考に、CellShifterTMを用いて細胞シートを回収します。10%ホルマリンの入った培養皿で一晩、4°Cで固定します。カッターを用いて適当な大きさにカットします。カセットにセットします。流水でホルマリンを洗い流します。カセットに重しをして自動包埋器にかけます。作成したパラフィン浸透した細胞シートを用いてパラフィンブロックを作ります。自動包埋器の設定は細胞シートと同じ重さで設定してみてください。reserved.ペ|ジトップへ戻る。