¥274,000¥219,2002019/11/25~2020/03/31※色文字での表示は、キャンペーン価格およびそのキャンペーン期間です。Kitは組換えアデノウイルスの精製を1時間半以内に行えるクロマトグラフィーベースのシステムである。手順は簡便で、スケールアップやスケールダウンも簡単である。Kitのプロトコールは、細胞ペレットから直接、最大量のアデノウイルス精製が可能となるようにデザインされている。2検体および6検体用があり経済的である。プロトコールに超遠心の工程はない。そのかわり、アデノウイルスを選択的に結合するユニークなメンブレン吸着剤を使用するクロマトグラフィーによりアデノウイルスを精製する。Luer-Lokシリンジにフィットする小型の使い捨てカートリッジ内に収められている。このシリンジとフィルターは予め完全に組み立てられているので、すぐに使用できる。一方向バルブを採用しているため、アデノウイルスを含む培地およびフィルターを通過した洗浄液を捨てる際にシリンジをはずす面倒な操作は不要である。アデノウイルスを含む培地を一方向バルブからシリンジ内に入れ、精製フィルターカートリッジを通すように押し出すだけの非常に簡単な操作である。回収から精製までの全プロトコールの所要時間は、わずか1時間から1時間半である(図1)。細胞の形態が完全に変化したら細胞を回収、溶解し遠心する。Nucleaseで処理して核酸を消化し、プレフィルターで清澄化する。次に、ウイルスを含む抽出液を精製用カートリッジを通して押し出す。この時、アデノウイルスがフィルターに結合する。結合したウイルスを少量の溶出バッファーで溶出すれば、操作は完了である。簡略化された新しいプロトコールでは、ウイルスを直接、細胞ペレットから精製する。図2のデータには、ウイルスのほとんどが感染2日目は上清中ではなく細胞内部に存在することが示されている。従って、上清も細胞ペレットと合わせて精製してもプロトコールが不必要に複雑になるだけで、得られるウイルス量はそれほど増加しないと考えられる。kitsから得られるウイルスは、CsCl密度勾配遠心法で得られるウイルスと同レベルの高い力価と純度を示し、ウイルスと感染単位の比率は20:1となっている。CsClを用いる方法と異なり、特別なトレーニングや高価な機器は必要ない。簡単な操作だけで純度の高いアデノウイルスを高収率かつ高い再現性で精製することができる。Kitは、アデノウイルスを最大1012個まで調製することができる。kitsはいずれも、高い回収率(図3)が得られ、ウイルス粒子数/感染単位(IFU)比率が低い高純度・高品質のアデノウイルスを精製可能である。System2を用いて作製)を、MOI=1~2で感染させ、2~4日間培養を行った。293細胞の細胞変性効果(CPE)を感染後2~4日間観察した(図左:光学顕微鏡で観察、図右:DsRED-Express発現による蛍光を観察)。CPEに近い状態が観察されている。パネルB:感染2~4日後の各日に、細胞ペレットとその培養上清からウイルスを調製した。細胞ペレットは新たな培地で懸濁後、凍結融解を3回行い、残渣を遠心操作で除いた。293細胞に感染させた48時間後に、蛍光顕微鏡で細胞数を測定して求めた。感染後の各日数で細胞ペレットと培養上清中のウイルス量を比較したところ、いずれの培養日数に於いても細胞ペレット中に大部分のウイルスが見られ、最大のウイルス量が得られた感染4日目においても培養上清から得られるウイルス量は2%程度に過ぎなかった。293細胞にDsRed-Expressを発現するウイルスを感染させ、完全なCPEに近い状態から細胞を回収した。Kitの操作手順に従いウイルス精製を行った。精製前、カラムを通した吸着バッファー、洗浄バッファー、および溶出バッファーについて、図2と同様の方法でウイルス力価を測定した。精製前(粗精製)の72%のウイルス粒子がカラムより溶出回収でき、1時間で4.68×1010のウイルスが精製された。Nuclease:-20°Cその他のコンポーネント:室温この製品を見た人は、こんな製品も見ています。取扱い製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。して使用しないでください。ための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。