bpのターゲットシーケンスを増幅するためのプライマーが含まれている下記に示す反応液を調製する。free)およびMgCl2溶液をご使用ください。Diceの本体にセットする。以下の条件を設定する。Templateのターゲットシーケンスが増幅される。基本的にはコントロール反応と同じ。extentionの3段階の温度変化を基本してるが、増幅鎖長が長い場合(>=6kb)には、annealingとextentionを兼ねた2段階の温度変化条件(シャトルPCR)の方が適している場合がある。ターゲットシークエンスのサイズ、プライマーのサイズや塩基配列に応じたdenaturation、annealing、extension各ステップの最適条件(温度、時間)をプログラムして反応を行う必要がある。Bufferを1/6量加え、アガロースゲルのスロットに注入し、電気泳動を行う。アガロースゲルの種類、濃度はDNAのサイズ、目的によって使い分ける。よってDNAのバンドを確認する。キットの内容物はvortexにて約2秒よく撹拌し、遠心後使用する。Taqはピペッティング操作で注意深くゆっくりと撹拌する。各内容物は使用直前まで氷上で保存する。Taqの分解を防ぐことができる。plus)のMg2+濃度が至適でない場合がある。free)を用いてMg2+濃度を変えて予備実験し、至適Mg2+濃度を確認する必要がある。