要旨:【背景と目的】PRRSVの野外感染豚では通常細菌などの二次感染を伴うため、多彩な肺炎像が観察される。PRRSVによる豚の肺病変を解析するため、本ウイルスの実験感染豚の肺について病理学的検索を行った。8並びにPRRSVに対する免疫染色を実施した。血管周囲にリンパ球浸潤が認められ、肺病変はウイルス接種2週後でより進行し、肺胞上皮の腫大及び増生による肺胞壁の重度肥厚や肺胞内へのマクロファージ、多核巨細胞の滲出及び細胞崩壊物の充満が認められた。免疫染色では肺におけるPRRSVの主要感染細胞は肺胞マクロファージであった。PRRSV陽性細胞は肺リンパ節では胚中心に局在し、扁桃では扁平上皮層においても認められ、それらの形態学的特徴からマクロファージまたは濾胞樹状細胞と考えられた。【考察】PRRSVの実験感染により間質性肺炎が認められ、その病像はPRRSV接種2週後でより高度であった。病変形成機序におけるPRRSV感染細胞の関わりについては今後の検討がさらに必要と思われる。4%リン酸緩衝パラホルムアルデヒド溶液固定、HE染色。ガチョウ血球を採取する目的で飼育されている数羽のガチョウのうちの1羽が突然死亡した。このガチョウは平成19年9月に動物園から譲渡されて以来、飼育されていたものであり、死亡の前に特に異常な症状などは見られていなかった。両側の趾蹠に数個の結節形成が見られ、趾瘤症を呈したが、他には特に異常は無かった。開腹したところ、腹腔内に大小の腫瘤が多発しており、最大のものは直径約15cmの大型腫瘤であった。同腫瘤は、白色から黒色の大小の結節状を呈し、割面は充実性で膿瘍が散在した。腹膜及び腸間膜にも、直径約1cm~1.5cmの黒色の小~中型の腫瘤が散発していた。剖検時、卵管もしくは精巣などのような生殖器系臓器を確認することは出来なかった。大型腫瘤では組織の変性や壊死の程度が重度であるため、提出標本は肝臓近傍に存在した腹腔内腫瘤の1つから作製した。要旨:[背景と目的]牛コクシジウム原虫種はオーシストの形態によって鑑別されているが、類似した複数種が混在している場合、正確な鑑別は困難である。これまでに本原虫において遺伝子学的解析に基づく鑑別法は報告されていない。zuernii)を対象にして、客観的な鑑別方法を確立するためにITS-1領域の塩基配列の解析、その配列に基づく系統解析および種鑑別PCR法の検討を行った。[方法]野外の牛糞便からオーシストを分離し、形態による鑑別で複数種の混在がない、もしくは一種が優勢であると判断したサンプルからDNAを抽出した。rDNAにプライマーを設計し、ITS-1領域を含んでPCR増幅させた。ITS-1領域の塩基配列に基づく系統解析および種固有の塩基配列に基づく種特異的プライマーの設計を行った。[結果]ITS-1領域の塩基配列の相同性は、同種間では91.9~100%、異種間では21.2~75.4%を示した。zuerniiであり、これらは系統解析においても一つのクラスターを形成した。alabamensisは220bpsと極めて短かった。設計した種特異的プライマーは複数種の混在の有無に関わらず予想したPCR産物を増幅し、その検出限界はオーシストに換算して20個以下であると考えられた。[総括]牛コクシジウム原虫のITS-1領域の塩基配列の差異は、同種間では少ない一方で異種間では多く、種特異的な部位を特定することが可能であった。確立した種鑑別PCR法は複数種が混在した材料であっても、種特異的に増幅することが可能であり、牛コクシジウム病の診断や疫学的調査に有用であると期待される。鶏コクシジウム原虫から抽出した抗原を用いる血清学的診断法は、虫体の準備が煩雑である上に種間で交差反応性が高く、種特異的な評価には適していない。tenellaに特異的な抗原を利用して種特異的な感染抗体を検出する系を構築した。5-7タンパク質をコードするcDNAをクローニングし塩基配列を決定した。5-7タンパク質を発現する組換えバキュロウイルスを作製した。kDaの組換えタンパク質の発現が確認された。【ELISA法への応用】本組換えタンパク質をNi-NTAカラムを用いて精製し、ELISA抗原とした。tenellaそれぞれの感染血清を用いてELISA法を実施した。tenellaの感染血清とのみ強く反応し、他の4種の感染血清とはほとんど反応が認められなかった。tenellaを含有した市販の鶏コクシジウム生ワクチンを投与した鶏の感染血清を用いて、本ELISA法の評価を行った。繰り返し感染が起こらないケージ内で飼育した鶏に4週間隔で2回、1ドーズずつ生ワクチンを投与した。初回投与後2週から本ELISA法によって血清中に抗体が検出され、投与後4週にピークを示した。二回目のワクチン投与後2週に二度目のピークを示した後、漸次減少した。tenellaの感染抗体を特異的に検出することが可能であり、生ワクチンの評価や野外の疫学調査に有用であると考えられた。要旨:おそらく、我々は鶏コクシジウム原虫(以下、鶏コクシ原虫)をいつまでも根絶することはできない。鶏コクシ原虫は、もとより鶏と周辺環境に適応して進化を遂げている上に、その生態は現在の集約的な養鶏生産に極めて良く適合しているためである。我々は鶏コクシジウム症(以下、鶏コクシ症)の発生ならば制御することができる。先人達の優れた研究により実用化された、鶏コクシ症生ワクチン、抗コクシジウム予防剤(以下、予防剤)および治療剤が今や利用できるからである。実用化されてからすでに長くの年月を経ているが、未だにそれらの多くは有用性を堅持し続けている。鶏コクシ症の問題は無くならないのであろうか。鶏コクシ原虫、鶏コクシ症に立ち向かう、いくつもの策を我々は持っているのにもかかわらず、完璧に制御できていると言えるような状況ではない。本フォーラムでは、鶏コクシ症対策における現状およびその問題点の分析、ならびに今後どうすれば克服していけるのか、新たな戦略について概観してみたい。要旨:細菌やウイルスなどと比較して寄生虫は総じてサイズが大きいため、種の同定や疾病の診断には、主に形態学的特徴が指標として利用されてきた。この方法は高度な熟練を必要とするが、近年、寄生虫の感染やその被害が大きく減少する中で、検査に必要となる技術や経験を培えない状況が臨床現場において生じている。遺伝子を対象とする検査法は、作業を標準化しやすく、得られる成績も極めて客観的である。寄生虫学の分野でも、年々新たな遺伝子検査法の確立が進み、これまでの方法を代替するようになってきている。本講演では演者らが開発したものを含め、養鶏産業で問題になる寄生虫を中心にして遺伝子検査法の応用事例をいくつか紹介したい。