+イメージングに適した寒天包埋網膜スライスを調製するためのプロトコルについて説明します。このメソッドは1つが、単一のシナプス前神経末端の直接パッチクランプ記録を用いて網膜マイクロ回路のリボン型シナプスを研究することができます。双極細胞の2つのクラスは、長期間にわたって持続的かつ高スループットの神経伝達物質の放出を可能にするリボン型アクティブゾーンを、使用することによってこれを実現する。光刺激に対する脱分極との混合ロッドと錐体視の入力を受け取る金魚の網膜のON型の混合双極細胞(Mb)の端末は、サイズが大きいため、両方のリボン型シナプス(〜10-12の研究に適していますμmの直径)とアマクリン細胞の樹状突起との数多くの側面と相互シナプスの接続に。C受容体は、端末上で表明した。放出14,15の短期可塑性を調べることができます。短期的および長期的な可塑性はまた、Mbの端子21に到達する相互フィードバック阻害の記録によって調査することができます。時間の短い期間(例えば〜10秒)以上、アマクリン細胞からのGABA作動性相互フィードバック阻害は、GABA小胞プールの枯渇11を介してペアパルスうつ病を受ける。網膜の内網状層における網膜マイクロ回路のシナプスダイナミクスは、このように直接研究することができる。脳スライスの技術は40年以上前に導入したが、神経細胞の電気的特性の調査のためにまだ非常に便利です、両方とも単一の細胞体、単一の樹状突起や軸索、およびmにしたicrocircuitシナプスのレベル19。​​む(またはろ紙上に配置)し、20、23、18、9スライスされています。このビデオでは、我々は金魚の網膜を使用してプリ埋め込み寒天法を採用しています。金魚の網膜の私達のスライスに巨大な双極細胞の一部の端子は、スライス手順の間に(軸索カット)axotomizedされています。axotomized端子から録音が相馬樹のコンパートメントからの信号を除外するため、これは、私たちは、単一のシナプス前神経終末の入力を分離することができます。別の方法として、また、スライス作業中に切断されていない軸索に接続された端末から記録することで、無傷のMbの双極細胞から記録することができます。全体的に、この実験的なプロトコルの使用は、網膜シナプス生理学、マイクロ回路機能解析、およびリボンシナプスにおけるシナプス伝達の研究に役立ちます。-グルコースを加える。O及び10倍のストック溶液を使用)に浸透圧を調整する。-、A0701、シグマ、リーケ、2001)秤量し、ソリューションをスライスして混ぜる。°:1〜2分間電子レンジで寒天を含む溶液を加熱し、またはそれが完全に溶解するまで、そして急速凝固(ゲル転移温度を防止するために水浴(30-33°C)で寒天をインキュベートC)。-グルコースを毎日追加。O及び10倍のストック溶液を使用)に浸透圧を調整する。内部ピペット溶液のアリコート(1ミリリットルずつ)は、事前に準備し、冷凍庫(-20°C)に保存されます。つの内部ピペット溶液は、通常、双極細胞のカルシウム電流を(mMで)分離するために使用されます。