そこで、鶏に対する強毒株で多くみられる血清型O78の菌株(J29)を選択し、これより相同組換えによりCRP遺伝子欠損変異株を作出した。【材料及び方法】プラスミドにクローン化したJ29のCRP遺伝子から、オープンリーディングフレーム内351bpの領域を常法により欠損させた(⊿crp)。これを遺伝子置き換え用のプラスミドベクターであるpCVD442にクローン化し、大腸菌SM10λpir株に形質転換してJ29に接合伝達させた。この株を5%の蔗糖を含む培地に発育させて、乳糖非分解性でかつアンピシリン感受性となったクローン(AESN1331)を選択した。【結果】PCR及び塩基配列の解析から、AESN1331ではCRP遺伝子が⊿crpに置き換わっていることが確認された。本株は乳糖の他、多数の糖の分解能を欠失し、トリプトファンデアミナーゼ産生性、インドール産生性及びコンゴーレッド吸着能も失っていた。rRNA遺伝子の配列より大腸菌であることが確認された。本株を5週齢SPF鶏の静脈内に接種して測定したLD50値は、O78強毒株に比べて約20倍、及び親株に比べて約10倍それぞれ高くなり、鶏に対する病原性が低下した。【考察】CRP遺伝子欠損変異株であるAESN1331では、種々の遺伝子の発現に変調をきたした結果、鶏に対する病原性が低下したものと推察された。2008要旨:【背景及び目的】前演題で作製した鶏大腸菌血清型O78菌株由来CRP遺伝子欠損変異株(AESN1331)の鶏体内での定着性を調べ、次に本株接種後に血清型O78強毒株で攻撃することにより、変異株の免疫原性について調べた。【材料及び方法】試験には4日齢のSPFレイヤーヒナを用い、1群につき10羽を供試した。剖検を行い、接種菌の回収を行うことにより調べた。あわせて病理組織学的検査を実施した。免疫原性は、AESN1331を1羽あたり約107CFUずつ4週間隔で2回噴霧接種し、2回接種後2週に強毒株を静脈内攻撃した後の死亡率で評価した。ヒナへの2回の接種方法について、噴霧-噴霧及びより実用的な噴霧-散霧接種による有効性について調べた。AESN1331群で異常は認められなかったが、J29群では肺、心臓及び肝臓に軽度の組織変化を認めた。免疫原性試験では、攻撃後の死亡率は無接種対照群で90%であったのに対してAESN1331接種群では10%であり、接種群の死亡率は有意に低下していた。投与方法については、無接種対照群の死亡率が100%であったのに対して、噴霧-噴霧群で0%、噴霧-散霧群で30%であり、何れの接種方法でも防御効果が認められた。【考察】AESN1331は、接種した鶏の気道に短期間定着したのち、速やかに消失することが判明した。本株を噴霧又は散霧接種した鶏には、鶏大腸菌強毒株の静脈内攻撃に対する防御免疫が付与されることが示された。gibsoni感染症は特異的な治療法や予防法が確立されておらず、その対策が望まれている感染症のひとつである。バベシア感染動物では異種のバベシアに対して感染抑制が認められ、バベシアの種間で相同性の高い抗原の存在が示されている。microtiはマウスで容易に感染すると同時に、イヌにも感染性を有することが報告されている。gibsoniに対する感染経過を観察する。microtiを投与後、感染経過を観察した。gibsoniで攻撃し、感染経過を観察した。rodhainiについても同様の試験を行った。gibsoniで攻撃した場合、攻撃対照と比較し感染赤血球率の抑制が認められた。gibsoniで攻撃した場合、攻撃対照と比較し感染赤血球率の抑制は認められなかった。gibsoni感染における感染赤血球の増加を抑制できる可能性が示唆された。(Cp)は鶏壊死性腸炎(NE)の原因菌である。NEの実験的な再現例は幾つかの報告が見られるが、いまだ安定したモデル系は確立されていない。我々は実験モデル系の確立を目標として、今回はまずブロイラーへのCpの実験感染を行った。【材料と方法】2週齢のブロイラー20羽を2群に分け、1群にCpを投与し、他の1群は非投与対照とした。給餌には鶏用飼料と魚粉を等量混合した高タンパク飼料を用いた。B遺伝子保有菌株を選択した。CFU/mL)し、1羽当たり1回2ml、朝・夕2回ずつ5日間投与した。最終投与後翌日に全羽を剖検し肉眼病変及び病理組織学的評価を行った。B遺伝子をマーカーとして利用した。B遺伝子の有無を確認した。【結果】Cp投与群10羽中9羽の小腸に限局性の粘膜の粗造化及び壊死性病変が散在し、組織検査では7羽に絨毛先端部で細菌塊を伴う壊死巣が散在性に認められた。B遺伝子が検出された。B遺伝子保有菌は検出されなかったことから、小腸の病変は投与したCpによって起こったものと考えられた。【考察】本試験ではブロイラーの腸管にNE病変を再現できたものの、野外症例と比較して軽度であった。Bと病変形成の因果関係について更なる検討が必要である。hyperostosis)は新生豚にまれに発生し、前肢が著しく腫脹して、死産か生後数日中に死亡の転帰をたどる。先天性過骨症の一例を検索したので、その病理組織学的特徴を報告する。【症例】ブタ、雌、0日齢。2009年1月28日朝に分娩されたが、前肢が著しく腫脹しており、生後すぐに死亡した。翌29日に病性鑑定依頼で弊所に到着した。【材料と方法】全身臓器と四肢を採取してホルマリン固定し、パラフィン切片を作製した。必要に応じてギ酸により脱灰した。パラフィン切片はHE染色し、さらに前肢の切片にはアルシアン・ブルー・PAS重染色、ビメンチンに対する免疫染色を行なった。ウイルス検査では有意な病原体は検出されなかった。肉眼的に左右前肢は高度に硬化、腫脹し、割面では骨の肥大と間質の水腫および増生が見られた。組織学的には、橈骨と尺骨の骨膜下で層板骨表層から線維性骨梁が放射状に伸長する異常増骨が観察された。骨周囲組織は重度の水腫を呈してアルシアン・ブルー染色に陽性を示し、ビメンチン陽性の間葉系細胞の増生が顕著で、軟骨様構造の構築も散見された。骨格筋線維は萎縮し、密度が低下していた。前肢以外には特記すべき変化は見られなかった。【考察】本症例でみられた骨病変は成書に記載されている所見と同様であったが、骨周囲組織での間葉系細胞の増生及び軟骨様構造の構築は我々が調べた限りでは記載が見たらず、病理発生機序にも関連する重要な所見と考えられた。A研究所において、研究用に飼育されていたネコで、出生時より成長不良が認められた。腎臓はどちらも硬結及び一部瘢痕化を呈し、割面では腎皮質の菲薄化が認められた。軽度から中等度の結合織の増生及びリンパ球浸潤が認められた。尿細管で認められた結晶状物は無色透明~好塩基性、滑車様ないし角柱様の構造を示し、コッサ染色では褐色~黒褐色に染色され、偏光下では複屈折性を示した。塩酸処理を加えた条件下でその染色性は消失した。これらの結果から本結晶構造物はシュウ酸カルシウム結晶と同定された。糸球体ではボーマン嚢に濃縮尿と思われる好酸性漿液物の貯留が散見されたが、PAS染色、PAM染色及びマッソントリクローム染色で毛細血管基底膜の肥厚やメサンギウムの増生は顕著ではなかった。腎臓表面の血管において石灰沈着を伴う器質化血栓の形成が認められた。シュウ酸カルシウム結晶の沈着を伴う尿細管上皮の変性・壊死及び間質性腎炎と診断し、疾患名をシュウ酸塩腎症とした。シュウ酸症は発生機序により原発性と続発性に分類されるが、本症例は室内で管理された食餌で飼育されていたことや、同腹の猫で同様の肉眼病変が観察されていたことから、原発性のシュウ酸塩腎症が疑われた。要旨:【目的】Zuckerラットは、アルビノラット13C系と黒色ラットM系との交雑種13M系の突然変異として発見され、多食による肥満を呈することで世界的に広く用いられている肥満モデル動物である。カフェインは食品および医薬品中に広く用いられているが、カフェインの体重増加抑制作用については不明な点が多い。病理組織学的検査を実施した。mg/kg/day)であった。(Na、K、Cl)が高値を示し、血漿中カフェイン濃度は中毒域に達した。mg/kg/day群では尿糖、尿中電解質(Na、K、Cl)が高値を示したが、血漿中カフェイン濃度は安全域内を推移し、また、摂餌量にも影響はみられなかった。尿糖および尿中電解質(Na、K、Cl)の増加は、カフェインの腎臓におけるNa再吸収阻害作用に関連した変化であると推察されたが、その他の検査項目ではカフェイン投与に起因すると考えられる変化は認められなかった。脂肪組織の病理組織学的検査を実施中である。要旨:【目的】ウマの運動時に骨格筋で大量に産生される乳酸は、各組織で異なるサブユニット構成比を持つ乳酸脱水素酵素(LDH)により、可逆的に代謝される。本研究では、LDHのA(骨格筋)型およびB(心筋)型サブユニットをそれぞれコードするウマLDHAおよびLDHBの遺伝子解析を試みた。caballus)の頚部骨格筋および心筋から抽出された全RNAを用いて、RT-PCR法およびダイレクトシークエンス法により決定した。決定および系統解析を行った。各組織におけるウマLDHA、LDHBおよびGAPDHの遺伝子発現量は、リアルタイムPCRを用いた比較Ct法によって解析した。【成績】ウマLDHAおよびLDHBの全長cDNAは、それぞれ1,676bpおよび1,295bpであり、それぞれ第7および第6染色体上で8つのエクソンから構成されていた。推定アミノ酸配列の解析により、ウマLDHBは他の哺乳動物で認められているGlu15が欠損し、その全長配列を他の哺乳動物と異にした。Glu15の欠損は、遺伝子解析したウマ科6種において同様に認められた。三次元構造予測モデルでは、Glu15の欠損によるウマLDHBの構造変化が認められた。ウマLDHAおよびGAPDHの遺伝子発現量は脳で最も高く、骨格筋との相対発現量はそれぞれ約3.9倍および1.9倍であった。ウマLDHBの遺伝子発現量は心筋で最も高く、骨格筋との相対発現量は約3.1倍であった。以上、ウマLDHAおよびLDHBは、ウマ科動物特有の特徴を持つことが示唆された。良い成績を報告している。向けての対応課題の一つである。今後日本での異種移植を視野に入れた場合、前臨床研究の推進およびドナー確保の両面から、国内におけるGalT-KOブタの生産とその性能試験が必要である。慢性実験モデルを確立した後、平成19年度からは、国内でのGalT-KOおよびGalT-KOプラス遺伝子導入ブタの作出、更にその臓器を用いた移植プロジェクトを開始した。)へ、核移植技術により作出したMGH・GalT-KOミニブタ体細胞クローン胚を移植することでGalT-KOミニブタの作出に成功し、そのGalT-KOブタ左腎を用いた国内第一例目の国産GalT-KOミニブタ・サル間腎移植を行ったので結果を報告する。おいて屠殺場由来の家畜ブタ卵子に核移植することで作出したクローン胚をNIBS系ミニブタに移植し、GalT-KOミニブタを作出した。Procedureとして左腎を摘出しサルへ異種腎移植を行った。移植日を含め短期間追加した。【結果】MGH・GalT-KOミニブタ体細胞クローン胚をNIBS系ミニブタに移植することで作出したGalT-KOミニブタは、誕生後、山梨から鹿児島への輸送および左腎摘出手術の侵襲にも耐え、現在も順調に生育している。異種腎移植後のサルのCre値は正常域(<1.2mg/dl)を維持し、他のグループから報告される術後1-3日目の一過性Cre上昇や血小板減少も認めなかった。タンパク尿はこれまでの米国での自験症例に比較し明らかに軽微であった。Day14に薬剤性と思われる高血糖が生じ、薬物による治療効果が不十分なため、Day15に病理学的検討を優先する目的でサルを犠牲死させた。示唆する所見も認めなかった。【考察】国内初の国産ミニブタを核移植レシピエントとしたGalT-KOミニブタ作出に成功し、国内初の国産GalT-KOブタからサルへの異種腎移植を行い、術後2週間にわたり拒絶を認めず、正常Creを維持した。Dataであるが、sTMによるタンパク尿軽減効果が示唆された。本成功を第一歩として、今後、経験を積んだブタ作出チームと大動物移植チームの協力のもとで、臨床異種移植の実現を目指していく。