:インフルエンザウイルスのゲノムはマイナス鎖RNAからなり、ゲノムの複製・転写はゲノムにコードされている3種類のサブユニット、PB1、PB2及びPAからなるRNA依存RNAポリメラーゼでなされる。PB1はRNA合成活性、PB2は宿主細胞mRNAのcap1構造を認識し結合する活性を持っている。PAの機能については明らかでない。ウイルスRNAポリメラーゼは鋳型RNAから2種類のRNA、mRNAと複製中間体のcRNAを合成する。novoに開始される。一種類のポリメラーゼの機能変換には宿主因子の関与が想定される。systemを利用してスクリーニングを行った。vitro転写への影響と細胞内局在を報告し、細胞に於ける機能及びウイルス感染に対する影響を論じたい。日本獣医学会(2004年)要旨:[目的]イヌパルボウイルス(CPV)およびイヌコロナウイルス(CCV)はイヌの消化器疾患に関与する代表的なウイルスである。CCVは死亡率が低く、予後も比較的良好とされるが時折重症例も認められ、野外においては伝播力が強いことから、CPVとの早期鑑別診断が臨床上きわめて重要である。そこで、CPVあるいはCCV感染症を同時に早期診断することを目的として、イムノクロマト法による診断キットを作製し、その有用性を検討した。[材料と方法]精製CPVおよび精製CCVを免疫原として、それぞれに対するモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を作製した。精製抗体を固相化または金コロイド標識し、イムノクロマトキットを作製した。CPVについては3種類の亜型(2型、2a型、2b型)に対する反応性を検討した。歳齢のビーグル犬を用いて行い、感染後2週間の排泄ウイルス検出を行った。本キットによるウイルス検出結果を、CPVについては豚赤血球凝集試験(HA)、CCVについてはPCRおよびELISAによる検出結果と比較検討した。[結果と考察]本キットは、CPV検出においては3種類全ての亜型を検出できることを確認した。CPV感染試験では感染4~5日目から約5日間、特徴的な臨床症状を呈した全例でウイルス排泄が認められ(HA価16~5120倍)、これら検体からの本キットによるウイルス検出が可能であった。CCV感染試験では感染1~2日目から約2週間、軽い下痢の症状とともに全例でウイルス排泄が認められた。個体間および経過内でのCCV排泄量にはバラツキがあったが、本キットでは半定量的に検出が可能と考えられた。本試験により、今回試作したキットがCPVおよびCCV感染症の早期診断に有用であることが示された。今後、野外例を含めて、さらに有用性を検討して行く予定である。日本獣医学会(2004年)要旨:[目的]BSE検査における異常なプリオンタンパク質(PrP)の検出には多くの抗体が使用されているが、非定型あるいは若齢牛のBSEや肥飼料原料などからの高感度検出に対応するためには、牛PrP抗体パネルの充実が必要である。本研究では、新規に作製した抗牛PrP抗体の性状を報告する。[材料と方法]大腸菌発現牛PrP(rbPrP)あるいは合成ペプチドをプリオンレスマウスに免疫し、7個のモノクローナル抗体(mAb)を作製した。各抗体についてELISAおよびウエスタンブロット法(WB)により牛正常PrPとの反応性を検討した。反応性の高いmAbについてはエピトープ解析を行った。2個のmAbを用い、牛PrP検出系の確立を試みた。[結果と考察]mAbのアイソタイプは5個(2B11、2D8、4B5、6C4、6G3-2)がIgG1、2個(1D12、17F11)がIgG2aであった。いずれもWBでの反応性は高く、ELISAでの反応性は2D8以外では同程度に高かった。5個のmAb(1D12、2B11、4B5、6G3-2、17F11)のエピトープ解析を行い、2カ所3種類のエピトープを確認した。2個のmAb(6G3-2、17F11)を用いた牛PrP検出系では、精製rbPrPを数pg/mLのレベルまで検出できた。これらの成績より、本研究で作製した抗体は、異常PrPの検出に貢献できると考えられた。本研究にプリオンレスマウスを提供していただいた糸原重美先生(理化学研究所)に深謝いたします。低侵襲性の免疫法として期待されている。我々は、これまでにオーエスキー病(第130回本学会)、豚回虫症(第131、134、136回本学会)などの感染防御に経鼻免疫が有効であることを示してきた。ワクチン(日生研)を、超遠心法で濃縮し(CRV)使用した。5μgと共に6週齢雌ddyマウスに経鼻投与し、更に初回投与後14、21、28、35日目に追加免疫した。42日目に血清を採取した後、致死量(46LD50)の狂犬病ウイルスCVS株で脳内から攻撃し14日間生死を観察した。対照群としてCRV30μlを2回腹腔免疫した群および非免疫群を設定した。攻撃時の狂犬病ウイルスRC-HL株に対する血中中和抗体価をマイクロプレート法により測定した。【結果と考察】攻撃試験では、CT添加CRV経鼻免疫群で6頭中4頭(67%)のマウスが生残し、CRV単独経鼻免疫群では6頭中1頭(17%)のマウスが生残した。CRV腹腔免疫群は全頭生残し、非免疫群は全頭死亡した。CT添加経鼻免疫群の血中中和抗体価は、640~20480倍であり、腹腔免疫群(5120~20480倍)より若干低い程度であった。CRV単独経鼻免疫群では中和抗体価は検出されたものの、前述の2群よりも低値(80~2560倍)であった。以上の結果より、不活化狂犬病ウイルスを用いた経鼻免疫法により、狂犬病ウイルスに対する防御免疫が誘導されること、さらにCTの添加によりその誘導能が増強されることが示された。経鼻免疫の効率は、腹腔免疫より低く、免疫の効率化が課題であると考えられた。要旨:【目的】当研究所において維持しているニホンウズラTKP系において羽装が黒色を示すミュータントが出現した。このミュータントの形質を支配する遺伝子解析はほとんど成し遂げられていない。そこで、このミュータントの遺伝子分析を目的として本研究を行なった。【材料および方法】野生型ニホンウズラでは、孵化時の羽装黄褐色で背中に縦隔模様が存在する。本研究に用いたミュータントでは、孵化時は全身黒色で野生型と同様に背中に縦隔が入り、脚は黒色である。この表現型の差異によって、野生型ウズラとは識別可能である。性成熟の際、全身が黒色であるため、野生型ウズラのように胸の羽装による雌雄鑑別ができない。そこで本ミュータントの遺伝的特性を解明するためミュータントウズラと野生型WE系を交配し、遺伝子分析を行なった。【結果および考察】分析の結果、F1は68個体すべて野生型であった。次に、F1×F1の交配を行いF2におけるミュータントウズラの出現率を検索したところ、野生型44個体、ミュータント18個体となった。F1×ミュータントの戻し交配では、野生型42個体、ミュータント50個体が得られた。これらの結果は、本ミュータントが常染色体性の劣性遺伝子により交配されていることを示した。この遺伝子記号をrbと命名した。今後、既に報告されている常染色体性の優性遺伝子に支配され、本ミュータントと同様な羽装を示すミュータントBK系との交配実験を行い、分析を行なっていく予定である。産卵成績に関しては、他の系統と比較した場合少し低い。受精率、孵化率においても、WE系を含む他の系統と比較した場合、少し低い傾向にある。これらの点についても今後解析する予定である。行動特性は、飼育管理や生産性に大きく影響する。違いに起因するならば、遺伝子を指標とした選抜が可能になると考えられる。1相同領域を、鳥類で増幅し、多型解析を行った。相同領域をPCR増幅し、塩基配列を解析した。【結果】家禽では、ヒトの多型領域に相当する部位に、ニワトリで9回と8回、ウズラで9回、ホロホロチョウで12回、コウライキジで9回のプロリンの反復が存在していた。ニワトリのアロウカナと土佐地鶏の各10個体では反復数9回、黒色ミノルカ22個体では反復数8回のアレルが見出された。対馬地鶏と比内鶏では9回と8回の両方が見出された、ウミウでは9回、ハシブトガラスでは3回の反復が確認された。今回発見された多型は、ニワトリの行動特性の個体差や品種差の遺伝的背景の解明の重要な情報になると考えられる。要旨:インターフェロン(IFN)は抗ウイルス作用等、多様な生物活性を持つサイトカインである。人体用ですでにC型肝炎、B型肝炎の治療に主に用いられ、かなりの成果を挙げている。プロジェクト「組換えサイトカインによる家畜疾病防除技術の開発」で我々の行ってきた検討について紹介し、あわせて今後の展望などについて考察したい。精製タンパク質の応用タンパク質を精製し、医薬品として用いるにはコストがかかるが、製剤としてコントロールしやすい。実用化されているIFN製剤はすべて精製タンパク質を原薬としている。我々はイヌIFN-α1、βおよびγの遺伝子をクローニングし、精製のためHis-tagを付加してバキュロウイルスベクターを用いて生産した。感染培養上清中のIFN活性は、それぞれ、約40万LU/mL、10万LU/mLおよび2万LU/mLであった。IFN-γはNi-NTAカラムで精製できなかったが、IFN-α1、βは純度90%以上に精製され、比活性はいずれも107LU/mgタンパク質であった。イヌに106LU/kgで投与したところ、体温上昇や2-5A合成酵素の誘導が認められた。ウイルスベクターへの応用IFNは抗ウイルス作用があるので、ウイルスに組み込んで発現させると弱毒化因子として働く。我々はモデルとしてイヌIFN-β、γ遺伝子を組み込んだワクチニアウイルス(VV)を構築した。組換えVVはウサギ腎臓細胞では親VVと同様に増殖するが、イヌ細胞では感染価が低moiのときに増殖せず、弱毒化していると推測された。抗IFN-γ中和抗体存在下では、IFN-γを生産する組換えVVの増殖が回復した。組換えウイルスベクターを利用するには環境へ放出しなければならない。カルタヘナ法における環境影響調査の運用が実用化の鍵であろう。IFN誘導剤の応用センダイウイルスリポソーム(GenomOneTM)を利用したDNA導入法を検討中、GenomOneTM単独で2-5A合成酵素がIFN-α投与と同じ程度に誘導されることが見出された。血清中には検出限界程度のIFNが認められるに過ぎなかったが、GenomOneTMはIFN誘導剤と考えられた。IFN誘導剤の応用は人工二重鎖RNAが臨床で検討された。副作用が強く、実用化は1例に過ぎない。最近のNDVを利用したoncolytic治療などでは、IFNを含む複数のサイトカインが有効に抗腫瘍効果を発揮している。immunity活性化における再評価が課題ではないか。IFNは長野・小島により報告されて今年で50年になる。この間、IFNについて多くの研究がなされたが、いまだに新しい生物活性が報告されている。本報告がサイトカインを応用した製剤開発のヒントを提供できれば幸いである。医学分野での研究のほか、薬効・薬理試験などにおいても利用され始めている。NIBS系ミニブタはピットマンムーア系、タイワン小耳種、ゲッチンゲン系3種類のミニブタを起源とする小型で均整がとれた白毛色ミニブタである。我々はNIBS系ミニブタを様々な研究分野への応用するために生物学的背景データを収集している。今回、そのデータの一部、ならびにミニブタではあまり報告されていない薬物代謝あるいは動態成績について報告する。肝マイクロソームを調製し、チトクロームP450(CYP)含量および薬物代謝酵素活性(エトキシレゾルフィン-O-脱エチル化活性、トルブタミド水酸化活性およびミダゾラム-4-水酸化活性)を調べた。【結果と考察】出生時体重は雄が雌より高値を示したが、1ヶ月齢以後の体重は雌が雄よりも高値を示した。産児数は約4匹/腹、離乳児数は約3匹/腹であった。血液学的検査および血液生化学的検査において雌雄間で大きな差が認められた検査項目はなかった。薬物代謝・動態の検査成績においてアンチピリンの全身クリアランス、CYP含量は雌雄でほぼ同様の値を示したが、雄の薬物代謝酵素活性は雌より低値傾向を示した。アンチピリンの全身クリアランスはヒトでの報告値と同様であった。ミダゾラム-4-水酸化活性はCYP3Aのプローブとして知られているが、得られた結果はヒトとほぼ同様の値であった。おいてヒトのモデルとして有用であると考えられた。日本実験動物学会(2004年)要旨:安全性試験、特に血液・骨髄毒性や免疫毒性の評価において、骨髄細胞数の測定は重要なパラメーターの一つである。骨髄細胞数の測定には、これまではメランジュールを用いる容積法あるいは大腿骨から全ての骨髄を取り出す重量法などが用いられてきた。今回、我々は従来の方法に比べ簡便かつ短時間で骨髄細胞数が測定できる方法を確立した。ラットを安楽死させ大腿骨を摘出して大腿骨頭の一端を切断した。18Gの注射針の重量を電子天秤で秤量し、この注射針をシリンジに取り付け針を大腿骨内へ挿入した。骨髄液を軽く吸引した後、針を外して重量を秤量しこの重量差を骨髄量とした。白血球モードで細胞数を測定した。g)について左右大腿骨の骨髄細胞数を測定した。加えて4、5、6および10週齢の雌雄SDラットの骨髄細胞数を測定し、本法と従来より汎用されてきたメランジュール法との比較を行った。1回の吸引骨髄量は約10~20mgであった。SD、BNおよびMESラットの左右の大腿骨における骨髄細胞数はほぼ同じ値を示し、既報の成績と一致した。SDラットの4、5、6および10週齢における骨髄細胞数はそれぞれ雄で2.72、2.39、2.26および1.96(×106個/mg骨髄)、雌で2.75、2.47、2.38および1.98(×106個/mg骨髄)であった。以上の結果から、我々が確立した骨髄細胞数の測定方法は体重が約60g以上の動物であれば適用可能であること、左右どちらの大腿骨を用いてもほぼ同様の値が得られること、メランジュールの方法と比べて加齢に伴う変化にも大きな差はないことが明らかとなった。このことから本法は安全性試験のみならず、小動物の骨髄細胞数を測定する方法として有用であると考えられた。今後更に例数を増やすとともに安全性試験に応用する予定である。日本トキシコロジー学会(2004年)要旨:安全性試験、特に血液・骨髄毒性や免疫毒性の評価において、骨髄細胞数は重要なパラメーターの一つである。我々は従来の骨髄細胞数測定法(メランジュール法など)に比べ、簡便かつ短時間で正確に骨髄細胞数が測定できる方法を確立した。その方法の概略とそれを用いた実験成績について報告する。ラットから大腿骨を摘出後大腿骨頭の一端を切断し、予め18Gの注射針の重量を測定後、この注射針をシリンジに取り付け針を大腿骨内へ挿入した。骨髄液を針内に吸引した後、針の重量を測定し、この重量差を骨髄量とした。再度、針をシリンジに取り付け緩衝生理食塩液中で吸引排出を繰り返して細胞浮遊液とし、自動血球計数器で細胞数を測定した。g)における左右大腿骨の骨髄細胞数の差、および4~10週齢の正常SDラットの骨髄細胞数を調べた。U/kg/day)をラットに4日間皮下投与し、骨髄への影響の評価における本法の有用性を検討した。より、G-CSF投与群で好中球(分葉核および桿状核)の増加が認められ、細胞の構成比の変化が確認された。以上のように、本法は体重が約60g以上の動物であれば適用可能であること、左右大腿骨間の骨髄細胞数に差はないことが示された。G-CSF投与実験から、本法と骨髄塗抹細胞検査と併用することで骨髄毒性に関する有用な情報が得られることが明らかとなった。日本実験動物総会(2004年)要旨:良質な初期胚を安定して確保するための過排卵誘起法は、胚操作を伴う発生工学研究を支える重要な基盤技術である。本研究では、当研究所で維持するミニブタ(NIBS系)に対する効率的な過排卵誘起法を検討した。供試動物として若齢豚9頭および未経産豚20頭を用いた。IU)を投与するグループIIIを試みた。hCG投与48時間後に卵管灌流もしくは卵巣の排卵点を計測して排卵数を確認した。排卵卵子の一部に単為発生を誘起して胚盤胞期胚への発生率を調べた。若齢豚を用いた試験区では、既発情および未発情豚(3.5ヵ月齢以下)に排卵が誘起されなかったのに対して、初回発情直前の4ヶ月齢豚で過排卵が誘起された(18.7±3.8個/頭)。未経産豚においては、グループIIで効率良く過排卵が誘起された(15.1±5.2個/頭)。単為発生卵は、30%が胚盤胞期胚へと発生した。有用な知見であると思われる。-CSF)は癌化学療法の補助剤などに臨床応用されている。-CSFを分泌発現させ、精製し、生物活性を確認した。HPD31株へと導入した。blotおよびNFS-60細胞の増殖による生物活性測定で確認した。blotより推定したタンパク質量あたりの生物活性はイヌG-CSF(C17S)の方が10倍高く、バキュロウイルス発現ネコG-CSFおよび市販のヒトG-CSFと同程度であった。組換えイヌG-CSF(C17S)を含む培養上清を硫安沈殿により濃縮し、疎水性カラム、イオン交換カラム精製を行って、精製品(比活性:107U/mgタンパク質)を得た。血中の総白血球数は投与1日後から全ての群で上昇した。速やかに元の値へと回復し、臨床症状は観察されなかった。(PRDC)と呼ばれる,種々のウイルス及び細菌性病原体が複雑に関与した慢性呼吸器病の発生が問題となっている。今回,これによると思われる死亡事故が多発した農場において,ApワクチンとMhpワクチンを併用することにより顕著な効果が認められたので報告する。【材料と方法】農場:PRRSV,PCV2,ApおよびMhpの感染が確認されている母豚1000頭規模の一貫経営農場。ワクチン:市販Ap不活化ワクチン(毒素型)及びMhp不活化ワクチンを用法・用量に従って注射。試験:ワクチン無接種,Apワクチン適用及びAp+Mhpワクチン適用の各試験を実施。それぞれ7000~8000頭の子豚を対象に,約1年にわたる死亡事故率および一日増体重等を調査。【結果】ワクチン無接種:死亡のピークは70~80日齢と130~150日齢にあり、出荷までの平均死亡率は約20%であった。Mhpについては,肺にごく軽度の病変が存在した。Apワクチン適用:70~80日齢時の死亡事故は減少し,平均死亡率は12%に低下した。肥育後期にある死亡のピークを抑制することはできなかった。Ap+Mhpワクチン適用:両時期の死亡のピークは抑制され,平均死亡率は5%に低下した。g増加し,平均出荷日齢が4日短縮するなど,生産成績が大幅に向上した。【考察】Mhpは気道粘膜上皮に存在する線毛運動を停止させ,種々の病原体の侵襲を容易にする。今回,Mhpワクチン注射により間接的にApの感染が抑制され,Apワクチンの効果が顕著に表れたと考えられる。病理発生においてSchwann細胞およびマクロファージ(MΦ)が重要な役割を担っていることが明らかになってきている。そこで今回我々は本疾患の病変形成とSchwann細胞ならびにMΦの動態との関連性を免疫組織化学的に検索した。認められなかった群(9,18、31週齢)ではS100β蛋白陽性のSchwann細胞の数に大きな変化はなかったが、加齢とともにCNPase陽性のSchwann細胞数は減少する傾向が見られた。MΦはほとんど検出されなかった。軽度病変が認められた群(57週齢)ではSchwann細胞数に大きな変化は見られなかったが、CNPase陽性細胞数の減少が見られ、MΦがしばしば検出された。重度病変が認められた群(109週齢)ではSchwann細胞数が著明に減少しており、CNPase陽性細胞はほとんど検出されなかった。加齢および病態の進行に伴う変化として、Schwann細胞の減数およびCNPase活性減少を指標とした機能低下、MΦの増数が示された。以上より本疾患の病変形性にはSchwann細胞および、MΦの動態が関与していることが示唆された。日本獣医学会(2004年)要旨:環境ホルモンの鳥類における内分泌攪乱作用を検証できる簡便で有用なスクリーニング法として、演者らはF1(AWE×WE)ウズラ胚を用いた性転換試験法を新たに確立した。第136回本学会においてE2、EEおよびDESの投与用量と卵精巣の出現率および病変の程度がよく相関することを報告し、本試験法がエストロジェン様作用をもつ環境ホルモンのスクリーニングに有用であることを示した。今回は、ウズラのエストロジェンレセプターへの結合活性が示されているNPおよびBPAについて本法の有用性を検討した。【材料と方法】F1(AWE×WE)ウズラ卵の孵卵直前(孵卵0日)の卵白内にNPおよびBPAをそれぞれ200、2,000、20,000、200,000および2,000,000ng/20μLならびに20、200、2,000および20,000ng/20μL投与し、対照群には溶媒(コーン油)のみを20μL投与した。孵卵16日に胚を肉眼的に観察し、生殖器を病理組織学的に検索した。左側の全精巣面積に占める卵巣様組織の面積比率を画像解析システムを用いて計測した。【結果】対照群ならびにNPおよびBPA投与群では全ての生存胚の遺伝的性別(羽装)と孵卵16日の生殖器の性別が一致していた。全てのNPおよびBPA投与群の左側精巣における卵精巣出現率は対照群に比べて有意に高かったが、投与量との関連性はなかった。NPおよびBPA投与群の精巣における卵巣様組織の面積比率についても投与量との関連性はなかった。【考察】今回の結果から、本スクリーニング法がNPおよびBPAのエストロジェン様作用の検出に有用であることが示された(本研究は環境省の支援を受けた)。(PMWS)の主因になるPCV2がある。PCVは一般に豚腎由来株化細胞PK-15を用いて分離・培養されるが増殖性は低く、持続感染となる。我々は豚腎由来細胞におけるPCVの増殖を電顕的に調べた。SKにPMWS罹患豚の臓器乳剤を吸着させた後、グルコサミン処理を施し培養5日目に継代した。2代目以降はグルコサミン非処理で継代し、18代目に0~4日目の上清の感染価の測定ならびに細胞のウイルス抗原(IHC法)と遺伝子(ISH法)の検出を行なった。3および4日目の細胞を採材し、電顕検索を行った。対照としてPCV1持続感染PK-15を4日目に採材し、電顕検索した。【結果とまとめ】4日目の上清中のPCV2の感染価は104.75TCID50/mlであった。抗原は核と細胞質で検出され、ISH法においてPCV遺伝子は同様の局在性を示した。電顕的に少数の細胞に細胞質封入体が観察された。これらは小型(0.25~0.90μm)で、直径14±1nmのウイルス粒子が渦巻き状あるいは結晶状に配列していた。4日目のPCV1の上清中の感染価は104.50TCID50/mlであった。電顕的に少数の細胞に細胞質封入体が観察された。これらの大きさは0.18~2.86μmで、直径14±2nmのウイルス粒子が結晶状に配列していた。今回培養細胞においてPCV2のウイルス粒子を電顕的に初めて確認した。PCV1とPCV2の増殖形態は基本的には同様であった。inclusion"は認められなかった。(2004年)要旨:当研究所では1960年代よりニワトリの実験動物化の一環として、SPFニワトリに関する研究開発をおこない、SPFコロニーを確立し、生産・販売している。本系はこれまでニワトリの種々の疾病研究用、動物およびヒトの種々のワクチン製造用あるいは検定用動物として用いられている。標識遺伝子として特別に固定されているものはないが、3群のローテーションシステムで維持されている。Mより1975年に分離確立したクローズドコロニーWL-M/Oも維持している。factor)活性が陰性で、白血病ウイルスのサブグループ(A~E)のすべてに感受性(C/O)の系統である。この系統はC/ABの系統とともに発生学の研究にも使われている。その他の標識遺伝子としては、特別に固定されているものはない。これらのニワトリとともに、当研究所SPF鶏舎における維持管理システムについても紹介する。brown("D"常染色体、優性)などが報告されている。おいては1964年以来、ウズラの実験動物化についての研究が進められている。2003年、4月、当研究所において、野生型ウズラとは羽装の異なるミュータントが出現した。そこで、我々は、本ミュータントの羽装を調べるとともに、遺伝様式について研究を行なった。これらミュータントは、基本的に、黒色、茶色の2色で構成されており、特徴は次のようであった。出生時において、野生型では、黄色の羽装、背中に3本のほぼ同幅の黒色の縦縞が入るが、これらミュータントでは、全身黒色で背中に3本のほぼ同幅の濃い茶色もしくは不明瞭な縦縞の羽装を示した。おいても同じ羽装を示すため区別することができない。black)と命名した。brown系との交配実験を行なっていく予定である。日本ウイルス学会(2004年)要旨:[目的]BSE検査等における異常型のプリオンタンパク質(PrP)の検出にはいくつかの抗体が使用されているが、非定型BSEの出現や若齢牛におけるBSEの発見、さらに肥飼料原料の安全性確保のための残存異常PrPの検出などに対応するためには、牛PrP特異抗体ライブラリーの充実を図る必要がある。そこで本研究では、牛PrP特異抗体を新規に作製し、その性状を解析したので報告する。[材料と方法]大腸菌発現牛PrP(rbPrP)あるいは合成ペプチドをプリオンレスマウスに免疫し、7個のモノクローナル抗体(mAb)を作製した。各抗体の牛正常PrPに対する反応性を、rbPrPおよびBSE非感染牛の脳乳剤を用いたELISAおよびウエスタンブロット法(WB)により検討した。牛異常PrPに対する反応性は、BSE感染牛の脳切片を用いた免疫組織化学染色および感染牛脳乳剤を用いたWBにより確認した。[結果と考察]mAbのアイソタイプは5個(2B11、2D8、4B5、6C4、6G3-2)がIgG1、2個(1D12、17F11)がIgG2aであった。正常牛PrPに対するELISAでの反応性は2D8以外で同程度に高かった。WBでの反応性は17F11以外は同程度に高く、特に6G3-2はBSE感染牛(和歌山例あるいは神奈川例)の脳乳剤を用いたWBで数ug脳当量に含まれるプロテイナーゼK抵抗性PrPを検出できた。BSE感染牛の脳切片を用いた免疫組織化学染色では1D12>2B11>4B5>6G3-2>6C4の順に反応性が高かったが、2D8と17F11は力価が低かった。2個のmAb(2B11および17F11)を用いた牛PrP検出系(サンドイッチELISA)では、精製rbPrPを数pg/mLのレベルまで検出できた。現在、同検出系で牛異常PrPの検出を試みている。これらの成績より、本研究で作製した抗体は異常PrPの検出に貢献できると考えられた。本研究にプリオンレスマウスを提供していただいた糸原重美先生(理化学研究所)に深謝いたします。