hydroxymethylcytosine量の比較。(A)、エンドポイントPCR。(B)、リアルタイムPCR。fourマウス組織からのDNAを分析した。比較のため、リアルタイムPCRのデータがカットされていないDNAに正規化された。標準曲線は、コピー数を決定するために使用された。サンプルは、未消化されているコントロールのコピー数(なし5)でサンプルなし1〜6のコピー数を除算して正規化することができます。HMCの現在の変化を示しています。Discussionこの実験を設定する際に考慮すべきいくつかの重要な点があります。最初に、ゲノムDNAのグルコシル化が完了するまで進行することが重要です。BGTの配列特異性が知られており、それが基質配列のための選択の余地がないように見えることがありますされていません。したがって、いくつかのケースでは、より長いインキュベーション時間が必要になる場合があります。第二に、MspIとHpaII消化は、バックグラウンドシグナルを避けるために完全なものでなければなりません。これらの制限酵素のた​​めに、我々は4時間のインキュベーション時間をお勧めしますが、不完全な切断が観察されたときより長いインキュベーションを行うことができます。NGSがエンドポイントPCRに使用することができるため、可用性に応じて調整することができます。HMCの定量化のためのゲノムDNAを並列で実行されることがあります付属のコントロールDNAを使用することをお勧めします。DisclosuresテッドとRomas両方は、この記事の著者は、NEBの従業員です。Romasは、テッドは、このキットの開発を監督するアプリケーションおよび開発部門のディレクターであることと、キットの主要な開発者です。Vaisvila、スティーブンE.ヤコブセンの研究室、UCLA。01によってサポートされていました。gdpr@jove.com.。