ATCTTGGCCA;GC含量47%)を変異導入プライマーの5'側のオーバーラップ配列として変異導入を試みた。mlを加えて37°Cで1時間振とうした。X-gal)上で培養し、白コロニー(変異体)と青コロニー(バックグラウンド)をカウントした。得られた白コロニー(変異体)10個よりそれぞれプラスミドを調製し、制限酵素で切断を行い、5つの制限酵素サイト(XhoI、NdeI、EcoRV、BglII、BalI)の有無ならびに変異導入の成否(正しく変異導入が起こった場合、プラスミドはそれぞれ一箇所で切断される)を判定した。kbのプラスミドを用いた5つの制限酵素サイト挿入実験では変異導入体(白コロニー)464個に対しバックグランド(青コロニー)は3個で99%の確率で変異導入体が得られた。(10/10)の確率で切断でき、5つの制限酵素サイト挿入を確認した。以上のことより、30塩基の挿入変異においても変異導入プライマーの5’側のオーバーラップ配列を30塩基にすることで、目的サイズのPCR産物が確認できる場合には効率よく変異導入体を取得できることを確認した。注:オーバーラップ配列の鎖長およびGC含量が増加するに伴いPCR産物は得にくくなる。