gilteritinibによる治療後に残存するAML細胞の分子病態を解析したところ、変異FLT3分子に加えて正常FLT3分子の高発現を認めるAMLクローンが選択的に残存することが明らかになった。実際に正常FLT3分子の発現量が異なる臨床検体に対する増殖阻害活性を比較したところ、正常FLT3分子の発現量に依存して阻害効果の減弱が認められ、これはFLによる正常FLT3分子の活性化機序に依ることが明らかとなった。32D(FL/Wt-FLT3-32D)を樹立した。FL/Wt-FLT3-32D細胞は正常FLT3分子が恒常的に活性化していることによって、IL3非依存性に自律性増殖を示す。gilteritinibの順であったことより、FL依存性の正常FLT3分子を介したFLT3阻害剤の効果減弱効果と相関することが示された。各種変異FLT3を導入した32D細胞を対象としてFLT3阻害剤耐性化モデルを数種類作成し、その中には他のFLT3阻害剤へ交叉耐性を示す耐性株があることを確認した。これら耐性株の一部はFLT3のキナーゼ領域の新規変異を複数同定した。FLT3変異陰性の耐性細胞株においては、FLT3のリン酸化がFLT3阻害剤で抑制されているのにもかかわらず細胞増殖が維持されており、他のFLT3阻害剤に交叉耐性を示す耐性細胞株が存在することを確認し、新規耐性機序としての検討を実施中である。FF-10101をはじめとする各種FLT3阻害剤の増殖抑制効果や耐性機序の評価も予定通り進行している。作成した耐性細胞株から、新たなFLT3阻害剤耐性変異を同定し、そのうちの一部は各種阻害剤に対して交差耐性を示すことを明らかにしたことから、臨床的なバイオマーカーとして有用性が期待される。FLT3遺伝子に変異を伴わない新たな耐性機構を示す細胞株を樹立したことから、この耐性機構の解明は臨床上有益なものになると期待される。現在、詳細な耐性機構の検討、耐性を克服する薬剤のスクリーニングを進めており、当初の計画通りに順調に進展している。Activity前年度からのPDXモデルおよび細胞株を用いたFLT3阻害剤耐性に関与する分子機構の解明を進め、耐性変異に対してはFF10101による克服の可能性を検討する。同定された耐性FLT3遺伝子変異以外の活性化シグナルによる耐性化機構の詳細について、活性化分子の阻害剤やsiRNAによるノックダウンにより耐性機構の存在を実証し、克服するための併用薬剤を選別し、マウスモデルにおいても検証する。DNRなどのアントラサイクリン系薬剤、AraC、Azacitidine、レチノイド、HDAC阻害剤を中心に、FLT3阻害剤との併用効果を、投与順序を考慮しつつ検討する。相乗効果が得られた組み合わせと投与方法のみならず、効果減弱を来す可能性のある薬剤についても検討を行う。