(SDIA)を使用して、胚性幹(ES)細胞からの神経上皮前駆体の導出。here.AbstractES細胞は、それらの新しい治療法の開発のための魅力的なツールとなってすべての胚葉から細胞へと分化する能力を持っている。一般的には、ES細胞の分化は、最初に伝播し、成熟した細胞の表現型に分化することができます未熟な前駆細胞を、生成するための概念に従っています。成熟した神経系細胞への未熟な神経上皮前駆体と第二、その分化の導出と拡大:これはまた、神経細胞の開発は二つの主要な手順を次のようする、ES細胞由来の神経分化に適用されます。ES細胞から神経前駆細胞を製造する一般的な方法は、神経外胚葉を含むすべての胚葉由来の細胞の分化を明らかに胚様体(EB)形成に基づいています。(SDIA)を、使用しています。両方とも、EBの形成とSDIA、神経管、および/または神経堤のような前駆細胞に似ていると考えられているロゼット様構造、の開発を明らかにする。神経前駆細胞を単離し、拡大し、さらに定義されている培養条件を使用して、特定の神経細胞とグリア細胞に分化することができます。ここでは、ストローマ細胞株MS5との共培養実験(2-5)のようなロゼットの生成と分離を説明します。ml)をggrowth的に阻害される。セルが接続されており、単分子層を(夜の成長以上)に形成しているときは、SRMに切り替える。G針と注射器を用いてES細胞培養物からES細胞コロニーを分離する。MS5細胞(6ウェルプレートあたり通常2-3コロニー)で、低密度で1ミリリットル青い先端とプレートで慎重にコロニーをTritrurate。注:ES細胞は、コラゲナーゼやトリプシンを用いて酵素の伝播から取得することができます。ステップ2ロゼットを含むコロニーの形になるまで14-21日のためにMS5フィーダー上にES細胞を成長する。注:変更のメディアが多い。mlのノギンはSRM(3)に追加されている場合、それらの形成が大幅に向上することができるの外縁部に、通常です。-メディアと交換し、セルの仕様(2-5)を促進するための成長や他の要因で補足することができます。注意:MS5間質細胞を切断し、検出を避けます。コロニーはロゼットでパックされている場合、人はまた全体のコロニーを分離することができます。ml)を補充したメディア。ロゼットは、改革と拡大していきます。注:細胞の生存を向上させるためには、プレート滴の小さなクラスターは細胞密度を増加させることができる。-メディアを補完することによって変更することができます。librarian.Discussionこのプロトコルは、SDIAを用いてヒトES細胞から神経上皮細胞を生成し、分離の別の手順を示しています。この方法の応用は多様であり、(例えば1、2、5-9)指定された神経細胞を生成するために多くのプロトコルで使用されています。ロゼットは前方表現型(2、5、10)と神経管の細胞に似たとも神経堤の前駆細胞(11、12)が含まれると考えられている。それらが定義されている培養条件における固有の要因によってパターニングすることができるので、さらに、彼らは、可塑性の一定水準を維持する。このように、SDIA由来の神経前駆細胞は、それらのES細胞の分化のパラダイムの異なる神経細胞集団の導出のための有用なツールとなって中枢および末梢神経系から多くの細胞型を生じさせることができる。gdpr@jove.com.。