cell:NK細胞)はウイルスに感染した細胞やがん細胞を認識して攻撃する、生体防御の最前線を担っている細胞です。蛍光標識したYac-1細胞(マウスリンパ腫細胞)を標的として細胞障害性を評価します。NK活性評価例C57BL/6マウスにポリIC(PIC)を腹腔内投与し、18時間後に脾臓を摘出し、脾臓細胞を回収した。カルセインAMで蛍光標識したYac-1細胞と共培養し、培養後の培養上清中のカルセインAMの漏出量を測定した。※ポリIC:インターフェロン産生を促進する合成リボ核酸。おける中心的な防御因子は分泌型IgAであり、感染防御や抗アレルギーに関与していることが知られています。・マウスパイエル板細胞を回収、被験物質を含む培養液で培養します。・培養上清を回収し、上清中のIgA量を測定します。・IgA以外にも各種サイトカインも測定することも可能です(オプション)。測定例Balb/Cマウスの腸管よりパイエル板を回収、パイエル板細胞を単離した。被験物質を含む培養液で培養し、培養液中のIgA、サイトカイン:IL-5、IL-6、IL-10量をELISA法で測定した。マクロファージ細胞株の培養液中に、依頼サンプルを添加して細胞を培養します(被験物質処理)。・細胞を回収し、蛍光ラテックスビーズを加えて培養します(貪食処理)。・貪食したマクロファージの割合、貪食したビーズ数を、フローサイトメーターにより測定します。・カルチャースライドを用いて、細胞の貪食像の写真撮影も可能です。:ラテックスビーズを貪食した細胞像(ラテックスビーズを貪食させた後、洗浄・ギムザ染色した。oxide:NO)は、種々の細胞が産生する物質で、産生されたNOは、感染防御で重要な働きを担っていることが知られています。・マクロファージ細胞株の培養液中に依頼サンプルを添加して、培養します(サンプル処理)。・24~72時間後の培養上清を回収します。・上清中の亜硝酸(Nitrite)量をグリエス試薬を用いて測定します。※試験オプション・サンプル中のLPSの作用を排除したい場合は、LPS阻害剤のポリミキシンBと混合して、NO産生能を測定することも可能です。・また、TLR4欠損マウス(C3H/HeJ)の腹腔マクロファージを用いた測定も可能です。・試験濃度で細胞傷害が疑われる場合は、NO産生と同時に細胞傷害性試験を実施することも可能です。編集トップへ戻る閉じる。