金魚網膜のスライスのMbの双極細胞の端末の識別。DIC画像の可能性axotomized(軸索カット)と無傷の端末を識別することができます。bに示すように、楕円に表示される可能性が高くなりますしながら。D)によって確認することができます。bでそのまま端末用の軸索と軸索の端末との間の交点の位置を示した。赤い点線は、Mbの双極細胞の端末の輪郭を示した。無傷の軸索(d)は、部分的にカット軸索(E)、または完全に削除された軸索(F)とMbの双極細胞の端末の蛍光画像。アレクサ555(A20501MP、Invitrogen)を蛍光色素は、記録前の内部の溶液を充填した。vol)のパラホルムアルデヒド(P6148、シグマ)(70013、GIBCO)に移し、30秒間インキュベートした分。スライスは、退色防​​止剤(Biomedaコープ)と、水性封入剤でSuperfrostスライド(フィッシャーサイエンティフィック)にマウントされました。710、カールツァイス)の40倍の水浸対物レンズを用いて555nmのレーザー線(赤)で表示された。軸索末端(青矢印)から突き出ている小さなtelodendria付属の存在に注意してください。INL:内顆粒層、IPL:内網状層、GCL:神経節細胞層。axotomizedと無傷のMbの双極細胞の端子の電気的特性。mVの保持電位からの電圧クランプステップの過分極によって活性化(、c)の過渡電流応答。)12、14、15も参照してください。mVのステップの脱分極によって誘発された。kHzの正弦波刺激を使用してください。赤のトレースは、静電容量のデータポイントの平均値です。FFに等しいことに注意してください。2の直接測定+イメージング信号、エキソサイトーシス、およびMの抑制フィードバックB双極細胞端子。mVに電圧クランプステップの脱分極によって活性化させた。+指示薬色素は、パッチピペットに含まれていた。(エキソサイトーシス)の(c)の短期シナプス抑制。+電流(真ん中のトレース)と膜キャパシタンス(下のトレース)。exocytosedプロトンの効果+近隣のアマクリン細胞15、21からの電流ともGABA作動性相互フィードバック阻害を示しています。+のプロトンを介する抑制に注意+現在ともGABAergic相互フィードバック阻害だけでも静電容量は、シナプス小胞のエキソサイトーシスのためにジャンプした最初の脱分極応答、中に存在する。librarian.Discussion我々のプロトコルで重要かつ困難なステップは、寒天溶液(プロトコル3.4)への網膜の一部の移転です。それは慎重に網膜の部分から硝子体液と残留スライスの溶液を除去し、歪みや曲がりなく、それを転送する必要があります。25B、Fisherbrand)使用スライスのソリューションで転送処理を通して作品。網膜のスライスとヘラの残留スライスのソリューションは、折り畳まれたまたは巻きキムワイプ(キンバリークラーク)の角で表面の軽くたたくように注意して除去することができます。横網膜スライスを準備する別の一般的な方法は、フィルター紙ベースのプロトコル23です。20)で250μmの厚切りにする。我々は、フィルター、紙ベースのプロトコルの利点は、健康的な光受容体と無傷のMbの端子にaxotomizedの増加率を含めることがわかります。そこで我々は、網膜のスライスに埋め込まれた単一のMbの端末からの光誘発反応を誘発するために、このろ紙のメソッドを使用します。電気生理学的記録が原因でスライスの無傷とフラット形状及び上記(1)号に掲げる要因をより容易に実行されるセル。光反応を記録するためのプロトコル寒天ベースの準備の網膜神経細胞のSは、以前はJoveの2に掲載されました。寒天やろ紙の技術を組み合わせて使用される水平網膜スライス標本は、以前にJoveの5に掲載されました。我々は、異なる技術を比較するために私たち自身との組み合わせでこれらのビデオを見てお勧めします。脊椎動物の網膜スライスにおけるリボン型シナプス前終末へのダイレクトアクセスは、私たちは、リボン型のアクティブゾーンでシナプス伝達を調査することができます。それはまた私達が直接網膜マイクロ回路のシナプス生理学を勉強することができます。この手法は、抑制性アマクリン細胞を含むと神経節細胞1、16、10をスパイクシナプス後パートナーと、プリおよびポストシナプス信号のペア録音のために特に有用となります。ラット蝸牛内有毛細胞と求心性樹状突起間のリボン型シナプスにおけるペアレコーディングが可能であり、7で記載されている。カルシウム想像力Mbの双極細胞の端末のNGは8と網膜のスライス17、および3金魚アマクリン細胞における急性解離細胞で行われている。optogeneticのアプローチのための大きな改善を示している。一緒に、これらのトランスジェニック技術を伴うでしょう。librarian.Disclosures我々は、開示することは競合する利害関係はありません。Acknowledgments私たちがラボでプロトコルを使用して起動するときに我々は、寒天包埋網膜スライス標本の彼の種類の説明については、博士フレッドリーケに感謝。我々はまた、回路図の概要と博士の図については、ローリVaskalisに感謝。テキストとビデオでの有益なコ​​メントVeeramuthuバラクリシュナンとSoyounチョ。gdpr@jove.com.。