|タカラバイオ株式会社Protocols細胞のシングルセルクローニング方法Cas9タンパク質とsgRNA複合体(RNP)を目的細胞に導入する。RNP導入後、4~7日後に継代し、その時に一部細胞を回収してゲノム編集の可否判定を実施する。631448)を使用する。2でゲノム編集が起こっているpool細胞を用いて、導入後7~10日後からシングルセルクローニングを実施する。ヒント:Cas9遺伝子をPlasmidで導入する場合は、Cas9の活性がしばらく残存している可能性があるため、導入後2週間以上経過してから開始する。cell/wellで播種すると複数細胞の入ったウェルが多くなるため。cell/wellで播種しても差し支えない)。μl/well程度を分注する。細胞観察しながら、シングルセル由来のクローンのウェルを確認する。plate等に移し拡大培養する。各クローンを増やして凍結細胞ストックを作製し、一部の細胞をシーケンス解析用に分取する。クローン化した細胞のシーケンス解析を実施。シーケンス解析用のサンプル調製キットは以下のキットを使用する。